Investigation and integrated molecular diagnosis of root-knot nematodes in Panax notoginseng root in the field

Root-knot nematodes (RKNs, Meloidogyne spp.) are damaging pests that can infect thousands of plant species and cause enormous crop losses worldwide. Panax notoginseng is a common host of root-knot nematodes. In this study, we surveyed notoginseng gardens and determined the incidence of RKNs. Among the gardens surveyed, 71 % were infected with RKNs, and the RKN incidence index ranged from 8 % to 47 % in three randomly infected gardens. Meloidogyne hapla was identified as the pathogenic nematode based on 18S ribosomal RNA analysis by DNA barcoding. The results were qualitatively and quantitatively confirmed using a real-time PCR assay according to variations in the ITS1 and ITS2 regions. These results indicated that the combination of DNA barcoding and real-time PCR is a reliable and precise method for identifying parasitic nematodes from mixed-infected plant roots in the field. In addition, the abundance of ITS1 and ITS2 displayed a similar trend to the numbers of RKNs in the three gardens, which suggests that the results of real-time PCR can be used to determine the damage caused by M. hapla in the field. Our studies show that RKNs are common and can cause serious damage to notoginseng. We present an integrated method of detecting mixed nematode species in the field and confirm M. hapla as the target for parasitic nematode control in notoginseng gardens. Our results contribute to the improvement of RKN control in notoginseng and further promote the sustainable development of medicinal plants.     

咪鲜胺·抑霉唑混配制剂的反相离子对液相色谱分析

本文采用反相离子对色谱梯度洗脱外标法对咪鲜胺．抑霉唑乳油的2种有效成分进行一次性定量检测,采用C18色谱柱,以0．012mol／L庚烷磺酸钠(pH=2．5) 甲醇=30 70;20 80为流动相,流速1．5mL／min,二极管阵列检测器,检测波长：220nm。该方法中咪鲜胺和抑霉唑的标准偏差分别为0．065和0．024,变异系数分别为0．53％和1．13％．线性相关系数分别为0．9994和0．9995,平均回收率分别为99．4％、100．1％。     

我国生猪生产的波动性研究

本文针对生猪产量数据存在的问题,对肉类市场放开至第一次农业普查期间的生产数据进行了调整,在此基础上运用趋势分解法描述了改革开放后我国生猪生产的波动情况,进而对历史数据所描述的波动特征表示置疑,认为我国生猪生产存在明显的周期性,最后提出当前我国生猪生产急需采取的一些必要措施,以建立生猪供给安全长效机制。     

江苏地区猪圆环病毒2型流行病学调查

应用复合PCR方法,对江苏地区的162份可疑病料进行了检测,结果72份病料为PCV2阳性,17份为PCV1阳性,其中7份同时感染PCV1和PCV2。从发病时间看,以9~11月发病最多,阳性率高达54.67%。样品较多的保育猪和育肥猪的阳性率分别是26.03%和68.12%。通过流行病学调查,表明该病已在江苏地区呈流行趋势。同时对18头PCV2阳性猪病料的心、肝、脾、肺、肾、脑、腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、扁桃体进行PCV2检测,结果有7头PCV2阳性猪的各个脏器都能检测出PCV2;在这些脏器中,肺、腹股沟淋巴结、扁桃体的检出率都为100%,较其他受检脏器更适合作为PCV2的检测样品。     

产蛋下降综合征（EDS－76）病毒DNA探针的制备及应用研究

用纯化的产蛋下降综合征（ＥＤＳ－７６）病毒（Ｈ９１毒株）悬液提取的核酸，经琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量较大、背景清晰的核酸带。用ＢａｍＨＩ酶消化产生４个片段，大小分别为１７ｋｂ、１０ｋｂ、４．０ｋｂ和２．０ｋｂ。将其中的２．０ｋｂ片段克隆进ｐＵＣ１８ＤＮＡ载体中，重组质粒ＤＮＡ用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记作为ＤＮＡ探针，在ｄｏｔｂｌｏｔ中该探针不与鹅胚尿囊液核酸抽提物、马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＤＮＡ、鸡传染性贫血病毒（ＣＡＶ）ＤＮＡ、ＳＰＦ鸡基因组ＤＮＡ等核酸反应，只与３株ＥＤＳ病毒（ＥＤＳ标准毒株ＡＶ－１２７、ＥＤＳＨ９１毒株和从健康鹅体中分离的ＥＤＳＹ８１毒株）ＤＮＡ呈阳性反应。人工感染产蛋母鸡和雏鸡后２４ｈ即可用该探针从泄殖腔棉拭子样品中检测出ＥＤＳ病毒ＤＮＡ，在感染后３５ｈ仍能从部分感染鸡样品中检出。对部分探针检测阳性鸡的泄殖腔棉拭子样品用ＳＰＦ鸡胚分离病毒，并用ＨＡ和ＨＩ试验检测分离病毒的特异性；在感染过程中，同时检测了血清中ＨＩ抗体的消长情况。结果表明，人工感染鸡排毒至少可以维持２个月左右，而且血清中ＨＩ抗体即使很高，也不能阻止感染鸡的排毒。     

新城疫病毒融合蛋白裂解位点基因的分离克隆及在原核细胞中的表达

用ＳＰＦ鸡胚繁殖新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ４６Ｅ９株（强毒）、ＬａＳｏｔａＥ４株（弱毒），对病毒进行纯化，抽提ＲＮＡ。用１对均为２７个碱基的引物进行ＲＴ－ＰＣＲ，扩增出了２个毒株的融合蛋白裂解位点（Ｆｃ）基因。将Ｆｃ基因定向克隆入ｐＵＣ１８的ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ位点之间，获得２个毒株Ｆｃ基因克隆ｐＵＣＦ４６Ｆｃ和ｐＵＣＬａＦｃ，用ＥｃｏＲＩ／ＳａｌⅠ双酶切法、ＰｓｔⅠ单酶切法、ＰＣＲ法和核酸探针法对其进行了鉴定。将鉴定好的ＬａＳｏｔａＥ４Ｆｃ基因定向导入表达载体质粒ｐＢＶ２２１，获得重组子ｐＢＶＬａＦｃ。ＰＣＲ和内切酶酶切法鉴定表明，Ｆｃ插入的位置和方向都正确无误。用Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α通过热诱导法进行了表达。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ法检测了表达产物。结果表明，有１条能够与ＮＤＶ多抗反应的特异条带，分子量约１５７００，与预期大小一致，说明是Ｆｃ基因的表达产物     

黄芪多糖对雏鸡外周血T淋巴细胞转化功能的影响

将１０８只１日龄伊莎系蛋用公雏均分为３组：一组为对照,其余２组在３日龄时,于背侧颈部皮下分别注射０．２、０．４ｍＬ黄芪多糖注射液（０．０１ｇ／ｍＬ）１次,再分别于７、２１、３５、４９日龄时采用ＭＴＴ比色法及微量全血培养３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测外周血Ｔ淋巴细胞转化率的动态变化。结果表明,黄芪多糖对２１、３５日龄雏鸡Ｔ淋巴细胞转化功能有增强作用,且与剂量有相关性,而对７、４９日龄雏鸡的作用不明显。ＭＴＴ比色法与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法的检测结果无显著差异（Ｐ＜０．０５）。     

猪瘟病毒C株检测用国家核酸标准物质的研制

为研制均匀、稳定的猪瘟病毒（CSFV）核酸标准物质,选择CSFV C株接种于PK-15细胞并收获病毒液,然后经过病毒灭活、分装、冻干,最终形成核酸标准物质。用微滴式数字PCR对制备的CSFV标准物质进行均匀性和稳定性评估、标准物质合作定值,在评定不确定度后计算得出最终量值结果,并开展临床试用。结果显示,该标准物质均匀,4 ℃条件下可稳定存放4周,25 ℃可稳定存放1周,-20 ℃可稳定存放11个月,量值结果为（5.1±0.7）×105 copies/mg;临床试用显示,所制备的标准物质与临床样本的互通性良好。本研究制备的CSFV C株国家核酸标准物质均一性良好、稳定、量值准确度高,并通过了全国标准物质管理委员会评定,可用于动物及动物产品质量安全检测,从而有效保障猪瘟防治工作的开展。     

猪细小病毒的PCR检测、分离及鉴定

根据GenBank中报道的猪细小病毒基因组序列,利用PCR引物设计软件,设计并合成了1对引物,通过对PCR反应条件的优化,成功地扩增出了511bp的目的片段,建立了PCR检测PPV的方法。利用该方法对120份临床样品进行检测,共检测到4份阳性样品,并成功地分离到2株PPV,1#病毒分离株理化特性鉴定表明其符合PPV的特性。     

奶牛体型线性性状与其成年奶当量相关与通径分析

本文对1990—1991年度双桥农场3个奶牛场603头荷斯坦奶牛体型线性性状评分与其成年奶当量进行了相关通径分析,数据采用dBASE Ⅱ进行管理,应用Turo-Basic编程在AST-286进行计算分析。分析表明：奶牛体型线性性状中,乳房深与成年奶当量呈较强负相关r=-0．4266;尻宽与产奶量呈正相关(r=0．2939);这二者是影响成年奶当量的主要性状。