表达RGD和MEL重组沙门氏菌的构建及其对B16细胞凋亡作用的研究

为研究融合表达肿瘤靶向肽(RGD)和蜂毒肽(MEL)双基因重组减毒沙门氏菌对小鼠黑色素瘤B16细胞的体外抑瘤作用,本实验将RGD-MEL基因片段克隆至pEGFP-N1载体,将重组载体导入减毒沙门氏菌LH430,构建了重组沙门氏菌LH430/pEGFP-RGD-MEL,经PCR技术、质粒双酶切鉴定后采用阳性重组菌株侵染体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞,提取细胞总RNA经反转录后采用PCR检测目的基因RGD-MEL转录情况,western blot检测目的蛋白RGD-MEL以及凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax的表达;流式细胞术检测B16细胞凋亡情况。结果显示:导入RGD-MEL基因的减毒沙门氏菌LH430侵染B16细胞后,目的基因RGD-MEL高效表达;经重组菌株侵染的B16细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax表达水平均显著增高(p<0.05);重组沙门氏菌诱导B16细胞的凋亡作用较PBS组显著增强(p<0.05)。本研究为细胞穿膜肽和细菌联合治疗肿瘤提供实验支持,并为后续动物试验奠定了研究基础。     

利用EST数据库资源克隆家蚕Bombyx mori6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因

以果蝇6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(6-[jps[jpg;icpmate dehydrogenase,6PGDH)基因cDNA序列为信息探针,对家蚕EST数据进行同源检索筛选,克隆到了家蚕6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因的cD-NA序列,该基因全长2011bp.经RT-PCR克隆、序列分析验证,结果表明与电子克隆序列完全一致;该基因具有完整的开放阅读框(0RF),编码蛋白为483个氨基酸;通过与人、果蝇、家鼠、摇蚊、线虫的6PGDH蛋白序列比较,发现该基因具有高度的保守性.     

伊犁马速步赛成绩与体尺性状的相关性研究

试验对伊犁马速步赛的体尺性状与比赛成绩之间的相关性进行了研究。测定速步赛中不同比赛项目伊犁马的体高(X₁)、体长(X₂)、胸围(X₃)和管围(X₄),计算体长率(X₅)、胸围率(X₆)和管围率(X₇),并用SPSS 18.0软件分析其与比赛成绩之间的相关性。结果表明,在不同的比赛项目中,体尺性状与比赛用时有显著或极显著的相关性(P<0.05;P<0.01)。1000 m速步赛中比赛用时随体高、体长、胸围的增大而减少,随管围、胸围率和管围率的减小而减小;3000 m速步赛中比赛用时随体高、体长的增大而减小,随胸围率和管围率的减小而减小;5000 m速步赛中比赛用时随体高、胸围、体长的增大而减小,随管围率的减小而减小。     

不同方法测定反刍动物饲料NDF、ADF和木质素含量的比较

采用传统抽滤、ANKOM滤袋和CAU滤袋技术测定16种反刍动物饲料的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和木质素(PL,高锰酸钾法)含量。结果表明:3种方法测定的大部分饲料的NDF、ADF和PL含量间没有差异(P>0.05),但在测定谷物性饲料NDF含量时,ANKOM滤袋技术测定值明显低于其他2种方法(P<0.05);在测定动物性蛋白质饲料时,CAU滤袋测定的NDF值明显高于其他2种方法(P<0.05)。3种方法测定的NDF、ADF和木质素含量均具有显著的线性相关关系(R2=0.990～0.996),其中2个滤袋技术测定值之间的相关程度最高(R2=0.992～0.996);2个滤袋技术测定值的变异系数(CV=2.20%～3.96%)均小于传统抽滤(CV=3.21%～4.91%)。     

对桑树作为造林绿化树种的探讨

桑树的特性主要是根系发达、适用性强,桑树的品种资源丰富、品系多样。桑树具备水土保持、防风固沙、水源涵养、园林绿化等多种生态功能。桑树的桑叶、桑果、桑枝、桑皮均可应用转化成为许多环保产品。为了探讨桑树作为造林绿化树种的可行性,对桑树的特性、功能、效益状况等做了深入分析,并从政府出台相关政策层面上提出了几点建议。     

不同日粮组成对断奶初期奶公犊瘤胃内环境指标的影响

选用3头三月龄左右装有瘤胃瘘管的荷斯坦奶公犊,按3×3完全拉丁方试验设计,喂给三种日粮.日粮组成按精粗比分别表示为7030;6040;5050,研究不同日粮组成对断奶初期奶公犊瘤胃内环境指标包括pH值、氨氮(NH3-N)浓度、纤毛虫数量及微生物蛋白的影响.试验结果表明精粗比为7030日粮条件下奶公犊瘤胃内pH值显著低于其它组(P＜0.01),7030日粮组瘤胃内NH3-N浓度显著高于精粗比为6040和5050日粮(P＜0.01).不同日粮组成下精粗比为6040和5050日粮的瘤胃纤毛虫数量和微生物蛋白显著高于高精料组7030日粮(P＜0.01).     

家蚕法尼酸甲基转移酶(FAMeT)基因的鉴定及表达模式分析

保幼激素(JH)是昆虫生长、发育、变态和生殖等一系列生理生化过程中必不可少的一类激素。法尼酸甲基转移酶(farnesoic acid O-methyltransferase,FAMeT)被认为是昆虫及其它节肢动物催化合成保幼激素前体甲基法尼酸(methyl farne-soate,MF)的关键酶。通过生物信息学分析,从家蚕全基因组数据中共鉴定了7个编码家蚕FAMeT的基因(BmFAMeT1～BmFAMeT7)。系统进化分析暗示BmFAMeT2可能是家蚕FAMeT家族成员的最原始拷贝。对其中位于6号染色体上的BmFAMeT5、BmFAMeT6和BmFAMeT7的时空表达谱分析显示,3个基因从家蚕胚胎发育后期至成虫期持续性表达;在5龄第3天幼虫中肠组织特异性高水平表达。利用RACE技术克隆获得了这3个基因的全长cDNA序列,并发现BmFAMeT5及BmFAMeT6分别存在2种不同的选择性拼接形式。上述结果为进一步研究家蚕FAMeT的生物学功能提供了线索。     

中国奶牛养殖模式及效益分析

中国奶牛养殖正由数量增长向质量增长方式转变,目前我国奶牛养殖仍以奶牛饲养小区为主体（集中饲养地、集中挤奶、统一防疫、分户管理、分户结算）,奶牛养殖小区农户养殖的奶牛总数占全国总存栏的70％以上,这对我国奶牛养殖业发展产生巨大影响,暴露出很多问题,必须向现代养殖模式转型,转型的主要方向是适度规模的家庭式奶牛场或股份合作制奶牛场,与其他大中型奶牛场一起成为我国现代奶牛场养殖组织模式,用5年时间使我国成乳牛胎泌乳量达到7 000 kg/头,实现奶牛养殖业发展以质量型发展为主,通过奶牛养殖模式转型促进我国奶牛养殖业可持续健康发展.     

单核细胞增生性李斯特菌感染ICR小鼠模型的建立

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。现广泛使用具有免疫活性的小鼠模型测定半数致死量(LD₅₀)来评价不同LM菌株的致病性。为建立LM的ICR小鼠模型,本研究采用1/2a血清型的N21 LM菌株,分别以10⁶、10⁷、10⁸、10⁹和10¹⁰ CFU的剂量口腔灌注感染6周龄ICR小鼠,每组10只;另取10只接种PBS作为对照组,测定LM对ICR小鼠的LD₅₀;另取40只小鼠,平均分为2组,公母各半,以测定的LD₅₀剂量接种LM,分别对各组小鼠临床症状、组织病理变化、体重变化及组织中细菌载量进行评价。结果发现,N21 LM菌株对ICR小鼠的LD₅₀为10^9.25 CFU;感染周期为10 d左右,感染小鼠出现被毛粗糙、精神萎靡、阴茎垂出及体重下降等临床症状。组织病理学分析结果显示,肝脏先后出现实质内灶状细菌团块、形成血栓、细胞坏死等;脾脏主要表现为白髓内淋巴细胞减少;肺脏主要表现为纤维素性肺炎。菌落计数和Real-time PCR的检测结果发现肝脏中细菌载量最高,脾脏次之。结果表明,ICR小鼠能作为单核细胞增生性李斯特菌的感染模型。本试验结果为研究LM的致病机制、疫苗研究及抗菌肽转基因小鼠抗LM的评价奠定了基础。