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采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因0RF7,并将其克隆到pMDl8-T载体,构建成重组质粒pMDl8-N,在上海生物工程公司测序。结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAVNC-002532株的同源性为99%。表明0RF7是EAV基因组内的保守序列,将0RF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21(DE3),诱导表达后SDS-PAGE和Westernblotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶(GST)下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础。 相似文献
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参照GenBank中已发表的ApxIV基因序列,以自行分离的App DNA为模板,利用PCR方法扩增出ApxIV3'端,大小为552bp的保守基因序列.将PCR产物克隆到pMD18-T Simple Vector中,获得重组质粒pMD-ApxIV,对其重组质粒pMD-ApxIV进行BamHI、HindIII双酶切,并将酶切产物克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建了重组表达质粒pET-ApxIV.将表达质粒转化至大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析,结果表明pET-ApxIV在BL21中成功表达,并能被App阳性血清所识别,具有良好的免疫原性.表达蛋白的分子质量约为39.5KDa.利用HiTrap FF crude columns将表达的蛋白进行了纯化. 相似文献
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试验旨在研究日粮中添加苦玄参提取物对广西麻鸡血清生化指标及免疫功能的影响。选用1日龄广西麻鸡500羽,随机分为5组(A、B、C、D、E组),每组设5个重复,每个重复20羽。其中A、B、C组为试验组,分别在基础日粮中添加0.70%,0.35%和0.175%的苦玄参提取物;D组为阳性药物对照组,在基础日粮中添加0.01%硫酸黏菌素预混料;E组为空白对照组,饲喂基础日粮,预试期3 d,正试期49 d。于21、35和49日龄时分别从每组抽取10羽试验鸡进行心脏采血,测定血清生理生化及免疫指标。结果显示:与E组相比,日粮添加苦玄参提取物对鸡的血清TP、GLU含量无显著影响(P>0.05);但21和35日龄时,A、B、C组的TBILI含量均极显著或显著低于E组(P<0.01;P<0.05);35日龄时,A、B、C组的血清AKP活性均极显著高于E组(P<0.01),C组的GOT活性在21和35日龄时显著高于E组(P<0.05);49日龄时,A、B、C组的IgG和B、C组IL-2含量均显著或极显著低于E组(P<0.05;P<0.01),B组T-AOC显著高于E组(P<0.05),A、B、C组血清GSH含量均显著高于E组(P<0.05)。由此可知,日粮中添加的苦玄参提取物显著降低了广西麻鸡的血清TBILI含量,并在一定程度上降低了IgG、IL-2和IL-6含量,提高了AKP和GOT活性及T-AOC和GSH含量。综合考虑,以0.35%的添加量效果最好。 相似文献
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宿主域扩大的重组救活昆虫杆状病毒表达载体的构建及外源基因的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
通过克隆的家蚕核多角体病毒解旋酶基因DNA与重组救活可线性化的苜蓿尺蠖核多角体病毒基因工程载体病毒 (BacPAK6 )DNA在昆虫细胞中发生重组 ,经累代筛选获得了既可感染家蚕又可感染秋粘虫细胞Sf 2 1的宿主域扩大的昆虫杆状病毒表达载体 (HyBacPAK6 )。HyBacPAK6DNA经Bsu36Ⅰ酶切后与含植酸酶基因的转移载体pVL1393 phy在家蚕细胞中重组后 ,通过蓝白斑筛选发现重组率可达 90 %以上。然而以杂交病毒为载体的外源基因表达量仅为以BmNPV为载体病毒的表达量的 2 0 %左右。分析认为HyBacPAK6可用于表达一些对蚕体有害的外源基因。 相似文献
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中国狗牙根染色体数变异研究初报 总被引:11,自引:4,他引:11
通过国内30份狗牙根种源当色体数目的观测分析.结果表明,①我国狗牙根种质资源染色体数目呈现非常高的异质性,不同种源具有不同染色体数,同一种源不同根尖存在不同染色体数,同一根尖不同细胞亦具备不同染色本数,不同倍性平均出现的频率依次为:4n(32.26%)>n(18.98%)>3n(10.7%)>6n(2.13%)>2n(0.41%).此外,非整倍体平均比率高达32.1%.②染色体数目与纬度、经度、海拔间均无显著回归关系.该项研究为我国狗牙根种质资源开发利用提供了初步的试验依据. 相似文献