猪源盖塔病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

猪盖塔病毒感染是由盖塔病毒(GETV)引起母猪妊娠初期胎儿死亡、初生仔猪发病的一种繁殖障碍性疾病。猪是自然界中GETV的主要扩增宿主,可以产生足够高的病毒血症滴度来感染叮咬的蚊子并维持GETV的传播周期,所以定期对猪群进行GETV监测对于预防潜在的GETV暴发具有重要意义。本研究通过分析GETV E2蛋白基因特征,设计特异性引物和探针,条件优化后建立检测GETV感染的Taq Man实时荧光定量PCR方法。结果表明：以阳性质粒为标准品建立的标准曲线在1×10²～1×10⁷ copies/μL内呈现良好的线性关系,扩增效率为1.61;该检测方法的最低检出限低至3.16 TCID₅₀/mL,远远低于普通PCR的检测限3.16×10³ TCID₅₀/m L;组内、组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性和稳定性。本研究建立的方法能够快速有效的检测和定量GETV,为猪群中GETV监测提供可靠的检测方法。     

M2e合成肽流感通用疫苗的研究

M2蛋白是甲型流感病毒的跨膜蛋白,其优点为不易变异,且N端24个氨基酸组成的胞外区(M2e)十分保守,适合作为通用流感疫苗的靶标.因此本实验将4个拷贝的M2e通过赖氨酸与通用Th细胞表位偶联获得M2e分支肽(M2e-MAP),添加弗氏佐剂制备成合成肽疫苗免疫小鼠,评价其免疫原性及异源攻毒保护效力.ELISA实验结果表明,该疫苗能刺激机体产生高水平的抗M2e特异性IgG抗体；细胞因子IL-4的检测进一步说明了其能诱导产生高的体液免疫应答水平,ELISPOT实验从IL-4和IFN-γ两个方面分别说明了该疫苗不仅可以诱导高的体液免疫应答,而且能刺激机体产生高水平的细胞免疫应答.对免疫小鼠攻H9N2,通过肺病毒分离滴定和肺组织病理切片等方法检测攻毒保护效果,结果均表明,M2e分支肽疫苗能对异源病毒的攻击产生较好的保护效力.上述结果为流感通用疫苗的研究提供了一种参考思路.     

杨树花粉低温贮藏技术

设定了-90,-30,-15,5℃和室温5个水平贮藏银中杨花粉,用氯化2,3,5-三苯基四唑（TTC）染色法测定花粉活力.结果表明：银中杨单株间花粉寿命变异显著;花粉活力因贮藏温度不同而存在显著差异,温度越低花粉寿命越长.室温条件下银中杨花粉7 d后即丧失活力;在5℃贮藏10 d时,有活力花粉为22.98%,15 d后丧失活力;15 d后在-15,-30℃条件下贮藏的有活力花粉分别为31.98%,38.56%;在-90℃条件下贮藏15 d后,有活力花粉为82.70%,30 d时有活力的花粉为50.68%.     

表达猪源GM-CSF重组PRRSV疫苗对同源高致病性毒株的免疫保护效力评价

为研究表达猪源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在动物体内的免疫调节特性及对其的保护效力评价,本研究将15头30日龄仔猪随机分成4组,空白对照组(DMEM)4头、疫苗对照组(HuN4-F112株)4头、疫苗组(rPRRSV-GM-CSF株)3头和攻毒对照组(DMEM+HuN4株)4头。疫苗对照组肌注免疫HuN4-F112株10⁵ TCID₅₀/头、疫苗组肌注免疫rPRRSV-GM-CSF株10⁵ TCID₅₀/头,实验空白组和攻毒对照组肌注DMEM 2 mL/头,免疫后28 d,疫苗组、疫苗对照组和攻毒对照组肌注HuN4株(10₅ TCID₅₀/头)。攻毒后的试验结果表明,免疫rPRRSV-GM-CSF重组病毒组和疫苗株HuN4-F112组获得完全保护,阴性对照组全部死亡;通过IDEXX试剂盒检测仔猪血清中PRRSV抗体水平可知,在免疫14 d后,疫苗组抗体水平显著高于疫苗对照组(P<0.05);由...     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白B细胞抗原表位的鉴定

本研究去除了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株M蛋白基因部分疏水性区域后,克隆于原核表达栽体pGEX-6P-1中进行表达,并利用表达的M蛋白(rtM)为抗原,免疫BALB/c小鼠制备了1株抗M蛋白的单克隆抗体(McAb)M283,IFA试验表明该McAb能够识别PRRSV CH-la株.同时将M蛋白基因进行一系列的氨基酸截短表达,证实M蛋白的117 aa～129 aa是McAb M283的抗原表位;对该抗原表位进行western blot 分析,结果显示该表位能被PRRSV感染猪的血清特异性识别.本研究结果为进一步深入了解M蛋白的抗原特性奠定了基础.     

葡萄常见病识别与防治

由于葡萄深加工企业的引进,阜新地区葡萄生产向集中连片发展,葡萄产业成为当地农民的支柱产业之一.但葡萄疾病的发生时刻威胁葡萄的产量和收益.介绍霜霉病、白腐病、叶片青枯病、白粉病等7种常见病害的发生症状及防治方法,为科学防治葡萄病害发生、达到稳产增收效果提供技术服务.     

A型塞内卡病毒VP1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

A型塞内卡病毒(SVA)是一种新兴的猪病原体,可引起母猪水泡样病变和仔猪急性死亡。本研究将SVA的VP1基因分别克隆到原核表达载体pCold-I和pCold-TF,并将测序正确的重组质粒VP1-pCold-I、VP1-pCold-TF转化BL21(DE3)大肠杆菌中,诱导表达重组蛋白。结果显示：VP1-pCold-I表达的目的蛋白在沉淀(包涵体)中,VP1-pCold-TF表达的蛋白为可溶性蛋白。分别纯化上述表达的蛋白,并免疫BALB/c小鼠,经四次免疫后得到多克隆抗体。经Western blot和间接免疫荧光(IFA)鉴定,制备的多克隆抗体具有良好的Western blot效价和IFA效价,为相关基础研究和应用研究提供了工具。     

夏玉米播期试验研究

为探讨烟台市小麦玉米一年两作平衡增产技术,以登海3622和金海5号为试验材料,研究了不同播期对夏玉米产量及植株性状的影响。结果表明,6月10日至7月4日期间播种夏玉米,播种期对夏玉米产量、产量构成因素影响显著;生育期及株高、穗位高、叶片数也发生了明显变化;对穗长、穗粗、穗秃顶长度影响不显著;在试验区域内,6月15日之前播种的夏玉米,易受灰飞虱危害发生粗缩病,病株率一般为0.95%～12.83%。     

鹌鹑新城疫与传染性喉气管炎混合感染的诊治

2007年1月份,我市泽库镇某鹌鹑场饲养的1000只鹌鹑,有部分出现呼吸锣音和咳嗽症状。饲养户携重症及死亡鹌鹑前来求诊,初步确诊为新城疫。1临床症状