解磷菌株黑曲霉PSFM发酵条件优化研究

【目的】利用液体培养法探究不同碳源、氮源、无机盐和微量元素浓度以及发酵时间、温度、初始pH、转速、接种量等条件对解磷菌解磷特性的影响,获得解磷菌的最佳发酵培养基和培养条件。【方法】采用单因素及正交试验法,对一株分离自土壤的解磷真菌黑曲霉（Aspergillus niger）PSFM菌株的基础发酵培养基和发酵条件（发酵时间0～10d、温度20～40℃、初始pH值3.0～11.0、接种量1%～11%、转速120～300rpm）进行优化,测定其发酵液吸光度值,以解磷量的高低作为评价发酵培养基及发酵条件优劣的指标。【结果】分别在无机磷和有机磷液体培养基、简单培养基（SP）、NBRIY、NBRIP、NBRIYP培养基中培养6d后,以无机磷液体培养基的PSFM菌株解磷能力最高,解磷量为526.42mg/L。在12种不同碳源培养基中,PSFM均能正常生长,其解磷能力由大到小依次为：木糖〉葡萄糖〉乳糖〉蔗糖〉麦芽糖〉半乳糖〉山梨糖〉甘露糖〉果糖〉可溶性淀粉〉鼠李糖〉甘油。以硝酸钠、尿素、酵母浸膏、氯化铵、硝酸镁、硝酸铵、色氨酸、乙酸铵、牛肉浸膏、胰-蛋白胨、甘氨酸、酪氨酸、丙氨酸和精氨酸为氮源时,硫酸铵为唯一氮源的解磷效果最好,菌株PSFM发酵液中有效磷含量最高（990.31mg/L）。菌株PSFM的解磷能力均随着最佳培养基中NaCl、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O和MnSO4·7H2O浓度的增加呈先提高后降低趋势,当其浓度分别为0.03%、0.01%、0.03%、0.001%、0.001%时,菌株PSFM的解磷能力均最强。在不同发酵条件下,以发酵6d、温度28℃、初始pH6.0、5%接种量、转速300rpm的PSFM解磷能力最强,解磷量分别为599.24、528.23、603.69、530.57和731.48mg/L。【结论】最适合PSFM菌株的基础发酵培养基为无机磷液体培养基,碳源为1.0%木糖,氮源为0.10%硫酸铵,最佳无机盐配方为：NaCl0.10g/L、KCl0.70g/L、MgSO·47H2O 0.70g/L、FeSO4·7H2O 0.01g/L、MnSO·47H2O 0.01g/L;最佳培养条件为：温度28℃,初始pH6.0,转速180rpm,接种量5%,发酵时间为6d。     

魔芋胶-甲硝唑骨架片的制备及体外释药特性研究

［目的］探讨骨架片体外药物释放的影响因素及其药物释放特性。[方法］以甲硝唑为模型药物,采用湿法制粒压片制备魔芋葡甘聚糖（KGM）-甲硝唑骨架片,以释放度为指标,研究了骨架材料含量、KGM粒度、释放介质pH值、离子强度以及不同转速对KGM-甲硝唑骨架片体外释药的影响。［结果］辅料片在蒸馏水中的溶胀度最大,在pH值为6.8的PBS中次之,在0.1 mol/L HCl中最小。KGM粒度对释药的影响不大。在10%-20%的范围内,骨架材料含量越高,缓释效果越好。骨架材料含量为20%时,12 h后药物的累积释放率为85%。在0.1 mol/L HCl中,2 h后KGM-甲硝唑骨架片中的药物几乎全部释放。药物释放速度随介质离子强度的增强而加快。转速大时,药物释放快,转速越小,药物控释越好。［结论］魔芋葡甘聚糖具有较好的缓、控释特性,是一种极有发展潜力的新型药物制剂辅料。     

MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性

［目的］建立一套适合于实验室高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型。［方法］通过MTT法,对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术等8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC7721的活性进行初测;描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况。［结果］受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但萎缩,边缘清晰化,与生长状况良好的细胞形态有明显区别;浓度为1.0~1.5mg/ml的甘草乙醇浸提液（ESCG）、莪术乙醇浸提液（ESCC）和柴胡乙醇浸提液（ESCB）对体外培养的肝癌细胞SMMC7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%,且抑制作用随着浓度的增加而加强。［结论］MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型。     

MTT法测定8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721活性

[目的]建立一套适合于实验室的高效、快速的体外抗肝癌活性物质筛选模型.[方法]首先,选用乙醇为溶剂对芸香草、半边莲、蜜蒙花、甘草、地榆、柴胡、旱芹和莪术8种中草药植物材料进行浸提.然后通过MTT法对8种中草药体外抗肝癌细胞SMMC-7721的活性进行仞测.试验采用二甲基亚砜(DMSO)与甘氨酸-NaOH缓冲液作为溶剂,消除剩余培养基对吸光值的影响.为确保细胞株最大吸收峰位置不变,酶标仪采用570 nm波长测定OD值.为验证筛选出的3种物质对癌细胞的抑制作用,以活性物质浓度为横坐标,细胞生长抑制率为纵坐标,描绘肿瘤细胞生长曲线,倒置显微镜观察细胞不同阶段的生长状况.[结果]倒置显微镜下观察3种细胞阶段的形态:正常状态下,细胞的透明度大、折光性强、轮廓不清;当细胞受污染时,折光性变弱,胞质中常出现空泡、脂滴、颗粒样物质,细胞之间空隙加大,细胞变得不规则,失去原有特点;而受活性物质作用细胞尽管仍然贴壁,但其萎缩,边缘清晰化;三者之间存在一定区别.MTT法培养板定性检测显示,柴胡、莪术、甘草细胞培养孔内的液体颜色都较浅且比较均匀,可见,它们对细胞生长具有明显的抑制作用.而半边莲培养孔内液体颜色深浅不一.还有一些培养孔内液体颜色较深,如卤地菌、蜜蒙花、地榆和旱芹,表明它们对细胞生长没有明显的抑制作用.进一步定量计算表明,浓度为1.0～1.5 mg/ml的甘草乙醇浸提液(ESCG)、莪术乙醇浸提液(ESCC)和柴胡乙醇浸提液(ESCB)对体外培养的肝癌细胞SMMC-7721有较强的抑制增殖作用,抑制率分别为51.6%、48.5%和52.9%.甘草、柴胡和莪术3种物质的抑制作用曲线结果也验证了它们对细胞生长有明显的抑制作用,并且抑制程度与浓度呈正相关.[结论]MTT法筛选可作为重要抗肿瘤的1个基本筛选模型.     

橡胶炭疽菌菌丝生长和孢子萌发与碳、氮源关系的研究

[目的]探讨不同碳源和氮源对橡胶炭疽菌菌丝生长和孢子萌发的影响。[方法]采用查理固体培养基和孢子悬浮液培养,通过对菌丝生长和孢子萌发的测定试验,研究10种碳源和9种氮源对橡胶炭疽菌菌丝生长和孢子萌发的影响。[结果]菌丝生长试验表明,乳糖、D-果糖、葡萄糖、甘油、D-木糖5种碳源培养基的菌丝体生长量较好,生长量均≥7.87mm/d,L-山梨糖碳源培养基则效果较差;硝酸钠、甘氨酸、L-赖氨酸、L-组氨酸4种氮源培养基的菌丝体生长量较好,其生长量≥8.00mm/d,硫酸铵、硝酸铵、氯化铵、L-半胱氨酸氮源培养基则效果较差。孢子萌发试验说明,橡胶炭疽菌能较好地利用各种碳源和氮源,孢子萌发率最低的是在甘油碳源溶液中。[结论]对菌丝体生长和孢子萌发最有利的碳源是葡萄糖,对菌丝生长和孢子萌发较好的氮源有硝酸钠和L-组氨酸。     

木薯地毯草黄单胞菌转化子T-DNA插入模式分析

随机挑取30个已构建的木薯地毯草黄单胞菌(Xanthomonas axonopodis pv.manihotis)Tn5转化子,利用hi Tail-PCR技术获得Tn5转座子插入位点的侧翼序列64条。其中,有19个转化子获得了插入位点左右两端的侧翼序列,11个转化子获得了单侧侧翼序列。序列分析结果发现,插入位点集中在低GC含量区,特别是49%~50%的区域;Tn5转座子倾向于插入基因编码区内;Tn5转座子的插入会形成9 bp正向重复序列,且插入方向没有偏好性,9 bp正向重复序列的上下游碱基位点中,-5,-2,1,4,5,6,9,11位可能对转座酶的识别起关键作用。     

毛管力供给肥水条件下营养液浓度对番茄植株生长和果实品质的影响

为了解毛管力供给肥水条件下营养液浓度对番茄生长发育的影响,以"浦红968"番茄为试材,采用毛管力供给营养液技术,研究在营养液浓度分别为1.0、2.0、3.0、6.0mS/cm下,植株生长、果实品质和矿质元素消耗状况。结果表明,随着营养液浓度的增大,番茄的株高、茎粗、叶片数、叶片面积、叶绿素含量和净光合速率以及果实中可溶性固形物、可滴定酸、果糖和总糖含量均增大,但产量下降、果径减小。营养液浓度为3.0mS/cm的处理相对于其他处理,糖、可溶性固形物和番茄红素含量较高,可滴定酸含量较低,果实品质最好。以营养生长较好、果实品质最佳为标准,确定在毛管力供给肥水的条件下,番茄适宜的营养液浓度为3.0mS/cm,在整个生长期,单株番茄元素消耗量为N 5.71g、K 4.69g、Ca 4.54g、Mg 2.48g、P 1.87g。     

蜜蜂活动增强剂保丽蕊在蓝莓作物上的应用效果

[目的]探究蜜蜂活动增强剂保丽蕊对蜜蜂活动、蓝莓坐果率及产量的影响。[方法]在近蜂房处和远蜂房处设立试验区和对照区,在5 min内对蜜蜂的访花次数进行调查;在蓝莓种植园设置试验区和对照区,调查蓝莓坐果率及产量。[结果]保丽蕊能明显提高蜜蜂访花频率,5 min内,近蜂箱处,试验区、对照区蜜蜂访花次数分别为5.3、2.2次;远蜂箱区,访花次数分别为3.5、1.0次。蜜蜂活动增强剂保丽蕊能明显提升蓝莓坐果率及作物产量:离蜂房50、100 m处,试验区较对照区蓝莓坐果率分别提升54.6%、66.1%;试验区较对照区蓝莓产量能提高21.43%。[结论]蜜蜂活动增强剂保丽蕊能够明显增强蜜蜂活动,提高蜜蜂对蓝莓的授粉效果,增加蓝莓坐果率和产量。     

农学专业“卓越农艺师”人才培养标准探析

根据"卓越农艺师"人才培养目标和培养内容,从基础知识、综合素质和专业能力等方面探索了"卓越农艺师"人才培养标准和要求,以及学校和企业关于"卓越农艺师"人才培养的考核要求与方式,旨在为新形势下农学专业培养模式改革提供参考。     

双变量施肥机的设计与试验

【目的】为解决传统均匀施肥结构不合理,作物养分投入比例失调,化肥利用率偏低,环境污染严重等问题.【方法】设计了一种可与国产拖拉机配套使用的变量施肥机,该施肥机采用一体三箱式的结构,外槽轮作为变量施肥机的排肥装置,通过调节外槽轮排肥器的转速和开度.【结果】在外槽轮排肥器开度不变的情况下,增加排肥器转速,排肥量也随之增加,但不呈线性增加的趋势;在外槽轮排肥器转速不变的情况下,增加排肥器开度,排肥量也随之增加,也不呈线性增加的趋势.【结论】该研究解决了传统均匀施肥结构不合理,可为提高施肥机的施肥精度提供参考.