猪水肿毒素A亚基基因表达产物的生物学特性及抗体ELISA检测方法研究

通过TMpred生物学软件分析猪水肿毒素(SLT-IIe) A亚基蛋白质结构并设计引物、构建表达质粒使基因片段获得可溶性表达。SDS-PAGE和Western-blotting分析表明，表达产物具有可溶性从而主要存在于裂解上清液，易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明该可溶性蛋白不能致死小白鼠，也不具有Vero细胞毒性。体外细胞毒性中和试验表明表达产物的兔抗血清能高效中和SLT-IIe（中和度90.4℅）。在小鼠免疫保护力试验中，表达产物作为免疫原不能提供任何保护力。以表达产物为抗原建立的检测SLT-IIe抗体的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性，可用于临床猪水肿病的诊断。     

猪水肿毒素A亚基基因表达产物的生物学特性及抗体检测ELISA方法的建立

根据TMpred生物学软件对SLT-ⅡeA亚基的蛋白质结构分析结果,表达了猪水肿毒素(SLT-Ⅱe)A亚基。SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达产物以可溶形式存在,易于纯化且具有良好免疫学活性。生物学毒性试验表明,表达产物不能致死小白鼠,也不具有Vero细胞毒性。体外细胞毒性中和试验表明,表达产物的兔抗血清能中和天然SLT-Ⅱe(中和度90.4℅)。在小鼠免疫保护力试验中,表达产物作为免疫原不能提供任何保护力。以表达产物为抗原建立检测SLT-Ⅱe抗体的间接ELISA方法,结果该方法对猪萎缩性鼻炎等9种常见细菌性疾病阳性血清的检测均为阴性,能特异性检测到人工感染猪水肿毒素8d仔猪的血清抗体IgG,对临床送检的1083份猪血清的检测阳性率为20.9℅。     

“东一号”剑麻蛋白酶分离纯化及特性研究

比较了用乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法从“东一号”剑麻中提取蛋白酶的效果.用前者制得的粗酶经Sephadex G-25柱层析得两个蛋白峰,其中峰Ⅰ与酶活性重叠。峰Ⅰ再经SP—Sephadex C—50离子交换柱层析,pH.离子强度线性梯度洗脱得4个蛋白峰.其中峰4与酶活性重叠。此酶液经聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳.在每条胶柱上呈单一蛋白带;量4℃下2d后出现六角形结晶.结晶酶液在pH5.5-10.0.60℃范围内稳定性较好;其最适pH为7.5;最适温度为40℃;Km(酪蛋白)值为0.114％(w/v)用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测得其分子量66KD;用Sephadex G—100柱层析测得的分子量为69.9KD.用Ellman's试剂测得其游离巯基含量为4.3 mol—SH/10~5g蛋白质。     

三种鸭防御素真核表达载体的构建及其表达分析

为研究鸭防御素的真核表达,人工合成了鸭防御素AvBD2、AvBD10和AvBD12基因,并将其插入到真核表达质粒pDoubleEx-EGFP-flag-N中构建重组表达质粒;重组表达质粒经酶切鉴定正确后,分别转染HEK293细胞进行表达,用RT-PCR和Westem-blot鉴定目的基因的表达情况。结果表明,酶切鉴定证实目的基因成功插入到真核表达质粒中;真核表达质粒转染HEK293细胞24 h后,在荧光显微镜下可见绿荧光蛋白表达;RT-PCR能检测到目的基因mRNA,但Western-blot没有检测到目的蛋白的表达条带。     

三种固液分离设备处理猪场粪污的效果及成本比较

为分析螺旋挤压式固液分离机、滚轴过滤固液分离机和卧式螺旋沉降离心机3种固液分离设备的性能,用这3种设备对猪场粪水进行固液分离,检测处理后的液体的固体悬浮物含量、COD(化学需氧量)、总氮总磷,并对处理成本等进行分析。结果表明,卧式螺旋沉降离心机处理的粪水固体悬浮物较少,COD值和总氮总磷含量较低;螺旋挤压式固液分离机和滚轴过滤固液分离机能耗较低;卧式螺旋沉降离心机的附加投入较小。综合分析后认为用卧式螺旋沉降离心机对猪场粪水进行初步处理较为合适。     

鸡防御素基因GAL-2的克隆及其真核表达载体的构建

采用RT-PCR方法从15日龄的仔鸡肾组织的总RNA中扩增出鸡防御素基因(GAL-2)序列,然后将其亚克隆到载体pIRES2-EGFP构建成真核表达载体pIRES2-EGFP-GAL-2。经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性。将构建好的真核表达质粒转染到Marc145细胞中进行瞬时表达,荧光检测证实细胞转染成功。pIRES2-EGFP-GAL-2真核表达载体的成功构建为下一步在细胞水平研究GAL蛋白功能以及进一步将其开发为兽用生物制品奠定了基础。     

鲎试剂检测乳品中内毒素浓度的研究

为研究乳品中内毒素的浓度范围,本研究检测了不同牛奶样品中内毒素的浓度和细菌总数,分析了牛奶中内毒素的浓度及其与细菌污染的关系,并对来自牛场的107份鲜奶样品和市售的乳制品进行了检测。结果表明,鲎试剂检测法可用于牛奶内毒素的检测,但不能用于判断牛奶中细菌含量的高低;85.1%(87/107)的鲜奶样品的内毒素浓度低于300EU/mL,5.6%(6/107)的鲜奶样品内毒素浓度超过500EU/mL;不同厂家、不同类别的乳制品内毒素浓度差异较大。本研究为奶制品的安全检验提供了参考。     

奶牛金黄色葡萄球菌2种抗体检测方法的建立及比较

用超声波处理的金黄色葡萄球菌抗原和灭活的菌体抗原，初步建立了2种检测奶牛金黄色葡萄球菌抗体的检测方法：酶联免疫吸附试验（ELISA）和玻片凝集试验，并用建立的检测方法对已知免疫背景的血清样品进行检测。结果显示，ELISA的阳性检出率为60．5％（50/87），玻片凝集试验的阳性检出率为56．2％（49/87），两者总符合率为82．8％（72/87）。表明两种方法均可用于奶牛金黄色葡萄球菌抗体的检测，其中ELISA检测方法更敏感。     

45#钢表面CoCrW-NiP复合涂层的组织和性能

研究了45#钢表面火焰喷涂和电沉积CoCrW-NiP复合涂层的组织和性能. 结果表明: 通过先火焰喷涂并熔合CoCrW, 然后电沉积NiP, 可在45#钢表面获得厚度为300 μm的复合涂层. 该复合涂层主要由含Co、 Cr和W的硬质相组成, 硬度高达900 HV, 从而使45#钢的耐磨和耐蚀性能得到显著提高.     

发酵条件对猪场粪肥肥效的影响

[目的]研究发酵条件对粪肥发酵的影响。[方法]研究发酵时间、发酵季节、复合菌剂添加量对猪场粪肥发酵效果的影响。通过作物种植试验,并与化肥和沼液进行比较,验证猪场粪肥的肥效。[结果]粪肥发酵时间以7 d左右较好,肥效元素含量可达最大值;夏季发酵效果较好,粪肥中铵态氮和硝态氮含量增幅最大;向粪肥中添加复合菌剂有助于发酵。猪场粪肥与化肥具有相当的肥效。[结论]发酵时间、发酵季节及复合菌剂可影响猪场粪肥发酵的肥效,在生产中应予以重视。