杨梅酸性转化酶基因cDNA分离及表达分析

杨梅果实富含蔗糖,酸性转化酶是蔗糖代谢关键酶,根据植物酸性转化酶基因保守区序列设计引物,提取杨梅叶片RNA,逆转录获得cDNA,以此为模板通过PCR技术扩增到长度为516bp的基因片段,克隆入pMD18-T载体中,命名为MrIVR1(GenBank:DQ339699)。测序及同源性检索表明,该基因推导氨基酸序列与君子兰、葡萄、草莓、胡萝卜等酸性转化酶基因氨基酸序列同源性为60%～69%。运用ClustalX软件对植物转化酶基因进行了系统树分析,结果显示,MrIVR1编码的蛋白质属于细胞壁酸性转化酶。半定量RT-PCR表达分析显示,MrIVR1基因在杨梅果实发育早期表达量最高,随着果实的发育表达量下降,在成熟果实中表达水平较低。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒基因芯片检测技术的建立与优化

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的核衣壳蛋白编码基因序列设计了一对特异性引物P1／P2。扩增出大小为294bp的目的片段；再针对这个基因片段。设计合成4条寡核苷酸探针。其中反向引物的5’端用荧光素Cy3标记。以荧光标记不对称PCR技术为基础。通过将单链PCR产物与芯片杂交实现对PRRSV的检测。建立PRRSV的基因芯片检测方法。利用该方法对39份猪组织样品进行检测。与RT—PCR检测方法相比。本方法具有良好的特异性和敏感性。试验结果表明用该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的，对该病的进行快速诊断和分子流行病学调查具有重要意义。     

苏云金芽胞杆菌伴胞晶体蛋白对猪体内蛔虫的作用及其血液生理生化指标的分析

感染性猪蛔虫卵以每头份3000个卵的量感染断奶仔猪，于第3天开始肌肉注射不同剂量苏云金芽胞杆菌晶体蛋白（insecticidal crystal proteins，ICPs），每天1次，连续4d。同时测定猪血液生理生化指标，饲喂2个月后收集猪粪便计算虫卵数。结果显示，感染猪出现咳嗽、发热等临床症状，GOT、GPT、ALP、LDH等指标明显升高，经ICPs治疗后又恢复正常。粪便检查，ICPs高剂量组（16．08mg）的EPG（每克粪便虫卵数）为0，而ICPs低剂量组（9．45mg）的EPG为394，未经ICPs作用对照组EPG为2113，差异极显著（P〈0．01），证明ICPs对猪体内猪蛔虫具有较好的杀灭作用。     

表达猪流感病毒血凝素基因的重组腺病毒的构建及免疫原性分析

通过细菌内同源重组的方法成功构建了表达H3N2亚型猪流感病毒血凝素的重组腺病毒。首先将血凝素基因亚克隆到穿梭载体质粒pAdeno Vator-CMV5-IRES-GFP上，与腺病毒基因组质粒pAdeno Vator△E1／E3共转化大肠杆菌BJ5183菌株，经细菌内同源重组产生重组腺病毒质粒pAd—HA—GFP。将该重组质粒转染293细胞以包装重组腺病毒。根据报告基因GFP的表达及Western-blot分析，证明获得了可正确表达猪流感病毒血凝素的重组腺病毒rAd—HA—GFP。重组腺病毒经一次性腹腔注射接种昆明鼠，2周后可检测到血凝抑制抗体，并且抗体至少可以持续12周，证实重组腺病毒介导表达的血凝素蛋白具有良好的免疫原性，可诱导小鼠产生高滴度的特异性抗体。     

共轭亚油酸对五龙鹅生长发育和脂质代谢的影响

1日龄五龙鹅192只，随机分为4个处理，分别饲喂共轭亚油酸（CLA）水平为0．0、5．0、15．0和25．0g／kg的日粮，通过测定不同生长阶段的体增重（BWG）、采食量（FI）、料重比（F／G）、腹脂率（AFP），以及与脂质代谢有关血清生化指标，研究不同水平CLA日粮对五龙鹅生长发育和脂质代谢的影响。结果表明：在日粮中分别添加5．0g／kg和15．0g／kgCLA，对五龙鹅BWG无显著影响（P〉0．05），能够显著降低FI和F／G（P〈0．05）；显著降低AFP和血清甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、极低密度脂蛋白（VLDL）含量（P〈0．05或P〈0．01），增加了血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量和高、低密度脂蛋白胆固醇之比（HDL-C／LDL-C）（P〈0．05）。日粮中添加25．0g／kgCLA，极显著地降低了FI和AFP（P〈0．01），对血清TG、TC、HDL-C、VLDL含量和HDL-C／LDL-C的影响差异不显著（P〉0．05）。适宜添加CLA对五龙鹅的生长发育和脂质代谢具有很好的促进和调节作用，即在五龙鹅的整个生长期内，CLA添加量不高于15．0g／kg时，不但能在不影响BWG的前提下提高饲料利用率，而且能够通过降低脂肪沉积和调节脂质代谢起到预防动脉粥样硬化的作用；但过多添加CLA（25．0g／kg）会使五龙鹅的生长发育受到抑制。     

绿头野鸭与我国主要地方鸭品种遗传多样性研究

利用17个微卫星标记,采用PCR扩增,8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染,对绿头野鸭种群和我国9个主要地方鸭品种的遗传多样性进行了检测,统计了各群体的平均有效等位基因(Ne)、平均遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC)、群体间的遗传距离(Ds)和相似系数(I)。采用UPGMA和NJ法构建系统发生树。结果表明:17个微卫星座位在绿头野鸭种群和我国9个主要地方鸭品种中的多态信息含量均为高度多态,所有鸭种的平均PIC、H、Ne分别为0.6506、0.6896、4.1±1.5,基因多态性和遗传多样性相对较高;家鸭各品种间的遗传距离在0.1631~0.6844范围内,绿头野鸭与家鸭品种间的遗传距离分别在0.3096~0.8219之间。根据系统发育树推断中国主要地方鸭品种不是单一起源于绿头野鸭。中国主要地方鸭品种大致可以分为5支。一支为北京鸭、荆江鸭,一支为中山鸭、建昌鸭及高邮鸭,一支为靖西大麻鸭和金定鸭,连城鸭为一支,绍兴鸭为另一支。     

高寒珠芽蓼草甸植被生物量的季节动态特征

调查了甘肃省天祝县珠芽蓼高寒草甸,结果表明,调查草甸的主要植物有26种,隶属13科23属。其中珠芽蓼(0.148)为优势种,次优势种有乳白香青、球花蒿、线叶嵩草等。通过对珠芽蓼草甸群落组成和结构的季节动态的研究分析发现,地上植物量在整个生长季中表现为单峰曲线,地下植物量变化呈现“V”型曲线,环境因子是制约珠芽蓼草甸植物生长发育和植物量的主导因子。     

Construction and identification of eukaryotic expression vector of bcl-2 siRNA

AIM: To construct eukaryotic expression vector of small interfering RNA(siRNA) specific to bcl-2 and investigate the effect of recombinant plasmid on suppressing bladder cancer cell growth.METHODS: siRNA of bcl-2 gene was designed according to the principle of RNAi-based medicine, and was converted into cDNA coding expression of small hairpin RNAs(shRNA) of siRNA. The cDNA was synthesized and inserted into plasmid pGenesil-1. The recombinant eukaryotic expression vectors of pGenesil-1545 and pGenesil-1555 were controlled by the U6 promoter of RNA polymerase Ⅲ, identified by the restriction map and the sequence analysis, and transfected into T24 cells. After T24 cells were transfected for 72 h, expression of bcl-2 mRNA was assayed by RT-PCR; and MTT was used to observe the proliferation of T24 cells.RESULTS: The recombinant plasmids of pGenesil-1545 and pGenesil-1555 were identified by the restriction map and the sequence analysis. The sequences completely coincided with the designs. The expression of the bcl-2 mRNA in T24 cells transfected with recombinant plasmid decreased nearly 80%, and the growth of T24 cells was suppressed significantly.CONCLUSION: The siRNA eukaryotic expression vector against bcl-2 gene is successfully constructed. It effectively downregulates the expression of bcl-2 in T24 cells and suppresses the cell growth.     

uclear factor κB in LPS stimulated rat alveolar macrophages promotes TNF-α secretion

AIM: To investigate the activation of nuclear factor κB (NF-κB) induced by lipopolysaccharides (LPS) in rat alveolar macrophages (AMs) and its regulatory role in tumor necrosis factor (TNF-α) secretion. METHODS: The dynamic activity changes of NF-κB induced by LPS were determined with electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Antisense oligonucleotides of NF-κB subunit (p65) were transfected into AMs prior to LPS stimulation. The effect of antisense oligonucleotide transfection on expressions of p65 and TNF-α in supernatant were measured with Western blotting and enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), respectively.RESULTS: NF-κB activity increased markedly and reached its peak level at 4 h after LPS stimulation. After transfected with antisense oligonucleotides of NF-κB subunit (p65), expression of p65 and TNF-α in supernatant decreased markedly.CONCLUSION: NF-κB activity has a positive effect on regulating secretion of TNF-α in AMs induced by LPS.