灰飞虱β3-微管蛋白 cDNA的克隆及序列分析

抽提灰飞虱 RNA,利用 RT- PCR技术,克隆了灰飞虱体内β 3-微管蛋白基因部分序列.进一步通过 3'- 和 5'- RACE获得了全长.序列分析表明,该基因 (LSTUB3) 长 1 859 bp,编码的蛋白含 454个氨基酸,分子量约为 51 kDa;类似于其他昆虫的β-微管蛋白, LSTUB3含有 2个氨基酸保守区 NNWAKGHY和 RKAFLHWYTGEGMDEMEFTEF.另外, LSTUB3还具有 1个由 6个氨基酸组成的β 3-微管蛋白特征性的插入序列 CASRGG.结合已发表的其他昆虫该基因的序列,构建了分子系统树,系统分析表明 LSTUB3与其他昆虫的该基因序列有较高的同源性,达 85.7%以上.     

矮牵牛DFR-A基因的克隆与表达分析

通过分离矮牵牛DFR-A基因,研究其在不同部位的表达规律和酶活性变化,为花色素苷合成的结构基因分离及其他研究奠定基础。基于已公布的矮牵牛DFR序列,直接从矮牵牛花瓣中分离了DFRA基因序列,利用实时荧光定量PCR技术研究其在不同器官中的表达特性,同时测定了不同器官中的DFR酶活性。（1）矮牵牛DFR-A基因cDNA序列为1473 bp,该基因最大开放阅读框为1143 bp,编码380个氨基酸。（2）DFR-A基因在矮牵牛各种器官中均有表达,但不同组织中表达量存在差异,在花药中的表达量最高,其次是初开和盛开花瓣中,各期花蕾中的表达量都较低,而在叶中表达量最低。（3）DFR酶在叶片及花药中几乎无活性。在初开花瓣中达到最高峰。（4）除花药以外的部位,DFR酶活性与DFR mRNA浓度存在线性相关性。矮牵牛DFR酶活性主要受转录调控,活性在初开花瓣中最高。     

黄瓜序列特征性扩增区域标记(SCAR)的开发

黄瓜的分子标记连锁图谱研究已经到了比较和整合的阶段,然而可用于黄瓜作图的锚定标记却并不多.本研究利用华北类型和欧洲温室型黄瓜自交系S94和S06作为PCR模板,通过将二者差异的RAPD和SRAP条带克隆、测序并根据测序结果设计特异引物,成功获得了118个SCAR标记.经4个典型黄瓜种质材料PCR验证,引物多态性比例高达10%以上.本研究获得的SCAR可望用于黄瓜遗传图谱的构建和整合.     

黄瓜果实EST-SSR标记的开发

黄瓜EST序列数量的迅速增加为开发新的SSR标记提供了宝贵的数据资源.本研究从GeneBank上公布的黄瓜EST序列中检索到902条来自果实的序列,利用SSRIT软件分析得到63条包含SSR的EST序列,设计了37对EST-SSR引物,结果显示有9对引物在7份黄瓜自交系上扩增有多态,占所设计引物总数的24.3%,平均等位变异数为2.1个,7份自交系间C8和S06遗传相似系数最小为0.22.有27对引物在3份甜瓜上有扩增产物,其中1对引物扩增有多态.这为今后黄瓜基因组研究奠定了一定基础.     

黄瓜M基因连锁的SRAP分子标记

本文利用黄瓜雌雄异花同株自交系S52(来源于大别山农家的品系)与两性花自交系H34杂交组合的F2代群体,运用SRAP技术,采用分离体分组混合分析法(BSA)对单性花(M)基因进行定位,找到一个与M基因间距为17.8cM的SRAP标记ME23SA4。     

导入模糊多基因提高上农香糯抗病性的研究

本文报导了以上农香糯为受体植物,用吸涨法、组织培养法和花粉管通道导入等方法将小牛胸腺 DNA 导入上农香糯.所得结果表明:1.外源 DNA 能增加剑叶宽度;2.外源 DNA(模糊多基因)能使上农香糯对稻瘟病和白叶枯病的抗性提高.对照对稻瘟病为8级感病,白叶枯为中感,而导入模糊多基因后的上农香糯对稻瘟病的感病性已降至7级和6级,对白叶枯病已为中抗.     

适合设施栽培的青菜新品种"新夏青2号"的选育

青菜新品种"新夏青2号"是在广泛收集种质资源的基础上,利用两个基因型纯合、综合性状优良、抗病性均较强的自交不亲和系P60-440和P70-25杂交选育而成的.该品种为中矮箕类型,叶绿色,椭圆形,叶面光滑,叶柄宽、绿色,生长势强,具有较强的抗病、抗逆性,可在大棚、防虫网室等设施内栽培,夏秋季播种后20～40 d可采收.     

辐射花粉授粉诱导黄瓜单倍体

实验采用辐射花粉诱导黄瓜单倍体的方法,研究了辐射剂量(150,300Gy)和基因型在黄瓜单倍体诱导中的影响。结果发现基因型、辐射荆量都对植株再生率有极显著的影响。对相同基因型,不同剂量的植株再生率而言,150Gy总体上效果好于300Cy。对相同剂量,不同基因型的植株再生率而言,经150Gy辐射花粉授粉处理的7307植株再生率最高。0548植株再生率最低。对不同荆量,不同基因型而言,低剂量(150Gy)对4种基因型的植株再生率影响较大。而高剂量(300Gy)对4种基因型的植株再生率的影响处于两个极端。     

黄瓜离体培养再生技术及农杆菌介导的ACS1转化

利用诱导分化培养基(MS BA 1.5mg·L-1 ABA 0.5mg·L-1 AgNO3 2.0mg·L-1 蔗糖30g·L-1 琼脂5.8g·L-1,pH5.8)对26个黄瓜自交系的子叶进行离体再生培养,其中的S52、S94、S04、S17S44和S47等6个自交系具有较高的不定芽分化率,最高达93%(S44),最低为57%(S94)。除草剂PPT对这6个材料再生分化的抑制程度品种间差异较大。以S52(ff)的子叶为外植体,以pEZT-ACS1为中间载体,利用优化的S52诱导分化培养基MS BA 2.0mg·L-1 ABA 2.0mg·L-1 AgNO3 2.0mg·L-1进行农杆菌(LBA4404)介导的遗传转化,选择培养基中PPT浓度为2.0mg·L-1,生根培养基中PPT浓度为1.0mg·L-1,获得抗性再生苗,经PCR检测有15株为阳性株,炼苗移栽到温室。