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杀鲑气单胞菌(Aeromonas salmonicida)是一种重要的鱼类致病菌,可以感染多种海淡水鱼类。杀鲑气单胞菌包括5个亚种,目前常用的生理生化特征和16S rDNA序列分析方法很难实现亚种的快速精确区分。为实现杀鲑气单胞菌亚种的快速鉴定和检测,针对我国常见的杀鲑气单胞菌杀鲑亚种(A. salmonicida subsp. salmonicida)和杀日本鲑亚种(A. salmonicida subsp. masoucida),本研究开发了其特异性的PCR检测方法。根据Gene Bank已公布的杀鲑气单胞菌基因组信息,选择杀鲑亚种phoB基因和杀日本鲑亚种LOC111476736基因作为目标基因,根据其序列设计特异性引物,进一步对PCR反应的退火温度、引物浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度和酶浓度5个方面进行了优化,并测试了该方法的特异性、敏感性和应用效果。结果显示,2对引物分别可以扩增出杀鲑气单胞菌杀鲑亚种522 bp的phoB特异性基因片段和杀日本鲑亚种515 bp的LOC111476736特异性基因片段。杀鲑亚种特异性引物最适退火温度为64 ℃,10 µmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/µL KOD酶的最适添加量分别为1.5、2、1.5和0.5 µL。杀日本鲑亚种特异性引物最适退火温度为64 ℃,10 µmol/L引物、2 mmol/L dNTPs、25 mmol/L MgSO4和1 U/µL KOD酶的最适添加量分别为0.75、1、1.5和0.5 µL。以鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)、杀鱼爱德华氏菌(Edwardsiella piscicida)、杀鲑气单胞菌其他亚种等14种其他水产病原菌或常见环境菌为模板进行PCR检测,均无特异性条带。该方法对杀鲑气单胞菌杀鲑亚种的检测灵敏度为12.8 CFU/反应(菌体)或17.6 fg/反应(DNA),对杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种的检测灵敏度为23.8 CFU/反应(菌体)或27.2 fg/反应(DNA)。利用杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种分别对大菱鲆(Scophthalmus maximus)进行人工感染实验,感染后取病鱼组织进行PCR检测,结果显示,本方法可以从感染后的大菱鲆中分别检测到相应病原。综上所述,本研究建立了杀鲑气单胞菌杀鲑亚种和杀日本鲑亚种的特异性PCR检 相似文献
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生产实践中,除采用嫁接苗造林外,用实生苗直接造林、后期嫁接也很普遍.在板栗嫁接试验中,接位粗度和接穗数量是影响板栗嫁接成功的两项关键性因素;接位粗度决定嫁接部位愈合率的高低、冠幅的大小和侧枝数量的多少,接穗数量是保证嫁接部位当年能否基本愈合的关键,从而探讨不同接位粗度和接穗数量与板栗嫁接的影响关系. 相似文献
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以吕梁地区发展机械化旱作农业的成功实践,论证了丘陵山区发展机械化旱作农业的必然性和可行性,并提出了在发展机械化旱作农业过程中应选择的战略、措施和方法。 相似文献
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为更全面的评价虾夷马粪海胆F2代的品质。测量了虾夷马粪海胆F2代群体25个家系113枚海胆的体尺、性腺性状以及营养成分,其中体尺性状包括壳高、壳径、体重、壳体积、壳重、壳干重、肠道湿重、口器高、口器宽、口器重;性腺性状包括性腺湿重、指数、颜色(亮度值L*,红度值a*,黄度值b*)、水分;营养成分包括总蛋白含量、总氨基酸含量和脂肪酸组成。结果显示:壳性状、口器性状、肠道湿重等性状在家系间和性别间均无显著差异(P>0.05),其中肠道湿重、壳体积和体重在群体内的变异系数相对较大。性腺指数在家系间和性别间均有极显著差异(P<0.01),性腺湿重在家系间差异显著(P<0.05),在性别间差异极显著(P<0.01),两者在群体中均具有较大的变异系数;性腺颜色介于黄色和橙红色之间,亮橙黄色差和亮黄色差在家系间具有显著差异(P<0.05),雌性海胆性腺颜色极显著优于雄性(P<0.01)。性腺中总蛋白和总氨基酸含量在家系间和性别间均具有极显著差异(P<0.01);性腺总脂中二十碳五烯酸EPA和花生四烯酸AA的含量分别为(5.42±4.05)%和(4.42±2.92)%,而二十二碳六烯酸DHA含量较低(0.94±0.86)%,但其在群体内变异极大(92.29%),并且在家系间具有极显著差异(P<0.01)。综合各性状在家系间的多重比较结果,性腺指数较高的家系为SIF2-16、SIF2-10、SIF2-7。而壳径最大的家系为SIF2-9、SIF2-21、SIF2-3;活体重最大的家系为SIF2-9、SIF2-20、SIF2-21。研究规范了海胆性状测量,为评估所构建的虾夷马粪海胆家系的选育潜力,开展下一步家系选择育种提供参考。 相似文献
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"城乡建设用地增减挂钩"的研究已经持续十余年,为了宏观把握其演变进程,充分了解各阶段的研究热点,探索未来发展方向,该研究应用CiteSpace软件,对相关文献进行了可视化处理.在中国知网中,以"城乡建设用地增减挂钩"为主题词进行检索,并对结果进行初步筛选,再将文献导入CiteSpace进行可视化分析.结果表明:(1)我国的城乡建设用地增减挂钩经过长时间发展已经趋于成熟,现阶段已经进入转型跨越式发展,拆旧建新同扶贫助农相关联;(2)研究的热点主要集中于制度探讨和拆旧区治理方面;(3)高等院校是增减挂研究的主力军,尤其是农业类院校,主要研究人员同主要研究机构相耦合,各机构之间合作关系不紧密. 相似文献