Inhibition of telomerase in canine cancer cells following telomestatin treatment

Telomere shortening in normal somatic cells has been proposed as a major barrier to unlimited cellular proliferation. Telomerase is an enzyme capable of maintaining telomere length, and thus bypassing this barrier. In human beings, telomerase activity is restricted to cancer cells and cells of stem or germ cell lineages. Dogs represent a potentially useful clinical model for the development of telomerase‐based therapies because telomerase activity is also restricted to cancer cells and stem cells in this species. We examined the ability of telomestatin to inhibit telomerase activity in telomerase‐positive D17 and CMT7 canine cancer cell lines. At a concentration of 2 μM, telomestatin treatment resulted in a decrease in telomerase activity, telomere shortening, growth inhibition and apoptosis in telomerase‐positive cancer cells. These effects were not seen in telomerase‐negative skin fibroblasts or negative controls. These results confirm that telomestatin specifically inhibits telomerase activity in canine cancer cells and strengthens the usefulness of dogs as a model for testing telomerase‐based therapies.     

鸡软骨细胞体外分离培养鉴定以及过表达miR-15a对软骨细胞的影响

为分析miR-15a在肉鸡不同组织中的表达情况,并探究过表达miR-15a对体外培养鸡软骨细胞的影响。本研究首先通过倒置显微镜观察、PCR、凝胶电泳和甲苯胺蓝染色对体外分离培养的软骨细胞进行鉴定。通过实时荧光定量PCR检测miR-15a在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity, VVD)组和健康组肉鸡中(各3只)各组织的表达量。之后通过CCK8和EDU方法分析软骨细胞过表达miR-15a后细胞增殖情况。软骨细胞转染miR-15a mimics后,通过qPCR检测软骨细胞的标志基因Collagen-2、Aggrecan、Collagen-10,成熟分化基因Runx2、Sox9、VEGF、MMP9,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β3以及凋亡基因Fas、FasL、Bcl-2的表达量。并构建FKBP5 3'UTR的野生型载体和突变型载体,通过双荧光素酶检测报告检测miR-15a与FKBP5的靶向关系。结果表明,本研究所用的胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和透明质酸酶联合消化法成功分离得到状态良好的软骨细胞。荧光定量结果显示,miR-15a在各组织中均有表达,与健康组相比,miR-15a在VVD组的肝(P < 0.01)、脾(P < 0.05)、胸腺(P < 0.01)中的表达量显著升高,在心和胸肌组织中的表达量显著降低(P < 0.01)。CCK8与EDU分析结果显示,与NC组相比,过表达miR-15a组软骨细胞增殖速度显著降低(P < 0.01),增殖细胞数量显著减少(P < 0.01)。qPCR结果显示,与mimics NC组相比,miR-15a mimics组的软骨细胞标志基因Aggrecan、成熟分化基因Sox9、Runx2表达量显著降低(P < 0.05),Fas基因表达量极显著上升(P < 0.01),FasL基因和抗凋亡基因Bcl-2极显著下降(P < 0.01)。成功构建了FKBP5 3'UTR野生型和突变型载体,双荧光素酶检测报告结果显示预测的靶基因FKBP5与miR-15a没有靶向关系。本研究成功分离并鉴定了鸡软骨细胞,过表达miR-15a抑制鸡软骨细胞增殖、成熟和分化并促进细胞凋亡。     

淹水胁迫对双荚决明生长及生理特性的影响

以一年生双荚决明实生苗为试材,设置了轻度、中度、重度淹水胁迫处理,研究了不同程度的淹水胁迫处理对双荚决明的叶绿素荧光参数、过氧化物酶(POD)活性、丙二醛(MDA)含量、叶绿素含量以及叶片含水量等生长及生理生化指标的影响。结果表明:随着淹水深度的加大,双荚决明植株受到的胁迫伤害逐渐增大。淹水处理6d后,重度水淹的双荚决明植株已全部死亡。经过1个月的淹水胁迫处理,轻度水淹组和中度水淹组的Fo、Fv/Fm、qN相比对照组均有所下降,而ETR、Fv′/Fm′呈现先上升后下降的趋势;POD活性随着胁迫时间的延长先上升后下降。叶片含水量和丙二醛含量相比对照组明显上升,叶绿素含量则低于对照。在淹水胁迫处理12个月后,轻度水淹组和中度水淹组双荚决明依然生长良好,长出许多气生根来适应淹水环境。     

渔船节能开发和推广要点

1 渔船节能主要措施 过去的20年，我国在渔船节能方面采取的主要措施有： （1）改进船型以减少推进阻力； （2）采用低转速大直径螺旋桨和渔船尾部水动力附加节能装置；     

西瓜未授粉子房的离体培养

为了探讨西瓜未授粉子房诱导率的影响因素,以‘早春红玉’、‘西农9号’和‘小绿皇’为供试材料进行西瓜未授粉子房的离体培养,研究供体植株的黑暗热激处理、基因型、不同取样时间、2,4-D浓度和不同激素浓度组合等因素对其芽点诱导率的影响。结果表明:西瓜未授粉子房离体培养以33℃的条件下黑暗热激4 d效果最佳;以开花前1 d的子房诱导率最高为17.2%;3个品种中仅‘早春红玉’获得了再生植株,且在激素组合为4.0 mg·L-12,4-D+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA时芽点率最高为15.0%;根据再生植株的根尖染色体数目,初步鉴定再生植株中有单倍体植株,还有二倍体和四倍体植株。     

青花菜氮磷钾施肥效应研究

运用"3414"田间试验设计,在蔬菜主产区设置氮磷钾肥料试验,获得了青花菜氮、磷、钾的一元二次效应模型分别为:Y=891+45.02N-0.884N2(R=0.858),Y=1 118+37.4P-1.229P2(R=0.568),Y=1 060+16.37K-0.113K2(R=0.752);青花菜最高产量的氮磷钾理论施肥量:N为385.5 kg/hm2;P2O5为151.5 kg/hm2;K2O 274.5 kg/hm2.     

膀胱无细胞基质在青紫蓝兔组织工程膀胱替代手术中的应用研究

研究膀胱无细胞基质（bladder acellular matrix graft,BAMG)在兔组织工程膀胱中的应用。按文献改进方法制作BAMG，从兔膀胱中分离出上皮细胞和平滑肌细胞，体外培养约4周，与无细胞基质材料复合成组织工程膀胱，对同一兔实施膀胱次全切术，用组织工程膀胱替代。术后进行膀胱造影，组织切片检查，提示组织工程膀胱功能良好。本方法获取的BAMG可用于兔的组织工程膀胱替代手术。     

高致病性猪蓝耳病病毒GS/LZh/07株的分离、鉴定及其非结构蛋白Nsp2基因特性分析

将高致病性猪蓝耳病疑似病料接种Marc145细胞,发现该病料可使Marc145细胞产生CPE,应用猪蓝耳病病原检测试剂盒从细胞培养物中检测到PRRSV,命名为Gs/Lzh/07株。同时应用RT-PCR方法扩增该分离毒株的非结构蛋白Nsp2基因,并进行了序列测定,发现所扩增到的Nsp2基因有90个核苷酸的缺失。序列比对结果表明：该分离病毒Nsp2基因与经典毒株PRRSV-ch-1a核苷酸同源性为83.0%,氨基酸同源性为72.7%;与高致病性变异毒株NX和SD核苷酸同源性为95.5%,氨基酸同源性为90.9%,可见该毒来源于2006-2007年流行毒株,说明高致病性猪蓝耳病变异病毒已经在甘肃省存在。该毒株的成功分离为高致病性猪蓝耳病流行病学调查分析提供数据,也为预防控制该病积累了资料。Nsp2的特性分析为揭示高致病性猪蓝耳病PRRSV在甘肃省的流行特点提供参考。     

玉米苗期杂草的计算机识别技术研究

利用计算机视觉技术和人工神经网络技术对识别玉米苗期田间杂草进行了研究。首先利用类间方差最大自动阈值法二值化杂草图像的超绿特征,再进行连续腐蚀与膨胀,然后根据长宽比、圆度、第一不变矩3个形状特征由BP网络识别出玉米幼苗,最后利用种子填充法从阈值分割结果中擦除玉米目标,剩余的就是杂草目标。研究表明,基于BP网络的杂草识别算法对玉米幼苗与杂草的正确识别率分别为87.5%和93.0%,处理一幅640×480像素的杂草图像平均耗时约为58 ms。     

田间环境参数动态监测系统平台设计与实现

信息技术飞速发展,农业不再是简单的田间的播种、收割农作物,而是对于农作物成长过程的更多的管理。面对多变的天气,及时快速的发现异常,则能够让农户减少损失。本设计是用PHP+MySQL数据库开发的,基于B/S结构的田间环境参数动态监测系统平台,它将网络应用技术运用到农业生产中来,使之能够监测农作物生产环境的动态并及时反馈,让农户能够随时随地查看农场环境信息。通过提供农业相关资讯,环境监测以及农户们交流的服务平台,本平台让农民们可以利用信息技术进行科学化管理,学习更多的技术和知识,最终实现提高单位面积产量的目标。