Application of PCR-HRM in the study of relationship between leptin gene promoter polymorphisms and liver cirrhosis

AIM: To analyze the feasibility of PCR-high-resolution melting curve analysis (HRM) for detecting the site mutations of C2549 and G2548 in leptin gene promoter from the patients with liver cirrhosis, and to explore the relevance between mutant genotypes and physiological and biochemical indexes in liver cirrhosis patients. METHODS: Compared with the method of PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP), the present research used the method of PCR-HRM to analyze the site mutations of C2549 and G2548 in leptin gene promoter in control group (n=100) and liver cirrhosis group (n=100). The physiological and biochemical indexes of the patients were also detected and compared. RESULTS: Leptin gene promoter polymorphism was detected using PCR-HRM with effectiveness, high flux and accuracy. Preliminary results showed that the main mutation of the patients with liver cirrhosis was in C2549 site, but not found in G2548 site. Leptin, free leptin index (FLI), fasting insulin (FINS) and insulin resistance index estimated by homeostatic model assessment (HOMA-IR) in liver cirrhosis group were higher than those in control group. Insulin sensitivity index (ISI) and soluble leptin receptor (sOB-R) in liver cirrhosis group were lower than those in control group with significant difference except leptin level. Meanwhile, FLI showed positively correlated with FINS and HOMA-IR (r=0.45, r=0.53, P<0.05), and negatively with ISI (r=-0.34, P<0.05). In the patients with liver cirrhosis, C2549A heterozygous mutation was predominant. The indexes of HOMI-IR, leptin, sOB-R and FLI of C2549A homozygotes and heterozygotes were higher than those of the wildtypes, which showed significant difference except leptin and sOB-R levels (P<0.05). CONCLUSION: PCR-HRM can be more accurate for identifying leptin promoter polymorphism. The increase in the frequency of C2549A mutation may be closely related with liver cirrhosis. Existence of hyperinsulinemia and insulin resistance may be correlated with leptin level in the patients with liver cirrhosis.     

施肥对热带雨林下种植砂仁土壤氮矿化和硝化作用的影响

采用封顶埋管法(Close-TopIncubation)研究了施肥后西双版纳热带雨林下种植砂仁土壤的氮素净氨化、净硝化和净矿化速率。结果表明,种植砂仁的热带雨林土壤有机氮的净氨化、硝化和矿化速率明显受外来无机氮的影响,施入铵态氮肥后,土壤中的氨化速率明显提高(P<0.01),由对照土壤的-0.66(mg·kg-1·30d-1)增加至施肥处理土壤的1.65(mg·kg-1·30d-1),但硝化速率和矿化速率却显著降低(P<0.01),分别由对照土壤的6.79(mg·kg-1·30d-1)和6.13(mg·kg-1·30d-1)减少至施肥处理土壤的2.60(mg·kg-1·30d-1)和4.25(mg·kg-1·30d-1),导致了土壤中NH4+-N的积累。     

4个紫花苜蓿品种对低温胁迫的生理响应及抗寒性评价

本研究选取'肇东'、'龙牧801'、'东农1号'、'敖汉'4种紫花苜蓿(Medicago sativa)作为研究对象,进行低温胁迫试验,通过对生理生化指标和叶片解剖结构的观测分析,综合比较了4种紫花苜蓿的抗寒性.结果表明:低温胁迫下,4种紫花苜蓿相对电导率、丙二醛含量、可溶性糖含量、游离脯氨酸含量、过氧化物酶和超氧化物歧化酶活性与对照相比有所上升,其中'肇东'各个指标的上升幅度均最大.通过隶属函数综合分析得出,4种紫花苜蓿的抗寒性为'肇东'>'龙牧801'>'东农1号'>'敖汉'.通过观测4种苜蓿的解剖结构发现,抗寒性较强的'肇东'和'龙牧801'的叶片厚度、栅栏组织厚度和海绵组织厚度小于抗寒性较弱的'敖汉',且细胞结构更为紧密.     

猪场生物安全体系中十个通道的设计应用

2018年8月开始,非洲猪瘟在我国快速多点发生,该病是高度接触性传染性疾病,目前无有效的疫苗和药物控制,各大公司和养殖户开始了猪场生物安全体系的升级改造。两年后我国大部分猪场的成功复产,全国生猪出栏量的大幅提升,证明了生物安全措施巨大效力;同时在严格的生物安全措施下创新了精准剔除、快速复产等操作,进一步证明了生物安全措施的有效作用。文章主要介绍猪场生物安全体系中入口(大门)和出口(后门)最为关键防线处的通道设计,方便所有的生物安全操作能够高效落实,切断病原轻易进出猪场的途径。     

月季干燥花护形护色的研究

以广州当地红色切花月季为试材,分别采用细沙、硅胶、硅胶+细沙这3种包埋剂,结合高火、中高火、中火这3种微波火力和5个不同干燥时间的试验处理组合,通过分析月季花朵在干燥过程中花色、花瓣质感、花瓣牢固性等指标的变化规律,研究了鲜花干制过程中的保色保形问题.结果表明:包埋剂结合微波处理能有效的降低干燥花花瓣的皱缩程度,提高干花的综合外观品质;其中硅胶+细沙包埋结合微波中高火4min处理的保色保形效果最佳.     

桦褐孔菌发酵液提取物小鼠体内抗H_(22)肝癌的作用

为确定桦褐孔菌发酵液提取物的毒性级别,研究对H22肝癌小鼠的抗肿瘤及免疫调节作用。依据2004年实施的《急性毒性试验国家标准》进行急性毒性研究和级别鉴定,同时建立H22肝癌的荷瘤小鼠模型进行小鼠体内抗肿瘤的研究,并采用MTT法检测荷瘤小鼠自然杀伤细胞活性(NK)及T淋巴细胞增殖情况。结果表明,桦褐孔菌发酵液提取物(IOFE)的LD50为15.02 g·kg-115 g·kg-1,属无毒级别。与阴性对照和阳性对照比,体重、采食量均稳定增长,抑瘤率为44.25%,可显著提高NK细胞活性67.13%(p0.01),但对T淋巴细胞增殖率效果不明显。桦褐孔菌发酵液提取物具有较好的抗肿瘤作用,且毒性极低,抗肿瘤作用可能是通过提高机体免疫活性尤其是NK细胞的杀伤活性实现的。     

黄瓜功能基因研究进展

 综述了近年来有关黄瓜（Cucumis sativus L.）性别分化、果实发育、植株发育、胁迫与刺激、品质成分的功能基因研究的主要进展,为今后研究提供参考。     

山羊痘病毒的分离鉴定及生物学特性的研究

本研究对2003年广西部分地区山羊群发生的疑似山羊痘进行了病毒分离鉴定及生物特性的研究。取疑似山羊痘病羊的皮肤丘疹、水泡或脓泡组织的病毒悬液，接种初生羔羊睾丸细胞观察到明显的细胞病变，免疫荧光试验结果显示，病毒能与山羊痘标准阳性血清反应，在感染的细胞浆内发出特异性的黄绿色荧光。病毒悬液接种乳鼠、小鼠、豚鼠、兔子都未发病，而接种3月龄山羊则出现典型的山羊痘症状和病理变化，接种9～10日龄鸡胚绒毛尿囊膜，未见出现痘斑，连传3代，均无异常变化。通过病理组织学观察可以看到在细胞浆内有大小不一圆形或椭圆形的包涵体，在电子显微镜下可以观察到150nm～300nm大小，卵圆形、砖形，有囊膜的病毒颗粒。利用一对山羊痘病毒P32基因引物进行了PCR扩增，将所得序列与GenBank收录的5株山羊痘病毒P32基因的核苷酸及氨基酸序列比较分析。结果与疫苗株的同源性分别为99．8％和99．4％。与国外其它毒株的同源性为99．6％和98、8％～99．4％。研究结果表明，所分离的病毒为山羊痘病毒，在生物学特性上与资料记载存在一定的差异，P32基因与疫苗毒和国外毒株之间同源性非常高。将该毒株命名为山羊痘病毒LiuJiang／2003株。     

丽江松茸产区植物群落特征

抽样调查了云南丽江拉市松茸(Tricholoma matsutake)产区的植物群落特征,结果表明,丽江拉市松茸产区共有种子植物73种,隶属于25科58属,该松茸产区植物群落结构简单,主要优势的乔、灌木包括云南松(Pinus yunnanensis)、高山栎(Quercus semecarpifolia)、黄背栎(Quercus pannosa)、苞片越桔(Vaccinium bracteatum)等;该区域云南松平均株高为398 cm,平均胸径为7 cm,盖度30%,树龄在15～30年之间.松茸菌塘周围植被的调查结果表明,野古草(Arundinella anomala)、疏花翦股颖(Agrostis perlaxa)、网叶木蓝(Indigofera reticulata)、草血竭(Polygonum poleaceum)和心叶獐芽菜(Swertia cordata)是优势植物.     

绿僵菌油剂防治新疆山地草原蝗虫的田间试验

用绿僵菌油剂在新疆山地草原对蝗虫进行了防治试验。喷药后采样,罩笼饲养从第3天开始感病死亡,第5天死亡明显增多,第6天绝大部分蝗虫死亡。该绿僵菌在自然条件下对试验区内的5种蝗虫具有相同的感染致病力。田间防效在第15天为60.9%,第18天为73.7%。