萝卜EST—SSR反应体系的建立与优化

利用正交设计L16（4^5）对萝卜SSR—PCR反应体系的5因素（Taq酶、Mg^2＋、模板DNA、dNTP、引物）在4个水平上进行优化,获得了最佳反应体系,即20山反应体系中含有0．10mmol／LdNTP,3．0mmol／LMg^2＋,50ng模板,0．500μmol／L引物,1．0UTaq酶。使用优化的反应体系,扩增条带清晰,可满足不同引物组合和萝卜材料的要求。此研究为今后利用SSR技术对萝卜种质资源进行分类、构建遗传图谱和基因定位奠定了基础。     

与大白菜TuMV抗病基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记开发

分子标记辅助选择可大大加快育种进程,然而由于大白菜抗病毒病遗传规律的复杂性,目前所定位的基因和筛选的连锁标记远不能满足育种需要,为了更好地对抗病毒病白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)进行分子标记辅助选择,本研究筛选了与大白菜抗芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记.本研究在对该基因进行定位的基础上,利用回交1代(backcross1,BC1)分离群体,采用分离群体分组分析法(bulked segregation analysis,BSA)、简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)和序列特异引物(sequence specific primer,SSP)标记技术,筛选与该基因紧密连锁的分子标记.通过对13对SSP引物和16对SSR引物的分析表明,有8对引物在两亲本间表现多态性,有5对引物扩增出的标记与基因TuRBCS01紧密连锁或共分离,分别为mBr4072、Bra025493-1、Bra025493-2、Bra025467-4和Bra025467-5.筛选出与大白菜TuMV抗性基因TuRBCS01紧密连锁的分子标记2个,分别为SAAS_mBr4072_240 (1.5 cM)和Bra025493-1(1.0 cM),另有3个标记与基因TuRBCS01共分离,分别为SAAS—Bra025493-2_749、SAAS_ Bra025467-4—780和SAAS—Bra025467-5_ 956.上述标记丰富了大白菜抗TuMV分子标记的数量和种类,有望用于大白菜抗病毒病分子标记辅助选择.     

不同施肥处理对萝卜风味物质影响的GC-MS分析

采用顶空萃取(SPME)和气相色谱质谱联用技术(GC-MS),测定了不同施肥处理萝卜果实中风味成分的含量。结果表明:(1)不同施肥处理萝卜中共检测出14种风味物质,主要包括六大类物质,其中异硫氰酸酯类7种、醇类3种、醚类1种、醛类1种、酮类1种及烷烃类1种。(2)鲁萝卜6号的主要风味物质是异硫氰酸酯类、醇类、醚类。(3)不同施肥处理造成了萝卜共有风味成分含量的差异及特有成分的存在,造成了萝卜风味种类及数量的变化以及萝卜辣素含量的变化,形成不同的风味差别。     

萝卜种质亲缘关系的分子标记分析

本研究以118个分子标记在108份萝卜种质中进行筛选，得到56个带型清晰、多态性好的标记用于亲缘关系分析。用这56个标记共扩增出130条多态性条带，每个标记2～5条，平均2.3条；观测等位基因数的平均值为2.3214,有效等位基因数的平均值为1.8643,Nei基因多样性指数的平均值为0.4573,Shannon多态性指数的平均值为0.6766,PIC值介于0.29～0.55之间。UPGMA聚类和PCA分析结果较为一致，在遗传相似系数为0.61处可将108份种质分为4大类，黑皮白肉萝卜、樱桃萝卜、心里美类型萝卜种质各聚为一类，其余种质聚为一类，表明萝卜种质亲缘关系与肉质根皮色、肉质色、大小的联系较密切。