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双酶直接酶解米糠制备短肽的工艺优化 总被引:3,自引:1,他引:3
【目的】建立在中低温度下直接酶解米糠制备短肽的优化工艺。【方法】采用二次回归正交旋转组合设计优化直接酶解米糠制备短肽的工艺条件,其中总糖含量测定采用蒽酮比色法,水解度(degree of hydrolysis,DH)采用pH-stat法,蛋白质回收率采用凯氏定氮法。【结果】确定直接酶解米糠制备短肽最佳工艺条件为:米糠先经糖酶(viscozyme)反应2 h去除糖类杂质,然后用碱性蛋白酶(alcalase)和胰蛋白酶双酶水解,最适pH 8.2,温度45℃,alcalase与胰蛋白酶酶活比59﹕41,总酶活5 750 U/g底物,水解时间3 h。在此条件下,DH为23.04%,蛋白质回收率为84.33%,酸溶性多肽(TCA-SN)为68.40%,短肽分子量主要集中在1 000 D以下。【结论】在中低温和偏中性(pH 8.2)条件下,采用碱性蛋白酶和胰蛋白酶双酶直接酶解米糠制备短肽,与先提取蛋白后酶解制备短肽的方法相比,具有操作步骤简单、蛋白质利用率高等特点,是一种制备米糠肽的新途径。 相似文献
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【目的】建立米糠中酚类物质的大孔树脂分离纯化工艺,比较米糠提取物纯化前后总酚、总黄酮含量及抗氧化能力,为米糠的深加工利用提供参考。【方法】比较9种不同类型大孔吸附树脂(HPD-100、HPD-200A、HPD-300、HPD-700、D101、HPD-722、AB-8、ADS17和HPD-826)对米糠提取物中总酚的静态吸附和解吸性能,筛选出对脱脂米糠酚类物质纯化效果最佳的大孔吸附树脂类型;通过考察其静态吸附动力学曲线,比较不同上样液浓度、上样流速和上样体积下的动态吸附曲线以及采用不同浓度乙醇洗脱的解吸效果,建立米糠多酚的大孔吸附树脂吸附和解吸工艺条件;比较HPD-300型大孔吸附树脂纯化前后总酚、总黄酮含量,采用高效液相色谱法结合应用酚类标准品分析米糠提取物经大孔吸附树脂纯化前后其各单体酚类物质种类与含量,并通过氧自由基吸收能力(oxygen radical absorption capacity,ORAC)和细胞抗氧化分析法(cellular antioxidant activity,CAA)比较其纯化前后的抗氧化活性。【结果】9种类型大孔吸附树脂对脱脂米糠提取物酚类物质均有一定的吸附能力,其中HPD-300型大孔吸附树脂对脱脂米糠总酚静态吸附和解吸效果明显优于其他类型树脂,其饱和吸附量为9.04 mg GAE·g~(-1),解吸率为82.62%,同时米糠总酚静态吸附在6 h时达到饱和值。HPD-300型大孔吸附树脂最佳吸附和解吸工艺条件为:米糠酚类提取液上样浓度为1.0 mg GAE·m L-1,上样流速为3.0 BV·h~(-1),上样体积为3.5 BV,洗脱剂为70%乙醇溶液,洗脱流速为3.0 BV·h~(-1)。经HPD-300型大孔吸附树脂纯化后,米糠酚类提取物的总酚和总黄酮含量分别从纯化前的88.07μg GAE·mg~(-1)和30.04μg CE·mg~(-1)提高到320.72μg GAE·mg~(-1)和133.67μg CE·mg~(-1),分别提高了2.6和3.4倍。经高效液相色谱分析,米糠酚类提取物经HPD-300型大孔吸附树脂纯化后,其中的没食子酸、原儿茶酸、香草酸、对羟基苯甲酸、咖啡酸、丁香酸、表儿茶素、香草醛、对香豆酸和阿魏酸等10种酚类单体组成未见明显变化和损失,且上述酚类单体在提取物中的含量较纯化前分别提高0.4—2.4倍。纯化后提取物的ORAC和CAA值分别为3 248.21μmol TE·g~(-1)和95.24μmol QE·g~(-1),较纯化前的1 327.51μmol TE·g~(-1)和29.19μmol QE·g~(-1),分别提高了1.4和2.2倍。【结论】HPD-300型大孔吸附树脂适合米糠酚类物质的分离纯化,经其纯化后的米糠提取物中总酚、总黄酮含量及抗氧化活性提高1—3倍,且不会造成单体酚的明显损失。 相似文献
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研究了荔枝多糖(Litchi Polysaccharides,简称LCP)及其纯化后的多糖组分清除自由基作用,LCP经DEAE-Cellulose 52柱色谱分级获得4个多糖组分LCP-1、LCP-2、LCP-3和LCP-4,以Vc为对照,测定了LCP及其4个多糖组分对.OH、O2-.和DPPH的清除能力.结果表明,LCP及4个多糖组分均有清除.OH、O2-和DPPH的能力,其中LCP-2的清除作用最强,其清除.OH、O2-.和DPPH的能力分别相当于Vc的22.6%、44.2%、10.7%. 相似文献
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【目的】探讨苦瓜水提物(Momordica charantia fruit aqueous extract,MCFE)对拘束应激小鼠体内脂代谢及抗氧化水平的影响,为揭示苦瓜对脂代谢紊乱的改善作用提供理论依据。【方法】选用6周龄的雌性昆明小鼠,随机分为5组,包括正常对照组(NC)、拘束应激组(Mod)及-MCFE低(250 mg•kg-1)、中(500 mg•kg-1)和高(750 mg•kg-1)剂量组,每组12只,连续灌胃7 d后,置于50 mL带孔的塑料离心管中拘束20 h,尾静脉注射10% 脂肪乳剂Interlipids,15 min后检测小鼠血脂消除能力,肠系膜脂肪组织脂肪酶活力,血清、肠系膜脂肪组织及肌肉组织的脂蛋白酯酶活性,同时测定血清的氧化状态及抗氧化水平。【结果】拘束应激模型组小鼠甘油三酯(Triglyceride,TG)的含量为正常组小鼠TG含量的1.27倍,而低、中、高剂量MCFE组的小鼠TG含量分别为正常组小鼠TG含量的0.63、0.57和0.55倍,表明MCFE各剂量组均能显著提高拘束应激小鼠甘油三酯的清除率(P<0.05),提高其脂肪代谢能力,并呈现剂量依赖性趋势;同时,拘束应激模型组小鼠的脂肪酶活性为正常组的0.52倍,而MCFE各剂量组的脂肪酶活性分别为正常组的0.77、0.98和1.06倍,明显高于拘束应激组(P<0.05),且中、高剂量组基本达到正常水平,表明MCFE各剂量组均能提高肠系膜脂肪组织的脂肪酶活性(P<0.05);此外,与拘束应激组相比,MCFE的低、中、高剂量组小鼠的血清脂蛋白酯酶(Lipoprotein Lipase,LPL)活性和肠系膜脂肪组织的LPL活性明显有所提高(P<0.05),亦表现剂量效应,其中MCFE各剂量组的血清LPL活性达到正常组水平,但MCFE各剂量组对肌肉组织的脂蛋白酯酶的活性影响不显著(P>0.05);另外,拘束应激组小鼠的脂质过氧化产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量是正常组的1.37倍(P<0.05),总抗氧化能力(ORAC)是正常组的0.65倍(P<0.05),而MCFE各剂量组小鼠体内的MDA含量明显低于拘束应激组(P<0.05),且MCFE的中、高剂量组基本达到正常水平,MCFE各剂量组ORAC明显高于拘束应激模型组,但尚未达到正常水平,表明MCFE能明显提高拘束应激小鼠体内总抗氧化水平(P<0.05)。【结论】苦瓜水提物能从氧化应激水平和脂质代谢两方面改善拘束应激小鼠脂代谢紊乱。 相似文献
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黑米抗氧化活性成分的分离纯化和结构鉴定 总被引:30,自引:2,他引:30
【目的】分离、纯化和鉴定黑米抗氧化的主要活性成分。【方法】以体外总抗氧化能力为活性跟踪指标,对黑米抗氧化提取物用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇等不同极性溶剂萃取分部后得到抗氧化能力最强的部分,再用Sephadex LH-20分离得到抗氧化主活性成分,采用紫外-可见光谱、红外光谱、ESI-MS质谱和核磁共振(1HNMR和13CNMR)波谱法对其进行结构解析。【结果】黑米抗氧化提取物的5种溶剂萃取物以水部和正丁醇部的抗氧化能力最强,其总抗氧化能力分别为383和392 ku·g-1,其中,从水部可得到4种抗氧化主活性成分,总抗氧化能力分别为976、878、1 134和1 087 ku·g-1。波谱结构解析表明,4种成分均为花色苷类化合物,分别是锦葵素、天竺葵素-3.5-二葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷和矢车菊素-3, 5-二葡萄糖苷。【结论】花色苷类化合物是黑米抗氧化作用的主要物质基础。 相似文献
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不同黑大豆种质资源种皮花色苷组成及抗氧化活性分析 总被引:4,自引:0,他引:4
【目的】了解不同黑大豆种质资源种皮中花色苷的组成、含量及其抗氧化能力分布情况。【方法】采用酸性甲醇浸提60个黑大豆种质种皮中的花色苷,通过与标准品对照,用HPLC法分析其种皮花色苷的组成及含量,同时用pH示差法测定各种质的总花色苷含量,采用氧自由基清除能力(ORAC)法测定各种质种皮的抗氧化活性。【结果】从60个黑大豆种质中共检测到飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-半乳糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-葡萄糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷和锦葵素-3-葡萄糖苷6种花色苷组分。其中有44个品种中检测到上述全部6种花色苷组分,而其余16个品种只含有其中的4-5种。矢车菊素-3-葡萄糖苷是所有受试黑大豆种质中含量最高的花色苷组分。不同黑大豆种质间各单体花色苷和总花色苷含量及其ORAC值抗氧化能力差异均较大,其中总花色苷含量的变幅为98.8—2 132.5 mg/100g,ORAC值的变幅为212.5—1 834.6 μmol TE/g,且各种质总花色苷含量与其ORAC值呈显著正相关关系(r = 0.62, P<0.001)。采用快速聚类法将60个黑大豆种质聚成营养和花色苷活性成分含量差异显著的三大类群。【结论】不同黑大豆种质种皮花色苷组成基本相同,但其各花色苷单体及总花色苷含量存在显著差异,花色苷是黑大豆种皮抗氧化作用的重要物质基础。 相似文献