应用竞争PCR定量检测猪IFN-γmRNA

运用RT-PCR从经ConA体外刺激培养的猪外周血单核细胞(PBMC)提取的细胞总RNA中扩增猪γ-干扰素(IFN-γ)的部分片段,经酶切鉴定后双酶切缺失中间一小片段,将余下的2个较大片段连接,并用相同的引物在相同条件下扩增连接产物,从而获得截短的同源性片段.将其纯化后克隆于pMD18-T载体,重组质粒经酶切和PCR鉴定后进行序列测定,验证无误后作为竞争性模板内对照,一定比例稀释后分别与等体积经刺激培养的PBMC总RNA反转录产物进行PCR,产物电泳后经扫描分析获得各目标条带与竞争条带的溴化乙锭(EB)嵌入光密度值(IOD),经校正后取上述两者比值的对数值作为Y轴,取已知竞争模板相应浓度的对数值作为X轴,绘制成竞争曲线.应用建立的竞争PCR对不同样品重复试验表明,本方法操作简单,结果可靠,稳定性高,适用于猪IFN-γ mRNA的定量检测.     

鸡传染性法氏囊病双价细胞苗接种鸡的免疫形态学观察

传染性法氏囊病(IBD)双价细胞疫苗免疫接种鸡未出现任何病理性损伤,法氏囊内无病毒抗原存在,仅见免疫器官有免疫活性细胞的增殖性反应。接苗后13天出现沉淀抗体。接苗后7～10天,外周淋巴器官中 T、B 细胞开始升高,17天,T、B 细胞均达到增殖高峰,耐受了强毒攻击,产生了强烈的免疫应答。强毒对照鸡法氏囊严重出血、坏死,且有大量的病毒性抗原,本试验为该疫苗在生产中使用的安全性及免疫效果提供了形态学依据,同时也对该病的免疫发生、免疫性质进行了讨论。     

接种鸡传染性贫血病病毒鸡胸腺超微病理形态学变化

以鸡传染性贫血病病毒MSB1-TK5803株接种SPF鸡后6～10天可见胸腺淋巴细胞轻度减少,胸腺成淋巴细胞肿胀,核不规则,核内有高电子密度的包涵体;接种后13～14天,胸腺淋巴细胞明显减少,坏死,核内包涵体呈环形;接种后16～18天,胸腺淋巴细胞几乎完全消失;接种后24～32天,可见淋巴细胞再生现象。     

鸡传染性贫血病病毒的鉴定

从现地肉鸡群分离出的鸡传染性贫血病病毒(CIAV)分离物接种SPF鸡制备的组织乳剂上清中的CIAV可在MDCC-MSB1细胞上增殖。接毒细胞培养物能耐氯仿和70℃15分钟处理;用以接种11周龄无CIAV抗体的SPF鸡,可诱导产生抗MSB1-TK5803株CIAV抗体;用以接种1日龄SPF鸡可产生CIA的临床症状和病理变化,证明该病毒分离物为CIAV。     

H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫产生期内T淋巴细胞表型亚类的检测与研究

采用免疫荧光法、使用流式细胞检测仪对经H9亚型禽流感病毒人工感染SPF鸡、H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫SPF鸡以及经免疫后使用H9亚型禽流感病毒攻毒后的SPF鸡外周血、脾脏、胸腺中T细胞表型亚类(CD4+、CD8+、TCR1+)的变化规律进行了监测,结果表明,H9亚型禽流感油乳剂灭活苗免疫后抗原的缓慢释放可在一定程度上激发机体的细胞免疫应答,使免疫活性T淋巴细胞得到活化,免疫后鸡体外周血中CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现出一明显升高的过程;同时,人工感染免疫鸡后,脾脏和胸腺TCR1+T细胞的数量上升,外周血CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量少量降低或维持不变,随后短期即恢复正常;而人工感染SPF对照鸡后,外周血CD4+、CD8+和TCR1+T细胞的数量呈现下降趋势.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白在重组牛痘病毒中的表达与鉴定

为重组表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)M蛋白,本研究将RT-PCR获得的PRRSV CH-1a株M蛋白基因,克隆于pMD18-T载体中,经测序鉴定正确后,亚克隆至牛痘病毒重组转移质粒pSC11中,构建了转移重组质粒pSC11-PRRSV-M。将pSC11-PRRSV-M在脂质体的介导下转染WR株牛痘病毒感染的TK-143细胞,在含有X-gal的琼脂培养基上通过蓝斑筛选含有PRRSV M基因的重组病毒rWR-PRRSV-M。Western blot与IFA检测表明,重组病毒成功表达了PRRSV M蛋白,而且所表达的蛋白保持了良好的免疫原性。动物实验表明,rWR-PRRSV-M所表达的PRRSV M蛋白在免疫小鼠体内诱生了抗PRRSV的抗体。rWR-PRRSV-M的构建,为进一步探讨PRRSV M蛋白免疫原性提供了基础数据,也为PRRS重组活载体疫苗的研究奠定了基础。     

马传贫强毒攻击穴位注苗马的形态学观察

穴位注射马传贫弱毒苗马２２匹，分别在注苗后２、３、６个月用马传贫强毒攻击，３个月后迫杀。经病理学与免疫形态学联合检查表明，攻毒马有三种类型形态学改变：第Ⅰ种有较典型马传贫病理变化，免疫活性细胞数量减少，且变性、坏死；第Ⅱ种类型无马传贫规律性病理变化，免疫活性细胞活化，增殖，但肝内有铁反应；第Ⅲ种类型马无马传贫病理性损伤，免疫系统明显活化，增殖。据此查明２个月攻毒马１匹，出现第Ⅰ种类型形态学改变，３个月攻毒马８０％以上呈现Ⅱ、Ⅲ类型反应，与疫苗皮下注苗６个月再攻毒效果相仿，表明穴位注苗具有缩短免疫发生时间的效果。但穴位注射６个月攻毒的马出现Ⅰ型，变化例数较多（３３％），病理变化较明显，免疫反应有下降趋势，本文对这种异常现象进行了初步讨论。     

牛地方性白血病的B—1a,B—1b和常规B淋巴细胞研究

为表明肿瘤细胞表型的特征，阐明Ｂ淋巴细胞系的来源，用免疫组织染色法和流式细胞分检仪对从１０头感染牛地方性白血病病毒（ＥＢＬＶ）奶牛分离到的淋巴绞地研究。这些肿瘤细胞主要表达主要组织相容性复 （ＭＨＣ）Ⅱ＋（１０／１０）、ＢｏＣＤ１１ｂ＋（９／１０）、ＩｇＧ１＋（８／１０）、Ｂ－Ｂ２＋（８／１０）、ＢｏＣＤ＾５＋（７／１０）及λ轻链阳性（７／１０）。仅有一批奶牛的肿瘤细胞表达ＳＩｇＭ＾＋（１／１０).     

猪生殖-呼吸道综合征病毒抗原在死胎及新生仔猪体内的分布

应用抗猪生殖－ 呼吸道综合征病毒（ Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ）单克隆抗体所作的间接免疫荧光抗体试验（ Ｉ Ａ Ｆ）,对人工接种 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ的３ 头妊娠母猪所产９ 头死胎和２ 头新生仔猪体内的 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原分布进行了观察。结果表明, Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原在死胎主要分布于脾脏（９／９）和淋巴结（３／４）的巨噬细胞内,而少见于肺（２／９）和肾（０／９）等其他脏 器。但新生仔猪则仅在肺脏（２／２）的巨噬细胞内检出了 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 抗原,此结果说明 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 可通过胎盘屏障垂直传播给胎儿,而且 Ｐ Ｒ Ｒ Ｓ Ｖ 对组织的嗜性在胎儿和新生仔猪之间存在差异。