牛结核分枝杆菌MPB70基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以牛分枝杆菌DNA为模板,克隆了牛分枝杆菌MPB70基因,构建了克隆载体pGEM-MPB70和表达载体pET30a-MPB70,经IPTG诱导在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化。试验结果表明,牛分枝杆菌MPB70基因体外扩增产物与预期值相符,约582 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB70经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为29 kD,蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达85%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性。     

荧光定量RT-PCR方法检测HP-PRRSV JXA1分离株在藏猪、藏梅猪和大约克夏猪体内的动态分布

为了探明高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)JXA1分离株感染藏猪、藏梅猪和大约克夏猪后,病毒在猪体内的分布规律,本研究利用荧光定量RT-PCR技术检测3个品种猪感染4×105TCID50/m L的JXA1分离株后0、4、7和14 d体内的15个器官(心、肝、脾、肺、肾、大脑、小肠、颌下腺、颌下淋巴结、甲状腺、胸腺、支气管淋巴结、肠系膜淋巴结、腹股沟淋巴结和扁桃体)的病毒载量。结果表明,在整个感染期间,藏梅猪和大约克夏猪的15个器官中均检测到JXA1分离株,而藏猪的心、肝、脾、肾、小肠、颌下腺和甲状腺以及感染后14 d的脑中未检测到JXA1分离株;在JXA1分离株感染3个品种猪4、7和14 d,藏猪病毒载量最多的器官分别是扁桃体、腹股沟淋巴结和颌下淋巴结,藏梅猪分别是脾、脾和肺,大约克夏猪分别为胸腺、肺和颌下淋巴结。本研究证实了JXA1分离株在3个品种猪体内的分布规律和器官嗜性均存在明显差异。     

用于山羊痘病毒载体的强痘病毒启动子筛选

为提高重组山羊痘病毒(GPV)中外源基因的表达水平及筛选强转录效力的启动子,本研究选择桑灯蛾昆虫痘病毒42K启动子(42K)、痘病毒合成晚期441启动子(SL441)、痘病毒合成晚期454启动子(SL454)、牛痘病毒(VV)早晚期P7.5启动子(P7.5)、VV晚期P11启动子(P11)、VV H6启动子(H6)、VV合成早晚期启动子(E/L)及人工优化早晚期启动子(LEO)8种启动子,并在其下游插入萤火虫荧光素酶(Fluc)报告基因,分别构建了启动子效力检测重组质粒。并分别将其转染于预感染GPV的DF-1(鸡)、LT(绵羊)、BHK-21(仓鼠)和Vero(猴)4种动物源细胞中,以表达海肾荧光素酶(Rluc)的p RL-TK为内参质粒,24 h后检测荧光素酶活性。结果表明,在LT细胞中,SL441转录效力最强;在DF-1细胞中,LEO转录效力最强,为其他启动子的1.19~14.46倍;在Vero细胞中,H6和SL441的转录效力较强,达到其他启动子的1.21~11.24倍;在BHK-21中,H6启动子的转录效力也显著强于其它启动子。本实验最终确定了GPV在4种动物源细胞中转录效力强的启动子,该研究结果为进一步提高以GPV为载体疫苗的免疫效力奠定了基础。     

采用非洲地区广泛应用的绵羊痘弱毒株构建表达小反刍兽疫病毒H蛋白的重组疫苗

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因的重组绵羊痘病毒(SPV),本研究利用e GFP报告基因和gpt筛选基因筛选纯化了PPRV H基因的重组SPV(rSPV-PPRV-H)。通过PCR、序列测定和间接免疫荧光的方法对rSPV-PPRV-H进行鉴定。结果显示PPRV的H基因重组至rSPV-PRRV-H中并表达PPRV H蛋白;同时病毒的生长曲线也显示外源H基因的插入并未影响亲本病毒的复制。将该重组病毒经皮内注射途径免疫绵羊,免疫剂量为105.5 TCID50,间隔4周,免疫两次,中和试验结果显示rSPV-PPRV-H免疫绵羊后能够诱导其产生高滴度的抗PPRV的特异性中和抗体,抗体转阳率为100%(6/6)。本研究为rSPV-PPRV-H作为PPRV疫苗提供了实验依据。     

干湿交替灌溉对水稻产量、水氮利用效率和稻米品质影响的研究进展

干湿交替灌溉作为一项重要的节水灌溉技术,对水稻产量、水氮利用效率和稻米品质都具有重要影响,且这种影响的正负效应主要由土壤落干的程度决定。本文从稻田土壤理化与生物学性状、水稻根系形态生理特性以及地上部农艺性状与生理特性等方面综述了干湿交替灌溉对水稻产量、水氮利用效率和稻米品质的作用机制,同时简述了干湿交替灌溉与氮肥互作对水稻产量、水氮利用效率和稻米品质的影响;提出了研究存在土壤落干程度监测标准不统一、调控机制阐明不深入等问题,建议今后利用多组学技术解析干湿交替灌溉对水稻茎蘖成穗率的调控机制并基于籽粒淀粉、蛋白质和脂肪代谢开展干湿交替灌溉、氮肥施用等栽培措施对稻米品质形成的调控机制研究。     

三月李及其红肉突变体Aux/IAA家族基因鉴定及分析

为了解Aux/IAA家族基因在李果实成熟过程中的生物学功能,通过生物信息学鉴定三月李及其红肉突变体果实转录组中的Aux/IAA家族基因,并分析其在果实成熟过程中的表达模式。结果表明,三月李及其红肉突变体果实转录组中共有26个Aux/IAA家族成员,大部分为位于细胞核的不稳定亲水蛋白质。系统进化树分析表明,Aux/IAA家族成员可分为A、B 两组,共9个亚组。大部分Aux/IAA蛋白质含有4个高度保守的结构域。16个Aux/IAA家族基因在三月李及其红肉突变体果实成熟过程中差异表达。PsIAA11、PsIAA13、PsIAA14、PsIAA18、PsIAA19和PsIAA25在三月李及其红肉突变体果实成熟过程中的表达模式存在显著差异。上述结果表明,Aux/IAA家族基因与李果实成熟密切相关,这为深入研究Aux/IAA家族基因在李果实成熟过程中的功能奠定了基础。     

宽幅带播对大穗型冬小麦冠层特征及产量的影响

为了解宽幅带播在小麦种植上的应用效果,在大田条件下,以兰考矮早八为材料,研究了宽幅带播种植对大穗型冬小麦冠层特征及产量的影响.结果表明,与常规条播比较,宽幅带播的小麦群体叶面积指数、冠层光截获量和相对湿度较高,而冠层温度较低,穗数显著增加,产量提高0.47％～13.70％.宽幅带播下随着行距增大,叶面积指数、光截获量和湿度降低,而冠层温度升高,穗数和穗粒数减少,千粒重增加,最终产量降低.宽幅带播下15 cm行距可作为大穗型冬小麦品种的适宜行距配置.     

不同水氮处理对小麦耗水特性及产量的影响

为给小麦高产节水栽培提供理论依据,以百农矮抗58为材料,在大田条件下设置3个灌水水平[不灌水(W0),灌1水(W1,拔节水),灌2水(W2,拔节和开花水)]和5个施氮水平[0kg·hm-2(N0)、90kg·hm-2(N1)、180kg·hm-2(N2)、240kg·hm-2(N3)、300kg·hm-2(N4)],研究水氮处理对冬小麦耗水特性及产量的影响。结果表明,随着施氮量的增加,小麦总耗水量和土壤贮水消耗量先增加后降低,以N3处理最高,各种水分利用效率也表现出相似趋势。随灌水次数的增加,总耗水量、土壤水利用效率和降水利用效率均提高,而水分利用效率和灌水利用效率则相反。阶段耗水量均随灌水次数增加而提高,施氮对阶段耗水量的影响因灌水不同而异,其中,N2和N3处理在拔节至开花期的耗水量较高,而在开花至成熟期则较低。籽粒产量随施氮量增加呈先升后降趋势,随灌水次数增加则持续提高。综合考虑产量和生产成本,W1N3处理为本试验条件下节水高产的水氮运筹推荐模式。     

虾夷扇贝脓胞病病原查氏弧菌的PCR快速检测

应用PCR技术,建立一种能够快速有效检测出虾夷扇贝脓胞病致病病原查氏弧菌的方法。根据查氏弧菌的GyrB基因的高保守区序列,设计1对扩增片段为144 bp的引物,并利用PCR技术对其进行了特异性和敏感性检测。试验结果表明,该方法对查氏弧菌DNA的检测呈特异性,每个PCR反应检测的敏感度为0．43 pg的DNA和3．9 cuf的细菌。由人工感染和海区取样的虾夷扇贝的病灶组织中可以检测出相应的病原菌,说明本方法有效可行。     

河蟹养殖中石油烃污染调查及评价

2013年至2016年针对辽宁省河蟹主产区中养殖水质、底质及河蟹产品中石油烃含量进行测定,利用单因子污染指数法对养殖环境和河蟹中石油烃污染程度进行安全性评价。结果表明:水质中石油烃含量总体平均值为0.056 mg/L,平均污染指数为1.11;底质中石油烃含量较小,平均污染指数为0.039;河蟹中石油烃含量总体均值为7.27 mg/kg,平均污染指数为0.48。河蟹养殖水质已经受到石油烃污染,底质未受到石油烃污染,河蟹产品总体未受到石油烃污染,食用安全风险较小。