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从肉联厂和屠宰场附近的土壤和污水中采集到的近100个样品中,经富集培养分离到123株能产生弹性蛋白酶的菌株,反复初筛、复筛后,分离到一株产胞外弹性蛋白酶活较高且稳定的细菌,经初步鉴定属芽孢杆菌属(Bacillus sp. EL3).同时研究了其产酶最适条件, 产酶最适碳源为葡萄糖, 最适氮源为豆饼粉.并对碳源、氮源和生长因子进行了正交实验,研究发现碳源对产酶的影响最大,其次为氮源.当葡萄糖的用量为6%、豆饼粉为5%、玉米提取液为0.2%时,其具有较高的产酶水平.最适发酵初始pH为7.5 , 250 mL 最适摇瓶装液量为20 mL.在该发酵培养基中培养,35 h时达最高的产酶水平.同时还对离心后的粗酶液进行温度和pH试验, 发现该酶最适作用温度和pH分别为50 ℃和7.4, 该酶在40 ℃以下保温30 min酶活仍较高, 在60 ℃以上酶活全部丧失.在pH7.4~9.0的范围内比较稳定, 而在pH 7.0以下时, 酶活下降很快.金属离子Cu2+、Zn2+、Al3+能抑制弹性蛋白酶的活性,而Fe3+、Li2+能激活弹性蛋白酶活性,螯合剂EDTA则严重抑制弹性蛋白酶活性. 相似文献
33.
缓冲体系对产弹性蛋白酶芽孢杆菌EL31410发酵的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
摘要: 弹性蛋白酶是以降解弹性硬蛋白为特征的蛋白水解酶。培养芽孢杆菌(Bacillus sp.) EL31410产弹性蛋白酶的过程中,pH的波动对产酶有较大影响。菌体最适生长pH为6.0~7.0,最适产酶pH为6.4~6.6。采用单因素实验和二次通用旋转回归设计研究了缓冲体系对产弹性蛋白酶芽孢杆菌EL31410发酵的影响。优化结果显示:15 h后添加pH 6.4 KH2PO4-NaOH缓冲液,使其在培养基中浓度为0.02 mol/L时,对控制发酵液pH和提高菌体生长及酶活性的综合效果为最佳。验证实验证明该模型是较可靠的。 相似文献
34.
des-pGLU1-Bra基因的人工合成及其在大肠杆菌中的重组表达 总被引:3,自引:0,他引:3
根据从西非植物Pentadiplandra brazzeana Baillion果实中分离的甜蛋白Brazzein的成熟区氨基酸序列,按照大肠杆菌(Escherichia coli)的密码子偏好人工合成了4对末端具粘合位点的寡聚核苷酸序列,经连接和PCR扩增后得到了179bp的Brazzein类似物的编码序列,插入pET30a载体构建成重组表达载体pET-Bra。诱导表达后得到了与预计分子量相同的蛋白,约占细菌可溶性蛋白的12.8%,分离纯化的des-pGLU1-Brazzein甜度约是同等重量蔗糖的600倍。 相似文献
35.
~(60)Coγ射线诱变选育热凝胶多糖高产菌株的研究 总被引:8,自引:0,他引:8
利用60 Coγ射线对产生热凝胶多糖 (Curdlan)出发菌株GM 2 4的菌体细胞与原生质体分别进行辐照处理 ,发现60 Coγ射线对GM 2 4原生质体的诱变效应明显优于对其菌体细胞的作用。对最终诱变筛选获得的 1株高产稳定的Curdlan生产突变株A81研究表明 :与GM 2 4相比 ,其Curdlan产量提高了 5 0 4%,发酵周期缩短了 1 8%,发酵终止后底物残糖由 1 5 3g L降至7 4g L。糖的转化率从 38 7%提高至 5 8 2 %。这说明在Curdlan生产菌株的筛选中60 Coγ辐照是一种有效的方法 相似文献
36.
降解2,4—二氯酚假单孢菌GT141—2的特性及3,5—二氯儿茶酚1,2—双加氧酶基因定位 总被引:3,自引:0,他引:3
从2,4-二氯酚生产厂排污口污泥中分离出一株2,4-二氯酚降解细菌GT141-2,经鉴定确定为假单胞菌属,在最适条件下菌株GT141-2能在36h内将90mg/L的2,4-二氯酚降解62%。GC/MS分析表明,该菌株能将2,4-二氯酚彻底降解,未积累中间代谢产物。菌株GT141-2有三4条大质粒带,Southern杂交显示其3,5-二氯儿茶酚1,2-双加氧酶基因定位于其中的最小的质粒上。 相似文献
37.
研究了以牛奶酪蛋白为原料制备CPPs的工艺过程及条件。以氮、磷含量为指标,通过正交试验,确定了在胰蛋白酶作用下制备CPPs的最佳条件为:最适温度40 ℃,水解时间80 min,底物浓度15%,底物与酶之比为100∶1。 相似文献
38.
39.
用适当方法制得枯草杆菌BR151(Trp~-,Lys~-,Met~-)和黄色短杆菌ZAU89101(Bio~-)的原生质体,在DNase存在条件下,用40%聚乙二醇(PEG)做助融剂,进行两菌株的原生质体融合。融合率为2.69×10~(-5)~3.6×10~(-6)。随机挑选10株融合子进行生化及谷氨酸发酵实验,证实了融合子的杂种性质。融合子的细胞、菌落形态和大小、形成芽孢能力及谷氨酸发酵能力等性状均较亲本有不同程度的变异。通过摇瓶发酵实验获得一株谷氨酸产率为7.29%以上的融合子。经长时间培养,此菌株仍保持了稳定性,因而具有应用前景。 相似文献
40.
何国庆 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》1992,(4)
5株通过质粒转导而获得β-葡聚糖酶基因的下面啤酒酵母,都能在啤酒主发酵期内将麦芽汁中90%以上的β-葡聚糖分解.其中VB84菌株能在4天内分解β-葡聚糖94.1%.它在啤酒发酵过程中的繁殖速率、细胞浓度、降糖速率和最终发酵度均保持正常.随着β-葡聚糖的分解,啤酒的易滤性得到明显改善,V_(max)值提高56.3%.对β-葡聚糖凝胶的分解速率略低于对溶胶态β-葡聚糖的分解.啤酒的各项质量指标正常,对泡持性没有影响. 相似文献