牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立

用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分支杆菌无特异性交叉反应,其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒量,与RT-PCR方法的相比较,符合率为100%。所建立的BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感,可用于BVDV抗原的检测。     

二温式PCR检测对虾白斑综合征病毒方法的建立与应用(摘要)

对虾白斑综合征 (ＷＳＳ)是由对虾综合征病毒 (ＷＳＳＶ)引起的一种以病虾甲壳内侧出现白斑为特征 ,并具有很高死亡率的对虾最常见传染性疾病。该病自 1988年在台湾发现以来 ,已迅速蔓延至世界对虾养殖的各个国家和地区。广西沿海地区是对虾养殖较为发达的地区 ,近年来该地区所养殖的对虾也同样遭到该病的袭击 ,造成了巨大的经济损失。1.通讯作者。　　目前对对虾疾病的诊断手段 ,主要包括以病理学和生物学诊断为主的常规诊断方法、免疫学方法、分子杂交方法及ＰＣＲ诊断方法等。其中ＰＣＲ方法又是目前这些方法中最快捷、敏感性最高的病原…     

广西鸡毒支原体的分子流行病学研究的概述

研究分别建立了鸡毒支原体（MG）、滑液霉形体（MS）、禽衣阿华支原体（MI）、火鸡支原体（MM）及鉴别MG强毒株和弱毒疫苗株单一PCR和多重PCR检测鉴定技术,以及核酸探针检测MG的技术。应用多种分子生物学技术即SDS—PAGE、PCR—RFLP、RAPD和29KD多肽基因序列分析等方法对广西MG流行株的分子病原学进行研究,摸清了广西MG流行野毒株之问以及与现用疫苗株和国际参考株之间的差异和遗传相关性;在此基础上制定的综合防制措施经生产的实施与应用,取得了显著的效果。     

环介导等温扩增(LAMP)检测禽脑脊髓炎病毒方法的建立

根据已发表的禽脑脊髓炎病毒的VP2基因序列,设计并合成了6对特异扩增禽脑脊髓炎病毒VP2基因片段的引物,通过条件优化,成功建立了针对禽脑脊髓炎病毒的环介导等温扩增(LAMP)检测法,并测定其特异性和敏感性,对采集的禽临床样品的核酸分别进行了检测.结果表明,该法只检出禽脑脊髓炎病毒.敏感性扩增结果表明,Lamp检测禽脑脊髓炎病毒为100fg的RNA模板.该LAMP方法有简便、快速和特异性高的优点,可用于临床上对禽脑脊髓炎病毒的快速检测.     

反转录聚合酶链反应和核酸探针检测禽呼肠孤病毒研究的概述

根据禽呼肠孤病毒(ARV)参考毒株S1133S1基因序列，设计合成4对引物而分别建立了RT-PCR、半套式PCR和一步法PCR三种用于检测ARV的方法。它们能检测到的最近ARVRNA量分别为1pg、1fg和0．16ngRNA；研制出禽呼肠孤病毒地高辛核酸探针，并建立了地高辛核酸探针检测ARV的方法，该核酸探针最低能检测到0．45ng的ARVRNA；对广西部分鸡场血清学调查表明，ARV平均阳性率为27％；对广西ARV野毒株进行了分离和鉴定，并对获得的2个地方分离株的S1基因片段进行测序及分析，两分离株与标准株S1133的同源性分别为98．5％和98．3％；用所建立的RT-PCR和地高辛核酸探针方法对用ARV人工感染鸡采集的各种样品的检测，并和传统病原分离方法进行比较，结果RT-PCR检出率为92．5％(222／240)，地高辛核酸探针检出率为74．2％(178／240)，病原分离鉴定方法检出率为55％(132／240)。用ARV强毒分别对免疫种鸡后代和无母源抗体或SPF的雏鸡进行攻毒试验，结果油苗免疫的种鸡后代对本病有很强的抵抗力，能抵抗ARV强毒的攻击，其平均保护率90．8％(109／120)。而无母源抗体或SPF的雏鸡攻毒后均100％(240／240)死亡。     

鸡呼肠孤病毒分离与鉴定

从广西玉林市某鸡场出现跛行、瘫痪、跗趾关节和腱肿胀等症状的不同发病鸡群中分离到两株病毒。经病毒分离培养、理化特性鉴定、血清中和试验、动物回归试验、抗体检测以及PCR诊断,确定所分离到的两个病毒株为禽呼肠孤病毒。     

牛轮状病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

本研究旨在建立一种快速可视化检测牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导恒温扩增方法(RT-LAMP)。根据BRV的群特异性基因VP6设计一套LAMP引物,对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了恒温(63.5℃)、快速(45 min)的检测方法。结果显示:所建立方法特异性好,检测其他对照病毒均为阴性;灵敏度高,最低可检测到1个拷贝的阳性质粒,扩增产物经酶切分析结果正确,扩增结果可通过观察浑浊度或加入染料后直接判定。建立了用于检测BRV的RT-LAMP方法,该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适合基层和现场检测。