多杀性巴氏杆菌OmpA基因的原核表达及生物信息学分析

本试验旨在探究羊源多杀性巴氏杆菌OmpA基因的原核表达及其生物信息学特征。以羊源多杀性巴氏杆菌HN-01株基因组为模板,设计特异性引物扩增OmpA基因;构建pET-28a(+)-OmpA重组质粒后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,将鉴定正确的重组菌经IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE及Western blotting分析表达蛋白的特征,并运用生物信息学工具对OmpA基因序列进行分析。结果显示,羊源多杀性巴氏杆菌OmpA基因大小约为1 044 bp,该基因序列与HN-06株的同源性达89.72%。通过诱导后发现,pET-28a(+)-OmpA重组菌最佳诱导条件为1 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,表达的重组蛋白大小约为40 ku,以包涵体的形式存在。Western blotting结果显示,约40 ku的重组蛋白携带His标签。经生物信息学分析,OmpA分子式为C_(1684)H_(2619)N_(457)O_(505)S_3,属碱性疏水蛋白,其多肽链的1-21位氨基酸为信号肽区域,并具有多种结构。综上所述,OmpA可能具有特殊结构,与众多外膜蛋白结构特点相似。本研究构建了多杀性巴氏杆菌OmpA基因原核表达系统,优化诱导条件后能稳定获得OmpA重组蛋白,为进一步探究巴氏杆菌的致病机理提供理论依据。     

羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因的克隆及生物信息学分析

试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应获取目的基因片段,并对ompW基因的核苷酸序列及预测的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增产物约为615bp,编码204个氨基酸。核苷酸同源性比对分析显示,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源、牛源、禽源多杀性巴氏杆菌同源性较高,而与兔源同源性较低。系统进化树结果发现,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源多杀性巴氏杆菌ompW基因亲缘关系最近。经生物信息学分析发现,ompW蛋白分子式为C1007H1567N257O283S3,分子质量为21.90ku,理论等电点(pI)为9.16,属碱性蛋白质,疏水指数为96.57,总平均疏水性(GRAVY)为0.173(>0),属于疏水类蛋白;前21位氨基酸为信号肽,第5-27位氨基酸区域存在1个跨膜区,存在N-糖基化位点及磷酸化位点,不存在O-糖基化位点,具有多个B细胞、CTL细胞及Th细胞抗原表位;二级结构的α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占17.65%、35.29%、3.92%和43.14%;三级结构是呈β-桶状的单聚体,隶属于外膜蛋白家族成员之一。本研究结果为进一步阐明羊源多杀性巴氏杆菌侵染宿主过程中自身的抗宿主免疫胁迫机制及疫苗的开发与研制提供了理论依据。     

基于转录组测序筛选高盐培养下双峰驼肾皮质细胞差异表达基因

为探讨双峰驼的高盐适应机制并筛选出受高盐调控的基因,本试验采用RNA-Seq技术对双峰驼肾皮质细胞进行转录组测序分析。试验分为2个组,等渗培养基处理的肾皮质细胞为对照组（Control）,高渗培养基处理的肾皮质细胞为高渗组（HS）,进行转录组测序,从而筛选出一系列差异表达基因（DEGs）,并用GO富集和KEGG富集分析对DEGs进行基因功能和途径的注释。结果显示,在高盐环境下双峰驼肾皮质细胞中共有4 854个显著DEGs;GO富集分析显示,DEGs显著富集在G蛋白偶联受体活性、受体结合、核酸结合转录因子活性、质膜、离子通道的活动和免疫反应等功能中;KEGG通路富集显示,DEGs显著富集在信号传导、辅助因子和维生素代谢、信号分子相互作用、运输和分解代谢、免疫系统等通路中;采用实时荧光定量PCR技术随机检测了参与高盐代谢的3个差异表达基因,其表达趋势与RNA-Seq一致,可以验证RNA-Seq技术的准确性。因此,双峰驼肾皮质细胞的高盐耐受性可能与这些途径和通路中重要基因的调控有关。本试验结果将为进一步揭示双峰驼耐盐性的分子调控机制提供重要的参考依据。     

建设“服务型”人事行政体制

随着西方新公共管理理论的兴起，“小政府”、“服务型政府”、“高效政府”等理念逐渐成为现代政府运转的主要指导思想。在这些观念的指导下，我国政府的人事行政工作也进入了一个全新的时期，传统的长官式人事工作模式。已经无法满足现代社会人才工作高效率的要求。如何突破这一瓶颈成为官方和学术界关注的焦点，而建设“服务型”人事行政体制的策略给出了一个理想的回应。     

苹果乔砧密植早期丰产试验

苹果乔砧密植早期丰产试验黄海峰丁文海（内蒙古奈曼旗青龙山职高第一作者简介：黄海峰：１９５８年５月生,内蒙古奈曼旗人。１９８４年毕业于哲里木畜牧学院农学系。毕业后从事职业高中教学工作。１９８８年至１９９０年在沈阳农业大学园艺系进修。回校后从事园艺教学和...     

蛋鸡痛风病的诊断与防治

发病情况 河北省唐山市玉田县窝洛沽镇养殖户李为祥饲养150日龄蛋鸡2000只，产蛋率达到4成。一天，发现有3只死鸡，大群还有儿只鸡精神委靡，用阿莫西林饮水3天，未见好转。     

北京市蔬菜价格持续上涨成因分析及对策

2010年以来，北京市蔬菜价格出现了持续上涨的趋势。引起蔬菜价格上涨的因素是多方面的，主要受到宏观经济、生产成本、流通成本等方面的影响。通过分析，得出平稳蔬菜价格的对策建议。     

别把羔羊消化不良当成下痢治

<正>羔羊消化不良是幼畜消化机能障碍的统称。单纯性消化不良也称饲料性消化不良(消化、营养性障碍,母乳不足,轻微的全身症状)和中毒性消化不良(消化、营养障碍和自体全身中毒症状),一般不具传染性,故不应将本病与幼畜细菌性下痢混为一谈。本病不仅使幼畜生长受阻,还易导致死亡。     

变电站直流系统运行现状及存在问题分析

变电站直流运行现状整体上良好,但是也有不少问题,本文主要是以某市辖区的43个电站为例,将其运行现状以及存在的问题进行了介绍与分析。通过调查结果发现,变电站直流系统所存在的问题主要有蓄电池维护不到位、充电机使用不当以及绝缘监控装置使用更不当等。这些问题的存在,给变电站的运行带来了很大的隐患,需要引起相关人员的警惕。