新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达载体构建及在E.coli表达

为了研究新西兰兔SOD1蛋白分子的结构与功能,设计了一对特异性引物,通过RT-PCR方法克隆得到了该基因编码序列。将该编码序列克隆到分泌型原核表达载体PET-25b,经菌落PCR、双酶切和测序鉴定证实成功构建了重组表达载体。将重组质粒转化大肠杆菌表达菌株E.coli BL21(de3) PlysS,建立了分泌型原核表达系统。IPTG诱导培养重组菌后收集样品检测,经SDS-PAGE、Western blot鉴定,证实在培养物上清中检测到了SOD1蛋白的表达。至此,成功建立了新西兰兔SOD1基因的分泌型原核表达系统,实现了蛋白的可溶表达,为进一步研究该蛋白的结构与功能打下了基础。     

我区奥运期间“瘦肉精”的检疫监管工作总结

“瘦肉精”（化学名称盐酸克伦特罗）属于β-肾上腺素兴奋剂,世界上大多数国家未批准将其作为兽药使用,我国明确将其列入《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》。虽有法律法规明令禁止,但此类事件仍时有发生。海港区是2008年北京奥运会协办城市——秦皇岛市的城市中心区,加强动物及动物产品质量安全监管,确保奥运会期间动物产品有效供给和质量安全,就成了畜牧兽医行政主管部门必须做好的一项重点工作。     

种猪屠宰管理过程中存在的问题及对策分析

种猪即种公猪、种母猪,是维持生猪产能的主力军,对于保障养猪业健康发展和市场猪肉供应起着决定作用。由于种猪繁殖数代之后,繁殖性能下降、经济效益降低,往往就会淘汰,种猪可以广泛用于肉制品的深加工和熟食加工,也深得部分消费群体的喜爱。但也存在部分屠宰企业屠宰种猪后充当商品猪甚至冒充牛肉进行冷鲜上市,由于种猪肉价格低廉,会对市场造成冲击,扰乱了正常市场秩序。由此加强种猪屠宰监管,严防以种猪肉冒充商品猪肉进行冷鲜上市,是监管部门的法定职责,也是食品安全的需要。但是目前对种猪屠宰管理还存在法律法规不明确、责任不清晰、执行不到位等问题,笔者对有关问题进行了梳理,并提出了加强种猪屠宰管理的一些对策建议。本文梳理总结了当前种猪屠宰管理的有关法律法规、技术标准及管理现状,探讨分析了当前种猪屠宰面临的问题、执法监管难点和困扰,同时提出了一些对策建议以供基层在种猪屠宰管理中参考借鉴。     

大额牛气肿疽病的诊断与防制

气肿疽是由气肿疽梭菌引起的反刍动物的一种急性、败血性急性发热性传染病,不直接传播,呈散发或地方性流行。自然感染一般多发于黄牛,水牛、乳牛、牦牛易感性较小。对大额牛的感染尚没有报道,2010年泸水县老窝乡辖区内饲养     

中西结合防治山羊巴氏杆菌病

<正>近几年,笔者在临床上诊治了几起羊巴氏杆菌病,其中从中西结合方法最佳,现介绍如下供参考。1.发病情况2010年4月,某羊场从外地引回121只山羊,一周内开始突然倒地死亡10余只,每天死亡1只或2只,畜主请当地兽医用青霉素、链霉素等治疗后,效果不佳。     

山羊痘病毒非必需基因区gp024基因的鉴定

为筛选山羊痘病毒(GTPV)的外源基因插入区,本研究以GTPV Pellor株为模板,设计2对引物,PCR扩增AV 41株GTPV_gp024基因相邻上下游长度约1.1 kb的同源重组片段,分别插入质粒pGPT-EGFP中.插入部位在痘病毒双向启动子p11～p7.5启动的报告基因EGFP-GPT上下游,构建转移载体pEG024,并转染已感染GTPV Av 41病毒的LT细胞,经GPT加压筛选7代后得到重组病毒.结果显示,重组病毒稳定表达报告基因EGFP,从而表明GTPV_gp024基因能够作为外源基因的插入区.     

白藜芦醇和褪黑素对绵羊胎儿成纤维细胞转染及卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率。将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R^-5、R^-6、R^-7)3种浓度组及白藜芦醇和褪黑素联合添加组(R^-5M^-5、R^-6M^-7),通过电转效率和细胞凋亡情况确定电转体系优化方案;通过对细胞周期、线粒体膜电位及活性氧(ROS)的检测研究其作用机制。将绵羊卵母细胞分为对照组及白藜芦醇和褪黑素(R^-5M^-5、R^-6M^-7)联合添加组,通过绵羊卵母细胞体外成熟后卵丘细胞扩展、第一极体排出及体外受精胚胎的卵裂率检测其对卵母细胞体外成熟的作用。研究结果显示,分离的绵羊胎儿成纤维细胞P3代增殖旺盛,细胞生长曲线呈典型的S型;与对照组相比,所有试验组胎儿成纤维细胞的电转效率均显著提高(P<0.05),R^-5M^-5组电转效率最高;R^-6M^-7组显著降低细胞凋亡率(P<0.05),R^-5、R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组均显著促进细胞增殖(P<0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组G1期细胞增加,S期细胞相对减少,但差异均不显著(P>0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组成纤维细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05),R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组线粒体膜电位均显著增加(P<0.05);R^-6M^-7组显著促进绵羊卵丘细胞扩展、提高卵母细胞第一极体排出率和体外受精胚胎发育能力(P<0.05)。综上,白藜芦醇和褪黑素可以优化绵羊胎儿成纤维细胞电转体系,提高卵母细胞体外成熟效率,为白藜芦醇和褪黑素在转基因动物生产中的应用提供参考依据。     

山羊巴氏杆菌病的诊治及体会

泸水县某养殖场中山羊出现呼吸困难、食欲减退、精神沉郁、原地打转、卧地不起后死亡的病例。采集的病料经化验室诊断为巴氏杆菌,采用肌注青霉素320万IU、链霉素3g、安痛定20mL;静注10%葡萄糖2mL,对发病羊进行治疗,取得了较好的疗效,并提出了一些防治措施。     

乏情和发情初产母猪卵巢microRNA差异表达分析

为了探索卵巢microRNA （miRNA）在初产母猪生殖调控中的作用,本研究利用Illumina高通量测序技术检测了乏情和发情初产母猪卵巢miRNA的表达谱,并对表达量较高且差异显著的miRNA进行生物信息学分析。结果显示,本研究构建的两个small RNA文库共鉴定出503个miRNAs,其中已知的303个,新预测的200个。在已知的miRNA中,ssc-miR-10b在两个文库中的表达量最高,其次为ssc-miR-143-3p和ssc-miR-26a;在新预测的miRNA中,chr13_2637_mature在两个文库中的表达量最高,其次为chr8_9994_mature。与发情母猪相比,共有145个miRNAs发生显著变化（read counts>10,∣log₂（fold-change）∣>1）,上调114个,下调31个。在进一步筛选的31个表达量较高且差异显著的miRNAs（read counts>1 000,∣log₂（fold-change）∣>1）中,新预测的chr13_2585_mature上调倍数最高,且只在乏情母猪卵巢中表达。31个miRNAs共预测到7 388个靶基因,KEGG信号通路分析显示,有2 788个靶基因注释到了297个KEGG通路,前20个最富集的通路部分与生殖过程或生殖活动调控相关,表明这31个miRNAs参与了初产母猪的生殖调控。本研究结果丰富了猪miRNA数据资源,为进一步深入研究初产母猪的繁殖性能提供了理论依据。     

浅谈奶牛皱胃左方变位的非手术治疗体会

皱胃．即牛的第四胃，又称真胃。皱胃变位是指皱胃的正常解剖学位置发生改变，引起消化机能障碍，导致奶牛营养不良的一种内科疾病。一般分为皱胃左方变位和右方变位。其中左方变位是指皱胃的一部分通过瘤胃下方移到瘤胃左侧与腹壁之间。右方变位叉称为皱胃扭转，是指皱胃从正常的解剖位置以顺时针方向扭转到瓣胃的后上方．置于肝脏与腹壁之间。绝大多数病例是左方变位．右方变位占1／5左右。