基于平行反应监测验证技术分析绵羊胚胎骨骼肌蛋白质组数据

旨在对绵羊胚胎骨骼肌蛋白质组学数据进行分析,为阐明绵羊胚胎骨骼肌生长发育机制奠定基础。前期试验应用串联质谱定量法（tandem mass tag,TMT）对成年中国美利奴绵羊妊娠第85（D85）、105（D105）和135天（D135）的胚胎背最长肌进行蛋白质定量,并对D85/D105、D105/D135和D85/D135 3个比较组进行分析。本试验在此基础上,利用KEGG和平行反应监测（parallel reaction monitoring,PRM）等数据分析方法对3个比较组绵羊胚胎骨骼肌上、下调差异丰度蛋白质进行分析和验证,并对候选蛋白质进行生物信息学分析。本研究对肌纤维成熟分化标志性蛋白肌球蛋白重链（myosin-2 isoform X2,MYH）进行PRM靶向定量验证,结果表明,其变化趋势与绵羊胚胎肌纤维成熟分化趋势相符。本研究对上调差异丰度蛋白和下调差异丰度蛋白的KEGG分析结果表明,D105/D85比较组中上调差异丰度蛋白质显著富集于胰岛素等信号通路,D135/D105和D135/D85比较组中下调差异丰度蛋白质显著富集于DNA复制和蛋白质消化吸收等信号通路。与肌肉发育相关的cAMP依赖性蛋白激酶A催化亚基α（PRKACA）和葡萄糖转运蛋白成员4（GLUT4）蛋白均显著富集于胰岛素信号通路中,生物信息学分析显示,这两个蛋白质的理论分子量分别为121.73和20.64 ku,分别有147、12个带正电荷的氨基酸残基和135、12个带负电荷的氨基酸残基;理论等电点分别为8.81和6.54;亲水性平均系数分别为-0.408和0.811;PRKACA蛋白无N端糖基化位点,有45个磷酸化位点;GLUT4蛋白有1个N端糖基化位点,25个磷酸化位点;PRKACA蛋白三级结构与CAMP-2依赖蛋白激酶a嵌合融合的晶体结构相似度为85%,GLUT4蛋白三级结构与人葡萄糖转运蛋白GLUT1的相似性为78%。本研究表明,PRM定量验证趋势与绵羊胚胎肌纤维成熟分化趋势相符,PRKACA和GLUT4蛋白具有丰富的磷酸化修饰位点,并参与胰岛素信号通路调控,是重要的候选蛋白。     

不同光周期下ISA褐蛋鸡松果腺GnRH—ⅠmRNA表达的变化

采用分子生物学方法研究了不同光周期处理的ISA褐蛋鸡松果腺GnRH-Ⅰ mRNA表达的变化.77日龄ISA褐蛋鸡60只,随机分成长光和短光组,正式试验期67 d.人工拉光,短光组日固定8 h,长光组第1周8.5 h,以后每周增加0.5 h.以短光组见第1枚卵结束试验(143日龄).分别于105和136日龄每组随机各取6只蛋鸡采样(长光组约10%开产).结果表明:短光组鸡群见蛋日龄较长光组延后12 d,136日龄育成体重极显著低于长光组(P<0.01).105日龄长光组GnRH-Ⅰ mRNA表达的丰度高于短光组,但差异不显著(P>0.05);136日龄长光组GnRH-Ⅰ mRNA表达的丰度显著低于短光组(P<0.05).随着日龄的增加,长光组GnRH-Ⅰ mRNA表达丰度显著降低(P<0.05),而短光组的表达丰度逐渐上升但差异不显著(P<0.05).由此得出,短光组的GnRH-Ⅰ mRNA表达峰值及性成熟均较长光组延后出现.     

12种藏药对鸡胚成纤维细胞的安全浓度和生长的影响

用MTT法测定了藏菖蒲、红景天、决明子、灵芝盖、灵芝柄、龙胆、天冬、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味珍珠丸、二十五味松石丸等12种藏药对体外培养的鸡胚成纤维细胞(CEF)的安全浓度和生长的影响.结果显示,各藏药的最大安全质量浓度红景天为31.25 mg/L,天冬、降香、决明子和二十五味松石丸为62.5 mg/L,乳香为125mg/L,二十五味珍珠丸为250 mg/L,藏菖蒲和灵芝柄为1 000 mg/L,龙胆和仁青芒觉为2 500 mg/L,灵芝盖为5 000 mg/L,藏菖蒲为1.954～500 mg/L,天冬为1.954～15.625 mg/L,决明子为1.954～3.907 mg/L,灵芝柄为1.954～7.813 mg/L,仁青芒觉为19.54～1 250 mg/L,龙胆为312.5～625 mg/L,可显著促进细胞生长.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF6基因的克隆及原核表达

从河北沧州分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经4代盲传,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为HB-3(cz)株。根据GenBank公布的PRRSV JXA1株ORF6基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物(P1/P2),用RT-PCR方法扩增完整ORF6基因,将扩增产物连接到pGM-T载体并转化克隆菌,阳性重组质粒PGM-M进行序列测定与分析。后将克隆质粒PGM-M双酶切后连接原核表达载体pET-32a(+),在Rosseta-DE3中成功获得表达,经Western-blotting分析表明,表达蛋白与阳性血清发生特异性反应。     

萨杜湖杂交羊生长性能、羊毛品质及血液生理生化指标测定

为研究萨福克羊×杜泊羊×湖羊杂交羊(萨杜湖杂交羊)生长发育情况及其对当地生态环境的适应能力,采用生产性能常规测定、显微测定和全自动血液生理生化分析仪分别测定了不同年龄阶段萨杜湖杂交羊的体重、体尺指标、羊毛品质(包括不同部位羊毛的净毛率、细度、有髓毛和无髓毛占比、自然长度和伸直长度等指标)和成年羊血液生理生化指标。结果表明:萨杜湖杂交羊早期生长速度较快,初生阶段及周岁时公羊体斜长均显著高于母羊(P<0.05);3月龄时公羊体高、体斜长和胸围均显著高于母羊(P<0.05);6月龄时母羊体重极显著高于公羊(P<0.01),成年时期公羊体重和体高均显著高于母羊(P<0.05);其余各生长阶段内,公母羊间体重及体尺差异不显著(P>0.05)。其成年时平均净毛率较低,为45.21%;长度适中:平均自然长度为4.55cm,伸直长度为6.22cm;细度良好,为17.60μm。公母羊血液生理生化指标及其同国内绵羊参考值相比存在一定的差异,其中母羊血小板总数(PLT)和血小板压积(PCT)均极显著高于公羊(P<0.01),公羊甘油三酯(TG)和白蛋白(ALB)含量显著高于母羊(P<0.05),其余各项指标均无显著差异(P>0.05)。综上所述,萨杜湖杂交羊在生长发育等方面都有不同程度的改进和提高,本试验结果可为该品种杂交羊进一步开发利用提供参考依据。     

牛生产实习课程的实习方法完善与实践

生产实习是提高学生综合素质的实践教学环节。校企实习基地建成以来对生产实习教学模式进行研究改进,以创新和创业型人才为培养目标、以参与牛生产全过程为导向对牛生产实习课程方法和内容进行完善和实践;用开放教学理念和方法把该课程分成教学实习、生产实习、科研实习和兴趣实习等4个实习模块,按实习模块化实施开放式的实习方法明显提升了学生实习兴趣和专业实践能力,提高了其观察问题和解决问题的能力。     

西藏疯草研究进展

通过查阅现有文献资料和实地调查结果表明,西藏共有疯草类有毒植物22种,其中棘豆属植物14种,黄芪属植物8种。疯草对西藏草地畜牧业生产危害十分严重,引起大批牲畜中毒死亡,造成严重经济损失;影响畜种改良,畜群结构严重失衡;破坏草地生态平衡,致使草地退化。西藏目前针对疯草的防除措施主要有人工挖除和应用化学除草剂灭除,并且应用解毒药物和生态控制工程预防和防治牲畜疯草中毒。疯草类植物虽然有毒,但含有较高的粗蛋白和含硫氨基酸,粗纤维含量较低,可作为动物饲料或药物进行开发利用。     

副猪嗜血杆菌感染豚鼠试验及在其体内的分布

为了评估副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)对豚鼠的毒力以及在豚鼠组织器官的分布,作者采用改进的寇氏法测定了H.parasuis血清5型标准株对豚鼠的LD50,以1 LD50剂量经鼻腔、气管、肺、腹腔、肌肉和皮下接种感染豚鼠,比较不同途径感染H.parasuis对豚鼠致病性的差异;以1 LD50剂量气管接种豚鼠,接种后在不同时间取豚鼠的脑、心、肝、肺、脾和肾组织,制作石蜡切片,用免疫组化技术检测H.parasuis在豚鼠上述组织的分布.结果显示该H.parasuis血清5型标准株的LD50为1.33×109 CFU,LD50的95%可信限范围为1.35×109～1.30×109 CFU;感染试验结果显示,气管、肺和腹腔3个接种途径试验组豚鼠出现了4/8、2/8和5/8的死亡;在气管感染豚鼠6 h后,首先在肺脏组织呈现阳性结果,在感染8 h后,上述组织中都出现了阳性结果.结果表明气管、肺、腹腔和肌肉4个途径都可以使H.parasuis对豚鼠致病,免疫组化检测并结合细菌分离结果表明H.parasuis感染后能侵染肺、心、肝、脾和肾组织,并能突破血一脑屏障而侵染脑组织.     

蒺藜苜蓿叶绿体密码子偏好性分析

本文对蒺藜苜蓿叶绿体基因组全序列密码子进行分析,筛选出50条CDS(coding DNA sequence)利用CodonW软件进行分析其密码子使用模式。结果显示,蒺藜苜蓿叶绿体基因组密码子第3位碱基GC含量为26.9%,即第3位密码子富含A和U,ENC值在37.11~51.91之间密码子偏好性较弱。相对同义密码子使用度分析显示RSCU值大于1的密码子有23个,其中以A和U为结尾20个。中性绘图分析显示GC₁₂与GC₃的相关系数为0.341,相关性不显著,回归系数为0.4843;单基因ENC比值多分布在-0.05~0.05,即大部分基因ENC值离ENC期望值较近;对应性分析,第一轴显示了12.50%的差异为主要影响因素,第一轴与ENC和GC₃的相关系数分别为0.091和-0.092,均相关不显著。综合这几项分析发现蒺藜苜蓿叶绿体基因组密码子偏好性主要受到突变的影响,但是并不是唯一的影响因素,其他因素对密码子偏好性也可能有一定的影响。最终通过高表达优越密码子方法确定得出UUA、UUG、CCU等23个密码子为最优密码子,为之后对外源基因进行改造,提高其在叶绿体中的表达效率奠定了基础。