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51.
通过重叠PCR扩增得到烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)中国分离物RdRp的编码序列,构建以pMALC2X为基础载体的原核表达载体pMAL-TB-RdRp。0.5 mM IPTG诱导可特异性表达分子量约为120 kDa的MBP-RdRp融合蛋白。温度梯度实验显示,18℃下诱导表达的MBP-RdRp融合蛋白的可溶性比例较高,约17%;经亲和层析纯化的MBPRdRp可特异性识别TBTV正链和负链的3'末端序列,催化体外复制;对正负链的3'末端的体外复制效率存在差别,识别负链3'末端的体外复制效率明显高于正链3'末端。本研究创建的TBTV RdRp介导的体外复制体系为进一步研究TBTV基因组复制调控奠定了基础。 相似文献
52.
53.
通过TAIL-PCR 染色体步移技术,从甘蓝(Brassica oleracea L. var. capitata L.)基因组中克
隆到胞质雄性不育(OguCMS)相关基因BoMF1 翻译起始位点上游521 bp 的启动子序列。软件分析预测
表明,该启动子序列中存在多个顺式作用元件,包括TATA-box、CAAT-box、MYB 结合位点、植物激
素响应单元等。为了研究该启动子的表达特性,亚克隆了BoMF1 转录起始位点上游521 bp 序列,将其置
换pBI121 中的CaMV35S 启动子,驱动其下游的GUS 基因,构建植物表达载体pBI121-BoMF1P,以pBI121
空载体作为阳性对照,通过农杆菌(LBA4404)介导法转入拟南芥。结果表明,甘蓝BoMF1 启动子序列
能驱动GUS 基因在拟南芥花药发育晚期的花药和花粉中特异表达,表达具有组织特异性。 相似文献
54.
55.
应用3种肿瘤细胞模型对未破壁灵芝孢子、机械破壁灵芝孢子和全灵芝剥壁孢子进行抗肿瘤试验研究。结果表明,未破壁及不同破壁方式的灵芝孢子对人恶性乳腺癌细胞(MT-1)、人恶性淋巴癌细胞株(Jurkat)、人恶性脑肿瘤细胞(U343)均有不同程度的抑制作用,抑制效果强弱为全灵芝剥壁孢子机械破壁灵芝孢子未破壁灵芝孢子,表明破壁的确能提高灵芝孢子对肿瘤细胞的抑制作用,而且选择破壁的方法也很重要,生物酶法破壁能使灵芝孢子的生物活性成分得到充分释放,所以大大提高灵芝孢子的功效。 相似文献
56.
57.
AIM: To investigate the effect of SIRT1 on the autophagy of pancreatic cancer cells under hypoxia condition, and to analyze the underlying mechanism of regulating FOXO1/RAB7 signaling pathway. METHODS: Western blot and immunofluorescence methods were used to determine the expression of SIRT1 in the pancreatic cancer cells. The small interfering RNA targeting SIRT1 and SIRT1 over-expression plasmid were transfected into the pancreatic cancer Panc-1 cells. Confocal microscopy was used to detect the LC3 expression. Western blot was used to analyze the protein levels of LC3, p62 and FOXO1/RAB7 signaling pathway-related molecules. Co-immunoprecipitation was used to detected the protein interaction between SIRT1 and FOXO1. RESULTS: The expression level of SIRT1 in the nucleus of Panc-1 cells was increased under hypoxia condition. Compared with negative control under hypoxia condition, knock-down of SIRT1 expression attenuated the autophagy flux in the pancreatic cancer Panc-1 cells (P<0.05). Over-expression of SIRT1 increased the protein levels of FOXO1 and RAB7. On the contrary, knock-down of SIRT1 expression inhibited the protein levels of FOXO1 and RAB7. The protein interaction between SIRT1 and FOXO1 in the pancreatic cancer cells was observed. CONCLUSION: SIRT1 in pancreatic cancer Panc-1 cells under hypoxia condition is over-expressed in the nucleus. Down-regulation of SIRT1 inhibits autophagy and its mechanism may be related to FOXO1/RAB7 signaling pathway. 相似文献
58.
59.
60.
蓝莓枝枯病病原菌鉴定 总被引:6,自引:0,他引:6
蓝莓 (Vaccinium spp.),是一类属于杜鹃花科 (Ericaceae) 越橘属 (Vaccinium) 的多年生小浆果类果树,广泛地应用于医药、保健、化妆品和环境保护等各方面,联合国粮农组织将其果实列为人类世界五大健康食品之一,也是我国南方酸性土丘陵地区值得发展的经济作物。全国已超过 10 个省份开始大面积的蓝莓商业化栽培,预计未来 10 年将超过 10 万 hm2 [1]。但是,随着生产面积的不断扩大,蓝莓病害也日趋严重,严重影响和制约蓝莓产业的发展。2010年至今,在云南省昆明市周边及丽江市蓝莓种植区发生一种病害,主要为害嫩枝、枝条和主干,发病初期,感病枝条上产生红褐色圆或椭圆形坏死斑,随后逐渐扩大,造成枝条干枯死亡,并可扩展造成主干枯萎。调查发现,该病发病率通常在 10%~20%,重者可达 25% 以上,可引起蓝莓整株枯萎死亡。本文通过病原菌分离、致病性测定及传统、分子鉴定,明确了该病的病原,以期为病害防治提供理论依据。 相似文献