重组牛γ-干扰素单克隆抗体的研制

为制备针对重组牛γ-干扰素(rBoIFN-γ)的单克隆抗体(mAb),以纯化的原核表达融合蛋白rHis-BOIFN-γ为免疫原,用纯化的rGST-BoIFN-γ为筛选抗原,应用淋巴细胞杂交瘤技术,研制抗rBoIFN-γ的mAb.结果获得13株稳定分泌抗BoIFN-γ mAb的细胞株,命名为1C12、1F7、1G5、3E6、4D5、5E11、5G4、6F8、6G6、7E9、8D3、8F8和9G11.腹水的效价除单抗9G11外,其余效价都在1:80000以上;除5G4 mAb亚类为IgG2b外,其余均为IgG1.Dot-ELISA结果表明,所得单抗只与融合蛋白rHis-BoIFN-γ和rGST-BoIFN-γ反应,而不与其它重组细胞因子和对照细菌反应,显示其良好的特异性.Western blot显示所获单抗能与相应的融合蛋白发生反应,出现特异性务带.同时所获单抗均能与牛IFN-γ标准品反应.13株单抗均为针对rBoIFN-γ的特异性mAb,为进一步研究rBoIFN-γmAb在牛的免疫调控、牛疫病的致病机制及其诊断中的应用奠定基础.     

流式细胞术在活化T淋巴细胞检测中的应用

免疫细胞的活化和增殖是免疫应答产生的一种标志.静止T淋巴细胞经过抗原刺激活化后,表现出一系列的特征,如细胞膜表面活化分子的表达、细胞分裂和产生细胞因子等.近年来,已有利用流式细胞术(FCM)通过检测免疫细胞活化后的特性,来分析抗原特异性免疫应答及其应答规律的报道.论文分别从几个不同的角度综述了FCM在活化T淋巴细胞检测中的应用.     

肠炎沙门菌与鸡蛋:污染机制、危害分析及生物防控

肠炎沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,在全球范围内广泛流行,严重威胁公共卫生和食品安全。食用被污染的鸡蛋或蛋制品是人类感染肠炎沙门菌最主要的原因。肠炎沙门菌可通过水平传播和垂直传播两种途径污染鸡蛋,并且能够利用其独特的分子调节机制逃避蛋清内抗菌成分的杀伤,表现出比其他血清型更强的蛋内增殖能力。鸡蛋内沙门菌的检测是保证消费安全的关键。疫苗免疫和噬菌体应用是降低肠炎沙门菌在蛋内污染,控制病原进入食物链的有效措施。     

姜黄素抑制轮状病毒感染猪肠上皮细胞的作用研究

本研究旨在探讨姜黄素对猪轮状病毒(PRV)感染猪肠上皮细胞(IPEC-J2细胞)的抗病毒作用。以IPEC-J2细胞为试验对象,分别设置阴性对照组、感染PRV(感染复数=0.1)组和感染PRV后姜黄素(20μmol/L)处理组。在感染PRV后观察细胞病变,利用流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)含量,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和病毒滴度测定法检测PRV在IPEC-J2细胞内的复制与增殖。结果表明：与阴性对照组相比,1)PRV感染导致IPEC-J2细胞病变,显著降低细胞活力(P<0.05),极显著上调细胞内ROS含量(P<0.01);2)姜黄素可显著抑制PRV在细胞内的复制与增殖(P<0.05);3)在PRV吸附细胞阶段添加姜黄素显著抑制了病毒的复制与增殖(P<0.05);4)姜黄素在感染前与PRV直接孵育能显著降低感染后病毒的滴度(P<0.05);5)PRV感染显著提高了细胞内黑色素瘤分化相关基因5、干扰素诱导蛋白44样蛋白抗体和干扰素β的mRNA相对表达量(P<0.05),显著降低了细胞内Toll样受体适配器分子1、线粒体抗病毒信...     

生猪屠宰场中沙门菌的传播特点和防控新技术

由肠道沙门菌引起的沙门菌病是一种全球性的食源性人兽共患疾病.猪肉是人类感染沙门菌的常见来源,屠宰生产线是控制沙门菌在食物链上传播的关键阶段.沙门菌的快速检测是生猪屠宰场防控的关键,其中新型检测方法具有灵敏性高、特异性强、快速简便等优点,应用前景好.利用分子分型技术对屠宰生产线上的沙门菌分离株进行追踪溯源可为防控奠定理论...     

单核细胞增生李斯特菌快速检测技术的建立及应用

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是一种重要的食源性人兽共患病原菌,可通过食物链感染人类,严重危害人体健康。因此快速检测食物样品中Lm对于李斯特菌病的防控尤为必要。细胞壁表面蛋白ActA是Lm重要的毒力因子,在前期制备的ActA单克隆抗体的基础上,将其与磁珠进行偶联,并结合李斯特菌显色培养基快速检测Lm。结果表明：抗体最适偶联量为100μg,最佳偶联时间为4 h,细菌最佳富集时间为15 min。在此基础上建立了免疫磁珠快速检测技术,具有特异性强、灵敏度高等优点。综上,该技术可高效检测出食品中的Lm,对预防和控制李斯特菌病的发生具有重要意义。     

利用流式细胞术分析活化T淋巴细胞特性

用多克隆刺激剂PMA和离子霉素体外刺激小鼠脾脏细胞4 h后,检测T淋巴细胞膜表面CD 69分子的表达;用P I标记分析细胞内DNA含量的变化;阻断细胞因子分泌后,检测不同亚群T淋巴细胞内细胞因子的表达。利用CFSE标记细胞,刺激44 h后,检测T淋巴细胞的分裂情况。结果表明：刺激4 h后,绝大多数T淋巴细胞表面表达CD 69抗原。细胞周期分析结果也表明,S＋G2/M期细胞数量明显增多,G1期细胞数量减少。通过固定、破膜、标记等处理后,分别表达IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-12的T淋巴细胞均有不同程度的提高。另外,刺激44 h后,明显检测到T淋巴细胞的分裂。以上结果说明,利用流式细胞术可以从不同的角度检测活化T淋巴细胞的活性。