山羊c-Myc原癌基因克隆、原核表达和GST-Myc融合蛋白纯化

本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊GST-Sox2融合蛋白.用RT-PCR方法从山羊(Capra hircus)肠组织克隆了c-Myc基因,通过TA克隆,构建了pMD18-T-Myc质粒.DNA测序证明,山羊c-Myc全长cDNA约1320 bp,该序列包含一个完整的开放阅读框,编码439个氨基酸,经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的c-Myc序列同源性为99.2%.将该cDNA片段亚克隆至pGEX-KG载体,构建了重组质粒pGEX-KG-Myc.经酶切鉴定和测序,将重组质粒导入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,由IPTG诱导表达,以谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和纯化GST-Myc融合蛋白.SDS-PAGE分析表明,纯化的GST-Myc融合蛋白约75 kD,与预期值相符,且呈现清晰的单一条带.Western blot检测证实,该融合蛋白能够被GST抗体所识别.本实验克隆了山羊c-Myc基因,获得了高纯度的GST-Myc融合蛋白,为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料,为山羊iPS细胞(induced pluripotent stem cells)检测创造了条件.     

北方地区草坪建植与管理养护技术

在生态城市建设中,要求绿地指标必须达标,城市绿化技术日趋成熟完善。草坪作为城市绿化的重要组成部分,越来越受到人们的重视与关注。结合工作实践,针对北方地区干旱少雨、冬季寒冷的气候特点和生态建设需要,提出了坪床准备、草种选择、播种方法等建植技术与浇水、修剪、施肥、杂草防治等草坪养护管理技术,可供城市绿化参考。     

昭通天麻多糖含量测定及超声辅助提取条件优化

采用苯酚—硫酸法对昭通天麻多糖含量测定,结果显示:在490nm波长处测定吸光度,在浓度0～0.0175mg/mL线性关系良好,建立回归方程y=79.186x+0.0005(r=0.9990);经精密度、稳定性、加标回收率以及重现性等实验证明,该方法可用于天麻多糖含量的测定。通过正交实验研究昭通天麻多糖的超声提取条件,并采用苯酚—硫酸法对多糖含量进行测定,超声辅助提取的最佳提取条件组合为:提取温度45℃,提取时间55min,料液比1∶35(g/mL)。     

受精液中添加β-ME、BSA和咖啡因对猪卵母细胞体外受精后早期发育的影响

进行受精液中添加不同浓度的β-ME、BSA和咖啡因对猪卵母细胞体外受精及其早期发育的影响试验。结果表明,在受精液中添加β-ME(2、10、50μmol/L)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育无显著促进作用,当添加浓度过高(250μmol/L)时对早期胚胎发育反而不利;在受精液中添加咖啡因(1、2、4mmol/L)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育无显著的促进作用;在受精液中添加BSA(0.1%、0.2%、0.4%、0.8%)对猪卵母细胞体外受精后的早期发育有一定的促进作用,并以添加0.4%BSA的效果最好。     

甜菜SSR反应体系优化及重要农艺性状分子标记

[目的]为选育优质甜菜新品种,利用SSR法筛选与高糖、高产、耐盐相关的分子标注.[方法]研究对甜菜SSR-PCR反应体系进行优化,并利用SSR分子标记方法和分离群体分组分析法(Bulked SegregateAnalysis,BSA)对具有高糖/低糖、低产/高产、耐盐/不耐盐三种重要农艺性状的甜菜亲本和F2代植株进行分析.[结果]研究建立了适宜甜菜的SSR-PCR反应体系为:20μL反应体系中含l×Buffer、2.0 mmol/LMg2+、1.5 uTaq DNA聚合酶、0.20 mmol/L dNTP、1.5 μmol/L引物、60 ng DNA模板.依据优化体系,对不同农艺性状的甜菜亲本与F2代进行SSR-PCR扩增分析,高糖性状获得了200和100 bp两条与高糖性状连锁的标记,250和230 bp两条与高产性状连锁的标记,550、250和100 bp三条与耐盐性状紧密连锁的分子标记.[结论]研究获得的7条特异条带是与甜菜重要农艺性状连锁的分子标记,将为甜菜的育种工作提供重要的理论基础.     

长白山北坡针叶林带蛾类多样性

2003年6月至2006年9月,对长白山北坡针叶林蛾类做了较全面的调查,针叶林带蛾类种类共计12科,118种,其中夜蛾和尺蛾是北坡针叶林带蛾类的优势类群,各月份蛾类组成及数量差异较大,7月份蛾类的多样性指数、物种丰富度和个体数量都最高,6月份蛾类的多样性指数、物种丰富度和个体数量最低,多样性指数与均匀度不一至,相关系数为-0.15,不同月份的蛾类相似性系数很低。     

不同激活方法对猪ICSI卵早期发育的影响

[目的]探讨不同激活方法对猪单精子显微受精（ICSI）胚发育的影响。[方法]冷冻精子解冻洗涤后直接应用于ICSI,ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测其原核形成情况。[结果]结果表明,单纯电脉冲激活以及电脉冲与6-DMAP联合激活其受精率分别达53.3%和60.4%,对ICSI卵雌雄原核形成的影响差异不显著（P〉0.05）;ICSI后采用不同激活方法激活卵母细胞,检测猪ICSI卵胚胎早期发育情况,单纯电脉冲激活囊胚率达13.0%,显著高于对照（P〈0.05）。[结论]单纯电脉冲激活能促进猪ICSI胚胎的早期发育。     

利用电极盘进行猪卵母细胞电激活

[目的]研究不同电激活参数以及电脉冲联合6-DMAP对猪卵母细胞孤雌激活效果的影响。[方法]使用电极盘,测定不同场强（1．1、1．3、1．5、1．7、1．9kV／cm）,不同脉冲时程（30、50、70、90、110ps）,1次脉冲下猪卵母细胞囊胚率的变化。[结果]结果表明,脉冲强度以1．5和1．7kV／cm效果最好,在80胂时其猪卵母细胞囊胚率分别达到（22．35±5．16）％和（20．59±9．41）％;脉冲强度1．5kWcm,1次电脉冲后4h联合6-DMAP激活卵母细胞,当脉冲时程达到70和90μs时,囊胚率分别达到（21．65±9．95）％和（23．10±16．27）％。[结论]在试验条件下,使用电极盘的最适电激活参数为脉冲强度1．5-1．7kV／cm,脉冲时长80μs,1次脉冲电激活。     

猪粪厌氧发酵消化液回流体系微生物群落结构特征与产气关系研究

为明确厌氧发酵消化液回流体系中微生物群落结构的特征,采用Miseq高通量测序技术,研究回流过程中微生物的多样性和群落结构变化,并分析其与产气性能的关系。结果表明:消化液回流体系中,细菌的丰富度、多样性均高于产甲烷古菌,并随回流时间的延长明显增加,而产甲烷古菌无明显变化;细菌群落主要分为厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和变形菌门(Proteobacteria)等8个不同的门类,厚壁菌门、梭菌纲(Clostridia)、梭菌属(Clostridium)是不同水平上的优势细菌,相对丰度分别从初期的62.79%、58.62%、35.44%上升到81.46%、68.19%、39.10%;产甲烷古菌中,广古菌门(Euryarchaeota)占绝对优势,在接种物中,第68 d和第219 d相对丰度分别为94.76%、99.89%、99.59%,属分类上主要有7种,其中甲烷八叠球菌属(Methanosarcina)的相对丰度由23.99%升高到72.28%,而甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)和甲烷球菌属(Methanosphaera)分别由16.34%、21.71%降低至3.70%、12.93%;日平均产气率由初期的409 m L·g~(-1)升高至477 m L·g~(-1),在219 d的试验中,氨氮和有机酸浓度均呈升高趋势,但并未对厌氧发酵产生抑制作用。研究表明:厌氧发酵回流体系中微生物以梭菌属和甲烷八叠球菌属为优势菌属,产气率随其相对丰度的增大而升高,而与甲烷短杆菌属和甲烷球菌属呈负相关。     

24种杀菌剂对香葱灰霉病菌的室内毒力测定

为筛选出有效防治香葱灰霉病的药剂,采用菌丝生长速率法测定24种杀菌剂对香葱灰霉病菌Botrytis cinerea的室内毒力测定。结果表明,不同单剂中,24%腈苯唑SC、25%己唑醇SC、40%嘧霉胺SC、50%咯菌腈WP、50%异菌脲SC、5%井冈霉素AS、25%嘧菌脂SC和51%申嗪霉素AS对香葱灰霉病菌的毒力较强,EC50分别为0.051 5、0.200 1、0.266 5、0.391 6、0.590 6、1.487 9、2.024 0、2.392 2mg·L~(-1);不同复配剂中,85%烟酰·嘧霉·菌胺EW、36%噁霉·菌酮·申嗪AS和26%苯甲·嘧菌酯SC对香葱灰霉病菌的毒力较强,EC50分别为0.269 6、0.811 8、1.185 6mg·L~(-1)。该研究结果为香葱灰霉病的田间防治提供药剂筛选依据。