甘露寡聚糖和粪链球菌对雏鸡和哺乳仔猪血液SOD和GSH-px活性的影响

试验一设 ４ 组,其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在雏鸡每千克日粮中添加２ ｇ 甘露寡聚糖、０．０６ ｇ 粪链球菌剂和２ ｇ 甘露寡聚糖＋ ０．０６ ｇ 粪链球菌剂,对照组为基础日粮．试验期为６ 周．结果表明,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组雏鸡血液中 Ｓ Ｏ Ｄ 和 Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 活性均极显著高于对照组（ Ｐ＜ ０．０１）, Ｓ Ｏ Ｄ 含量分别提高１１．５％ 、１２．１％ 和１４．０％ , Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 含量分别提高 ９．６％ 、８．１％ 和９．８％ ;而各试验组之间差异不显著（ Ｐ＞ ０．０５）．试验二在集约化猪场中挑选胎龄、产仔时间一致的初生仔猪６ 窝,每窝选择体重一致、健康仔猪６ 头,共３６ 头,分 ３ 组,每组１２ 头．从出生第２ 天开始,试验Ⅰ组每头仔猪每次灌服２５０ ｍ ｇ 甘露寡聚糖,试验Ⅱ组每头仔猪每次灌服１ ｇ 粪链球菌剂,对照组仔猪灌服生理盐水,隔天灌服１ 次,试验期为 ３０ ｄ．结果表明,口服甘露寡聚糖和粪链球菌均可极显著地提高哺乳仔猪血液中 Ｓ Ｏ Ｄ 和 Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 活性（ Ｐ＜ ０．０１）, Ｓ Ｏ Ｄ 含量分别提高了１０．４％ 和６．４％ , Ｇ Ｓ Ｈ ｐｘ 含量分别提高了２４％ 和１４．５％ ;试验Ⅰ组和Ⅱ组之间差异不显著（ Ｐ＞ ０．０５）．２ 个试验结果说明     

猪嵴病毒福建株3D基因的克隆及遗传进化分析

根据GenBank中登录的猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)3D基因序列特征设计特异性引物,采用RT-PCR方法从福建省某猪场采集腹泻粪便样品和小肠组织混合物中扩增猪嵴病毒3D基因,将扩增后的目的片段克隆后进行序列测定。结果表明,所扩增的目的片段编码有完整的3D开放阅读框,全长为1 407bp,编码有468个氨基酸。运用生物信息学软件,将获得3D基因序列和GenBank的猪嵴病毒株3D基因序列进行分析比较,该毒株的3D基因序列和SH-W-CHN/2010/China毒株的核苷酸同源性最高,为93.6%,与WH1株核苷酸同源性最低,为92%。从遗传进化上看,猪嵴病毒和其他中国株在遗传进化上处在一个同一分支,匈牙利分离株处在另一分支,表明猪嵴病毒可能在欧亚大陆上各自独立进化。     

副猪嗜血杆菌oppA基因的克隆、表达及间接ELISA检测方法的建立

采用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌(Hps)的寡肽结合蛋白(Opp A)基因,序列测定结果表明,扩增片段全长1654 bp.将扩增片段插入表达载体p GEX-6P-1中,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果表明,重组融合蛋白大小约为87 ku,以纯化的重组蛋白Opp A作为抗原,建立Hps抗体的间接ELISA检测方法.通过试验确定最佳的反应条件为:抗原包被浓度为1.0μg·孔-1,于37℃包被1 h,待检血清的稀释度为1∶50,阳性判断标准(D450 nm)大于0.643.特异性和重复性试验结果表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和稳定性,可用于Hps抗体的检测.     

猪圆环病毒Ⅱ型单克隆抗体的制备及应用

【目的】制备猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体,并对其进行鉴定和应用。【方法】以超离纯化的猪圆环病毒Ⅱ型作为免疫原,按常规方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,经间接ELISA筛选获得了2株分泌PCV2-Cap蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为8-60和10-48,对其生物学特性进行鉴定,并将其作为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。【结果】8-60和10-48的染色体数平均为98～105对,间接ELISA检测其细胞培养上清液效价分别为1∶16和1∶32,小鼠腹水效价分别为1∶3×212和1∶3×213,抗体的免疫球蛋白亚型均为IgM。间接免疫荧光结果显示,8-60和10-48能与PCV2发生反应;利用这种特性,建立了能诊断PCV2病原的间接免疫荧光诊断方法,实际应用结果表明,其诊断结果与PCR方法诊断结果基本一致,阳性和阴性的符合率分别为93.75%和100%。【结论】以制备的猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)Cap蛋白单克隆抗体为一抗,建立了间接免疫荧光诊断方法。     

猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立

根据GenBank中登录的猪轮状病毒(PoRV)VP6基因序列特征,设计特异性的引物和探针,条件优化后,建立检测PoRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明:建立的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法敏感性高,最低可检测192拷贝·μL~(-1);特异性强,对猪常见病原(如猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒等)检测均为阴性;重复性好,扩增相关系数为0.999,其组内和组间变异系数分别为0.25%~1.26%和0.31%~1.49%.对临床收集的79份猪腹泻病料进行常规RT-PCR检测,检测出阳性样品4份,阳性率为5.06%(4/79);对这79份病料进行TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测,检测出阳性样品6份,阳性率为7.59%(6/79);同时,4份经RT-PCR检测为阳性的样品经TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测均为阳性,符合率达100%.本研究建立的方法为PoRV早期感染诊断提供检测手段.     

猪瘟病毒E2基因和牛疱疹病毒Ⅰ型UL49基因的共表达

为了探讨牛疱疹病毒Ⅰ型（BHV—1）UL49基因编码的膜蛋白VP22对猪瘟病毒E2基因表达水平的影响，构建了单独表达E2蛋白的pcDNA3．1-E2及融合表达E2-VP22的pcDNA3．1 E2-UL49。将pcDNA3．1-E2与pcDNA3．1-E2-UL49分别转染293T细胞，间接免疫荧光试验结果显示，单独表达E2蛋白的细胞，其荧光主要固缩于核周，而融合表达E2-VP22蛋白的细胞在核周及细胞质内都有大量的荧光；Western-blot分析结果显示，VP22蛋白与E2蛋白都获得了表达．但融合了VP22蛋白的E2蛋白表达量要相对高一些（P〈0．01），表明VP22蛋白可以促进E2蛋白的表达。     

大肠杆菌多价灭活苗免疫雏鸡抗体消长规律

随着集约化养鸡业的不断发展,鸡大肠杆菌病已成为影响养鸡业经济效益的主要疫病之一.生产中抗生素的广泛应用,使得许多大肠杆菌成为耐药菌株,使药物防治效果越来越差,再者大剂量使用抗生素造成的动物性产品药物残留问题也引起了人们的广泛关注.尽管致病性大肠杆菌的血清型繁多,但对于特定地区感染鸡群的主要菌株的血清型一般不会很多,这就为采用主要血清型致病性菌株研究制成菌苗进行免疫预防提供了可行的办法.本试验的目的是应用3种不同佐剂的大肠杆菌多价灭活疫苗免疫雏鸡后,在不同时间测定鸡体内抗体的变化规律,并在一定的时间利用与菌苗同血清型的致病性菌株进行攻毒试验,以确定不同疫苗的免疫保护期、抗体变化规律和免疫保护效果,为免疫预防该病提供理论依据.     

一株猪链球菌的分离与鉴定

从疑似发生猪链球菌病患猪的肺脏和淋巴结中分离到1株细菌。该细菌经形态学观察、培养特性、溶血试验、生化试验和动物试验鉴定为偏向厌氧型链球菌。该菌株对小白鼠存在致病性。药敏试验表明：分离菌株对阿莫西林和先锋V高度敏感,对菌必治、呋喃妥因、磺胺类药中敏,对青霉素、链霉素、卡那霉素和恩诺沙星等药物不敏感。     

传染性法氏囊病毒中和单抗初步应用研究

用两个抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)中和性单抗——FM20和FM29的混合物( 灭囊灵),对人工感染发病和自然发病鸡群进行被动免疫治疗和免疫保护试验.试验结果表明,人工感染发病鸡分别注射20 μg·ml-1和40 μg·ml-1的灭囊灵,在 24 h 后,对照组全为阳性鸡,试验组全部阳性鸡均转为阴性鸡,转阴率达100%,以40 μg·ml -1作肌肉注射,被动免疫保护期达8 d以上;对野外自然发病鸡群肌注40 μg·ml- 1,治愈率达90%以上.初步应用结果表明,这些单抗(灭囊灵)在被动免疫治疗和预防方面具有很高的实用价值.     

副猪嗜血杆菌福建株的分离与鉴定

副猪嗜血杆菌(Hps)引起猪的多发性浆膜炎和关节炎,该病又称为革拉斯氏病(Glasser's Disease),被证实是由副猪嗜血杆菌所引起。副猪嗜血杆菌影响2周龄到4月龄的青年猪,主要在断奶后和保育猪阶段发病,通常见于5~8周龄的猪,发病