基于N蛋白的PPRV间接ELISA检测方法的建立及应用

【目的】原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的N蛋白,并以N蛋白为包被抗原建立血清间接ELISA检测方法。【方法】克隆PPRV N蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中进行重组N蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化复性,并进行Western-blot鉴定。用复性后的N蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清中PPRV抗体水平的间接ELISA检测方法,并对其进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后用该方法对临床样品进行检测,检验其应用效果。【结果】原核表达获得大小为58ku的重组N蛋白,Western-blot分析表明重组蛋白具有良好的特异性和反应原性。PPRV间接ELISA法优化反应条件为:抗原包被量每孔400ng,血清以1∶200倍稀释作用2h,酶标二抗以1∶8 000倍稀释作用1h,TMB显色时间20min,在该优化条件下,OD450≥0.309为阳性,反之为阴性。特异性试验表明,该条件下对羊痘、羊口疮、羊布氏杆菌和羊魏氏梭菌血清检测结果均为阴性;对80份阳性血清进行检测,敏感性为98.7%。重复性试验表明,批内和批间OD450值的变异系数分别在2.29%~8.65%和2.13%~5.68%。用本试验建立的ELISA检测体系对临床197份血清进行检测,阳性率为85.79%,与标准试剂盒的符合率为96.4%。【结论】建立的ELISA检测方法可用于PPRV抗体水平的有效检测。     

不同类型脱水素在植物低温胁迫应答中的作用

低温是影响植物生长发育和作物产量的非生物胁迫因子之一。植物在长期的进化过程中,通过调节自身的生理及分子变化,形成了对低温胁迫的适应能力。脱水素是一类晚期胚胎丰富蛋白,可保护植物细胞内蛋白质和膜结构等不被低温破坏。不同植物中脱水素的过量表达能够提高植物的低温抗性,植物脱水素的表达和蛋白质的积累与植物耐低温能力密切相关。本文对SKn、Kn、YnSKn、KnS和Yn Kn型脱水素在植物抵御低温胁迫过程中的作用进行综述,旨在为进一步利用脱水素进行植物抗低温分子育种研究提供参考。     

马肠痉挛的中西医诊治措施

马的肠痉挛是肠平滑肌受到异常刺激发生痉挛性收缩的腹痛病,中兽医称为冷痛、伤水起卧。临床上以间歇性疼痛发作为主要特征。     

水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡生长及免疫性能的影响

试验选取240只1日龄健康公雏肉仔鸡,研究水溶性苜蓿多糖(WSAP)对肉仔鸡生长和免疫性能的影响。将肉仔鸡随机分为对照组和7个不同添加量的WSAP组,每个处理设3个重复,每重复10只鸡。试验分为2个阶段:0~3周为试验前期,4~6周为试验后期。结果表明:1)各试验阶段,WSAP添加量为200和500mg/kg时各剂量组的平均采食量、平均体质量和日增质量显著高于对照组,料肉比显著低于对照组。2)WSAP组能够显著提高肉仔鸡免疫器官指数,促进外周血T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖,WSAP添加量为200和500mg/kg时效果最好。结果表明:日粮中添加WSAP可显著促进肉仔鸡生长及免疫性能,添加量为200或500mg/kg时可达到较好的生长及免疫效果。     

不同日粮蛋白质水平对中卫山羊羯羊生长与屠宰性能的影响

选择出生和断奶时间相近、健康、平均体重差异不显著(P0.05)的中卫山羊羯羊27只,随机分为3组。以不同蛋白质水平日粮饲喂各组试验羊,并统计羯羊体重及增重变化情况。结果表明,3组试验羊的日粮在蛋白质水平不同、能量水平相同的情况下日增重差异均不显著(P0.05),以Ⅱ组试验日粮效果最优。     

新城疫病毒和康莱特注射液联合抗肿瘤试验中瘤组织的病理变化及IL-6表达的研究

本试验运用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-perosidase,SP)测定在新城疫病毒(NDV)和康莱特注射液联合治疗肿瘤中IL-6在肿瘤组织中的表达,探究在生物因素治疗肿瘤过程中,细胞因子在肿瘤治疗中的作用.通过建立S37肿瘤模型鼠,将36只S37肿瘤模型鼠随机分成3组,对照组、康莱特治疗组和NDV联合康莱特治疗组.从建立肿瘤模型当日起4 d和12 d取各组肿瘤制作石蜡切片,用H.E.染色法和免疫组化法观察荷瘤小鼠瘤组织的形态学变化及IL-6分布的差异.结果表明,各治疗组组织和IL-6分布与对照组差异显著.从阳性反应的强弱可知,NDV弱毒和康莱特注射液联用组的阳性反应最强,其次是康莱特单用组.本研究从细胞因子方面探究了NDV治疗肿瘤的机制,可为运用生物素治疗肿瘤提供一定的理论依据.     

水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡T、B淋巴细胞体外增殖的影响

为探讨水溶性苜蓿多糖(WSAP)对体外培养的肉仔鸡淋巴细胞增殖的影响。本研究将不同浓度的WSAP分别加入到体外培养的用伴刀豆球蛋白A(ConA)刺激的肉仔鸡外周血、胸腺、脾脏淋巴细胞中和用细菌脂多糖(LPS)刺激的肉仔鸡外周血、脾脏、法氏囊淋巴细胞中,培养48h后用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定淋巴细胞增殖的变化。结果显示:(1)在本试验中,当WSAP在一定浓度范围(4～20μg·mL-1)内时,T、B淋巴细胞的OD值比对照组高,且随着多糖浓度的增加,数值先增高(1～20μg·mL-1)后降低(100～200μg·mL-1);(2)同浓度WSAP对肉仔鸡外周血及不同的免疫器官的刺激强度不同,相同日龄时,肉仔鸡外周血和脾脏T、B淋巴细胞的OD值分别小于胸腺和法氏囊的OD值;(3)WSAP对相同日龄的肉仔鸡外周血及不同的免疫器官的最佳刺激浓度不同,对外周血的最佳刺激浓度为20μg·mL-1,脾脏为8μg·mL-1,法氏囊和胸腺为15μg·mL-1。本试验中WSAP对肉仔鸡体外淋巴细胞增殖的刺激浓度在8、15、20μg·mL-1时效果较好,这些结果表明一定浓度的WSAP可以促进肉仔鸡淋巴细胞的增殖,且存在一定的量效、时效关系和组织特异性。     

牛的焦虫病及其防治

牛的焦虫病主要是巴贝斯虫病和泰勒氏焦虫病。但其危害及病症和治疗方法都基本一致。巴贝斯虫病是由微小的寄生虫引起感染并专门寄生于牛的红血球内。本病发生在特定区域和季节,通常发病在温暖几个月内。黄牛、水牛、奶牛都存发生,发病牛的死亡率也很高,较大危害。     

全株玉米青贮饲料制作技术

<正>近年来,伴随着农业产业结构的调整,畜牧业得到快速发展,奶牛小区式"小规模,大群体"的生产模式得到充分应用,但目前用于畜牧业生产的饲料很有限,充分利用青贮饲料,是扩大饲料来源简单可靠方法。     

蔬菜无公害栽培的施肥技术

<正>蔬菜无公害栽培是一个复杂的系统工程,就技术关键来看,首先必须选择清洁的地域(包含土壤、水质、空气等),按无公害栽培原则和技术施肥,才能谈无公害蔬菜的其他生产技术。无公害是相对有公害而言,土肥方面目前主要是重金属和硝酸盐污染问题,此外还有有机物等其他污染问题。1、化肥的作用及施肥不当带来的公害在现代农业中,化肥占主要地位,化肥能补充有机质的某些不足,提高蔬菜的产量。但是,由于化肥只侧重于某一方面元素的配合,往往