环形泰勒虫感染细胞抑制性消减文库的构建及ESTs分析

【目的】环形泰勒虫（Theileria annulata）可以感染牛B淋巴细胞、树突状细胞和巨噬细胞,并可使被感染细胞发生转化,体外培养时可获得类似肿瘤样细胞的无限增殖能力。本研究通过构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库,筛选环形泰勒虫裂殖体基因及转化细胞与宿主正常细胞之间的差异表达基因。【方法】以环形泰勒虫裂殖体转化细胞和非感染牛外周血单个核细胞（即非转化宿主细胞）为试验材料,提取总RNA和mRNA,反转录合成cDNA;然后分别作为tester和driver,进行抑制性消减杂交（SSH）,构建环形泰勒虫转化和非转化宿主细胞抑制性消减文库;对随机挑取的阳性克隆进行测序及生物信息学分析,并利用实时荧光定量PCR对文库部分差异基因进行验证。【结果】通过对文库454个阳性克隆进行测序,共获得了有效表达序列标签（ESTs）364条,大小主要分布在350-1 200 bp之间;将这些ESTs序列在GenBank中进行BLASTn网上序列比对,其匹配于192条基因序列;其中包括环形泰勒虫序列60条(11条为虫体蛋白酶基因序列、10条为膜蛋白基因序列、7条为假设蛋白基因序列、5条为凋亡相关虫体蛋白基因序列、5条为核糖体蛋白基因序列、4条为细胞周期蛋白基因序列、4条为虫体抗原基因序列和虫体其它基因序列14条)、牛基因序列131条（其中19条为肿瘤相关蛋白基因序列）和1条未知序列;其中已有功能注释的ESTs 285条,再将已知功能的ESTs通过WEGO软件从生物学过程（biological process）、细胞组成（cellular component）和分子功能（molecular function）3个部分进行GO聚类分析,结果表明,宿主细胞差异基因主要集中在细胞、细胞进程、结合、催化、代谢进程、生物调节等功能方面。另外,通过对部分环形泰勒虫裂殖体转化宿主细胞差异基因进行荧光定量PCR分析,结果表明,肿瘤相关基因HCLS1和SENP5在转化宿主细胞中转录水平分别是非感染牛PBMCs(非转化宿主细胞)的2.06和1.32倍。【结论】利用SSH技术,成功构建了环形泰勒虫感染宿主细胞的抑制性消减文库,筛选获得了转化宿主细胞和环形泰勒虫裂殖体的表达基因,并通过荧光定量PCR分析获得了2个可能参与宿主细胞转化的基因,为进步探索环形泰勒虫与宿主细胞相互作用的分子机制奠定了基础。     

猪流行性腹泻诊断方法的研究进展

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,以水样腹泻、呕吐、脱水和食欲下降为主要特征.由于PED与猪传染性胃肠炎(TGE)的流行特点、临诊症状和病理变化非常相似,故临床确诊较为困难.目前,对该病的诊断方法主要有流行病学诊断、临床及病理诊断、病原学诊断、血清学诊断、分子生物学诊断等方法.随着分子生物学技术的不断发展,以分子生物学诊断法的灵敏度高、特异性强而被人们所重视.笔者主要针对该病的诊断方法就近年来的研究进展进行了综述,为猪流行性腹泻的诊断提供参考.     

落叶松苗期的综合管理

落叶松是松科落叶松属的落叶乔木,是东北林区的主要森林组成树种。它的天然分布很广,适应性强,是一个寒温带及温带的强阳性树种。它生长速度快,栽培容易,是东北地区的主要造林树种之一。     

猪轮状病毒病的临床症状与防治方法

猪轮状病毒病是由轮状病毒引起的以腹泻为主要临床特征的猪传染性疾病,所有日龄的猪均能感染,但主要是乳猪和断奶猪,表现为明显的腹泻、脱水。目前本病尚无特效药物治疗,使用抗生素药物可减少继发细菌感染。     

新疆杨扦插育苗及造林技术

新疆杨是一种环境耐性好,成林快的优良树种,在我国林业建设和城市绿化中有着广泛的应用。我国目前在新疆杨的培育中,出于保证苗木成活率,提高育苗效率的目的,主要采取扦插育苗的技术手段,经过实践证明,该技术在新疆杨育苗中有着良好的应用效果。为促进该技术价值的发挥,本文将针对新疆扦插育苗技术及造林技术的要点展开讨论。     

设施蔬菜测土配方施肥有关问题初探

阐述了设施蔬菜测土配方施肥的特殊性,介绍设施蔬菜的营养需求和施肥特征,针对天津市目前设施蔬菜施肥及测土配方施肥存在问题,提出了设施蔬菜测土配方施肥的基本原则、对策和措施。     

山地拖拉机坡地等高线旋耕土壤侵蚀规律研究

针对黄土高原丘陵山区坡地等高线旋耕作业时土壤耕作侵蚀(土壤由坡高侧向坡低侧迁移)严重及其机理不明等问题,通过理论分析、仿真试验、土槽及实地试验相结合的方法,深入开展山地拖拉机坡地旋耕侵蚀规律研究。首先,构建了H245标准型常用旋耕刀在坡地工况下的扰土体积参数方程,完成了旋耕刀坡地扰土过程的经典力学分析,确定了导致坡地旋耕土壤侵蚀的主要影响因素：坡地角、耕作深度、刀轴转速以及旋耕作业速度;然后,基于EDEM离散元仿真软件研究了单把旋耕刀和旋耕机整机的坡地扰土规律,得出土壤颗粒在旋耕刀侧切刃的动态滑切作用下有水平向后运动的行为,浅层土壤颗粒位移最大,深层土壤颗粒位移最小,并且深层靠近旋耕刀回转中心的土壤颗粒位移最大;土壤的侧向位移方向受旋耕刀正切刃朝向的影响;随着旋耕刀的入土,土壤颗粒在垂直方向的位置呈先变深后变浅的趋势。最后,选取旋耕刀轴转速、旋耕作业速度和坡地角作为试验因素,进行了实地旋耕单因素和正交试验,单因素试验得到土壤水平、侧向位移随着上述3个因素变化的规律;正交试验方差分析得到影响土壤侧向位移的主次因素为坡地角、旋耕刀轴转速、旋耕作业速度,影响土壤水平位移的主次因素为旋耕作业速...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GZ-KY1株的分离及ORF5基因的克隆分析

本试验首次采用PK-15细胞,通过同步接种的方法,成功分离到了1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV,GZ-KY1株),并扩增克隆了该毒株的ORF5基因。试验结果表明,该毒株ORF5基因全长603 bp,系美洲型,与国内强毒株的氨基酸一致性高于弱毒株,与经典美洲型毒株及国内弱毒株亲缘关系较远。     

惠民蜜桃早期丰产栽培技术

惠民蜜桃是惠民县大年陈乡选出的大果型中熟桃优良品种 ,1 997年 8月通过专家鉴定 ,1 999年通过山东省农作物品种委员会审定。为研究该品种早期丰产栽培技术 ,我们于 1 996～2 0 0 0年进行了本项试验 ,现将结果总结如下。1　试验园的基本情况　　试验在惠民县大年陈乡大邢村进行。为沙壤土 ,土层深厚 ,肥沃。 0～ 40 cm土层有机质含量 0 .70 %～ 0 .91 % ,p H值为 7,排灌条件良好。当地年平均气温 1 2 .2℃ ,7月平均气温2 6.3℃ ,1月平均气温 -9.3℃ ,≥ 1 0℃的有效积温 42 82 .6℃ ,年均日照时数 2 64 0 .4小时 ,年均降水量 61 7mm,降水…     

安徽省重启洪水巨灾保险试点工作存在的问题及对策

改革开放近40年以来,特别是经历十一五十二五2个五年规划之后,安徽省社会经济快速发展,财政实力日益增强。20世纪80年代末到90年代中期,淮河流域开展了政策性洪水巨灾保险的相关试点,积累了一定的农业巨灾保险实施经验;相较于1998年,省内防洪减灾能力显著提高,同时加强了减灾非工程性建设,提高了防灾减灾能力和效率,此时着手准备重启洪水巨灾保险的试点工作符合时代发展要求。本文从这些时代背景出发,以重启洪水巨灾保险试点工作的进程中将会遇到的突出问题为研究内容,立足安徽省发展改革实际提出相应对策,力求为试点工作的顺利重启和区域经济在巨灾保险保障下平稳较快发展服务。