微生物在秸秆饲料中的应用

大力开发秸秆资源、发展秸秆饲料是高效发展畜牧业的良好前景，但许多加工秸秆的方法不能有效地解决秸秆消化率低和可利用营养物少的问题。本文推荐3种利用微生物处理农作物秸秆的方法，事实证明饲喂效果非常理想，据此提出了未来微生物处理秸秆的主攻方向。     

脾酪氨酸激酶参与酿酒酵母甘露聚糖诱导绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)的表达

为了探索脾酪氨酸激酶(Syk)是否参与酿酒酵母甘露聚糖(S.c M)诱导绵羊瘤胃上皮细胞(ORECs)β-防御素-1(SBD-1)表达的过程,首先利用免疫组化、RT-PCR和免疫荧光等方法检测Syk在ORECs内的表达情况;然后采用qPCR和Western blot方法检测S.c M刺激ORECs后Syk的表达变化,同时用Western blot方法检测Syk的磷酸化水平;接着用3条Syk特异性siRNAs(#1、#2和#3)转染ORECs 24 h后,qPCR检测Syk mRNA的表达变化,筛选出干扰效果最佳的Syk siRNA;最后用效果最佳的siRNA和Syk特异性抑制剂R406分别处理ORECs后,采用qPCR和ELISA检测SBD-1的表达变化,以确定Syk在S.c M诱导SBD-1表达过程中的作用。结果显示:Syk在ORECs内表达;且S.c M刺激ORECs后Syk的mRNA和蛋白表达水平显著高于未刺激组(P<0.01或P<0.05),S.c M刺激ORECs不同时间(5、15、30、45和60 min)均能使Syk发生磷酸化,且刺激15 min后磷酸化水平达到最大(P<0.01);此外,Syk的3条特异性siRNAs转染ORECs后Syk的表达均降低,且Syk siRNA#2的抑制效果最明显(P<0.01);同时Syk siRNA#2和R406均能极显著降低S.c M诱导ORECs SBD-1的表达(P<0.01)。上述结果表明,Syk参与S.c M诱导ORECs SBD-1的表达。     

牛支原体间接免疫酶标组织化学检测方法的建立

为建立检测牛支原体的间接免疫组织化学(简称免疫组化)方法,分别以鸡抗牛支原体(Mycoplasma bovis)IgY、羊抗鸡IgG-HRP为一抗和二抗,对牛支原体菌体涂片和牛支原体阳性肺脏组织切片进行免疫组化染色,并对染色条件进行优化,确定组织触片及组织切片的最佳免疫组化条件。在最佳条件下对病死犊牛病料切片进行免疫组化检测,并以细菌分离培养和PCR方法进行验证。结果显示,免疫组化法阳性标本与分离培养和PCR结果相符,而阴性对照和替代试验均为阴性。结果表明本试验建立的间接免疫组化方法可用于检测临床病例组织样本及培养物中的牛支原体,具有特异性和可靠性,为探究该病原在机体内的定位、动态分布规律及致病机理提供了手段。     

入境肉种鸡检出衣原体阳性及其处理

目的随着加入世界贸易组织,我国海关检疫压力增大,为了维护国家主权和国际声誉,加强出入境检验检疫势在必行。衣原体病是一种重要的人畜共患病,也给养禽业带来巨大的经济损失,必须给予足够的重视,鹦鹉热衣原体对多种动物宿主有广泛的寄生性引起不同动物的多症候群疾病,是世界动物卫生组织动物名录疾病。方法对入境的一批肉种鸡进行抽样检验,按照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准用间接血凝检测鹦鹉热衣原体病,做出试验报告。结果经检测出现阳性,肉鸡携带有衣原体病毒。结论根据中华人民共和国进出境动植物检疫法第二章进境检疫第十六条检出二类传染病、寄生虫病的动物,退回或者扑杀,同群其他动物在隔离场或者其他指定地点隔离观察。     

杀菌剂多菌灵在桑叶中的消解动态研究

多菌灵(carbendazim)是家蚕微粒子病的防治药物。将50%多菌灵可湿性粉剂分别稀释至1000和500倍药液后喷洒桑树,用高效液相色谱(HPLC)检测桑叶中多菌灵的残留和消解动态。结果表明:桑树喷洒稀释1000倍的多菌灵药液后,桑叶中药物的消解动态方程为Ct=4.5339e-0.2215t,药物的半衰期T1/2=3.13d;喷洒稀释500倍的多菌灵药液后,桑叶中药物的消解动态方程为Ct=6.0527e-0.1030t,药物的半衰期T1/2=6.73d。多菌灵在桑叶中的残留与消解动态显示低浓度(稀释1000倍)的药液在桑叶中的降解更快,所以建议生产上适当采用高浓度药液喷施桑树,并根据相应的药物消解动态数据确定桑叶采摘时期,以保证家蚕食下药叶对微粒子病的防治效果。     

BHBA对HT22细胞中ACE表达的影响

生酮饮食(KD)已被证实具有神经保护作用,但其机制尚不明确。本试验以小鼠海马神经元HT22为细胞模型,利用2 mmol/Lβ-羟基丁酸酯(BHBA)对HT22细胞进行处理,通过荧光定量PCR,免疫蛋白印迹和信号通路阻断试验,观察BHBA对HT22细胞ACE表达的影响,并探讨参与调控的信号通路。结果表明,2 mmol/L BHBA可通过激活HT22细胞内GPR109A受体和ERK1/2信号通路进而增加HT22细胞中ACE的表达。     

牧草叶绿素衍生物植烷酸对动物机体的影响

牧草中含有大量的叶绿素,而牧草不同的生长期、收获期、贮藏条件和加工方式都影响着叶绿素的含量。叶绿素在被反刍动物采食后代谢为叶绿醇、降植烷酸和植烷酸,适当浓度的植烷酸可以提高糖类和脂类的代谢,增加脂肪酸氧化饲喂相关基因表达,诱导棕色脂肪细胞分化。植烷酸进入动物机体后对神经系统和免疫系统有积极作用,如减少致畸率等。本文对牧草中叶绿素植烷酸的结构、代谢过程,及其对动物机体的影响和未来发展方向进行了综述。     

MALDI-TOF-MS用于微生物鉴定的影响因素分析

影响MALDI-TOF-MS微生物鉴定的因素有很多。本研究主要从微生物培养基、培养状态、菌体前处理、上样量等方面进行MALDI-TOF-MS操作技术和方法的探讨。研究结果显示:进行MALDI-TOF-MS细菌鉴定,培养时间在4～24 h之间为佳;尽量选择无色、不含盐的液体培养基;0.1μL菌液是最低鉴定菌量;上样量对结果无影响;对于菌体前处理,除按照标准化前处理程序操作外,也可将菌体加dd H2O制成混悬液进行点靶鉴定,这样更加简便。本研究有助于减少MALDI-TOF-MS操作盲目性,提高鉴定质量,利于操作的规范化和简便化。     

猪附红细胞体和弓形体病继发猪瘟的诊断与防制

2004年2月至3月，湖北剂州某市八宝、中洲、老城、胡家岗和荆闸等乡镇自然村多家个体养猪专业户在断奶仔猪中爆发一种以体温高、贫血、黄疸、精神沉郁，先便秘后拉稀为特征的传染病。医治不见好转，先后死亡450多头。于3月中旬和下旬分2批将病猪送到我院进行诊断，经剖检、实验室检验和动物试验，最后确诊为猪附红细胞体和弓形体病继发猪瘟，采用超量免疫及综合防制措施，使本病得到了有效的控制。     

鸭DCN基因编码区扩增、序列分析及其在大肠杆菌中的表达、蛋白纯化

采用RT-PCR方法从鸭腿肌总RNA中扩增了鸭核心蛋白聚糖基因编码区序列,进行序列分析,并将编码鸭核心蛋白聚糖成熟蛋白的核酸片段连入原核表达载体pET-32a(+)中,加入IPTG诱导其表达后,亲和层析纯化表达的蛋白。采用SDS-PAGE检测,用质谱方法对表达的蛋白进行鉴定。研究成功克隆出鸭核心蛋白聚糖基因编码区序列,序列分析表明,鸭DCN编码区序列由1074个碱基组成,编码357个氨基酸,其中信号肽有16个氨基酸。将鸭DCN蛋白划分为9个结构域(LRR1-9),结合人DCN序列进行序列分析推测结构域中LRR4、5与TGF-β可能存在一定关系。SDS-PAGE检测和质谱鉴定结果表明获得了分子量为54.7ku的鸭DCN融合蛋白。