奶牛SREBP1蛋白在乳腺上皮细胞的表达定位及对SCD1基因启动子的转录调控

【目的】固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)作为核转录因子,对于细胞脂肪合成酶基因的表达发挥着重要的调控作用。论文旨在奶牛乳腺上皮细胞中研究SREBP1对于SCD1基因启动子的转录调控作用,为进一步明确SREBP1对于靶基因的转录调控机制提供理论基础。【方法】以荷斯坦奶牛乳腺组织的c DNA为模板,采用分段克隆的方法获得SREBP1基因的编码序列,通过重组酶与pc DNA3.1载体进行重组环化构建pc DNA3.1-SREBP1表达载体,将构建的载体测序验证后提取质粒,转染奶牛乳腺上皮细胞。以EIF3K基因为内参基因,采用荧光定量PCR检测SREBP1基因m RNA的表达差异;采用免疫荧光的方法对SREBP1进行标记,以DAPI复染细胞核,激光共聚焦观察SREBP1蛋白的亚细胞定位;转染含有不同调控元件的SCD基因启动子,同时转染1.0μg pc DNA3.1-SREBP1作为处理,荧光素酶报告基因系统分析启动子活性;分别转染0.25、0.5和1μg的pc DNA3.1-SREBP1载体,分析p GL3-SCD 2和p GL3-SCD3启动子活性与SREBP1之间的量效关系。【结果】分段克隆得到的PCR产物分别为1 170、1 116、363和900 bp的片段,经过与pc DNA3.1载体重组后获得pc DNA3.1-SREBP1表达载体,经酶切和测序验证,发现除1个无义突变外,与标准序列完全相同,整个序列长度达到3 510bp;将pc DNA3.1-SREBP1载体转染乳腺上皮细胞后,Real-time PCR检测发现与转染空载体的对照组相比,SREBP1基因的m RNA表达倍数增强130.4倍(P0.001);激光共聚焦观察发现,DAPI染色的细胞核呈蓝色,免疫荧光标记的SREBP1呈绿色,二者融合后呈现青色,共定位在乳腺上皮细胞核中;启动子活性检测发现,与p GL3-SCD1、p GL3SCD 2相比,SREBP1处理能够极显著增加p GL3-SCD3、p GL3-CD4启动子的活性(P0.001),分别比对照组提高了1.0倍和0.7倍,进一步分析发现,在用0.25—1μg的pc DNA3.1-SREBP1处理后,与p GL3-SCD2的启动子活性持续下降相比,p GL3-SCD3的启动子活性从59.81上升到108.43(P0.001),二者存在剂量效应关系,结合SCD2和SCD 3启动子上主要的结构差异SRE元件(5′-AGCAGATTGCG-3′),推测此序列可能是SREBP1调控SCD基因启动子转录的结合序列。【结论】克隆构建奶牛SREBP1基因表达载体,亚细胞定位SREBP1蛋白主要在乳腺上皮细胞核中,SREBP1可以与SRE调控元件结合促进SCD1基因启动子的转录。     

油脂对乳腺脂肪合成酶分子调控的研究进展

日粮中添加不同油脂,能够调控反刍动物乳腺脂肪关键合成酶的基因表达。文章综述了油脂对反刍动物乳脂肪含量和脂肪酸成分的影响,特别是对脂蛋白脂酶（LPL）、乙酰辅酶A羧化酶（ACACA）、脂肪酸合成酶（FASN）和硬脂酰CoA去饱和酶（SCD）基因的表达调控,此外还介绍了固醇调节元件结合蛋白（SREBP）和过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）等调控因子的作用机制。     

共轭亚油酸在畜牧生产中应用的研究进展

共轭亚油酸(Conjugated linolei cacid,CLA)是近年来所发现的重要天然活性物质之一,具有抗肿瘤、提高机体免疫,降低动物体胆固醇含量等一系列作用,因此正逐步受到各国人们的普遍关注,本文就共轭亚油酸在畜牧生产中的应用加以阐述,以期为生产实践作出相应的指导。     

猪肿瘤抑制基因候选5的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,克隆了仔猪肿瘤抑制基因候选5(TUSC5),并初步分析其组织分布情况;获得了TUSC5基因的全长序列636bp,包括开放阅读框架(ORF)534bp,编码177个氨基酸。克隆的仔猪TUSC5基因与人、小鼠、大鼠的TUSC5基因序列的同源性分别为83.5%,82.4%,82.6%,推测的氨基酸序列同源性分别为71.2%,77.5%,78%,成功克隆了猪TUSC5基因。     

兔CCR9基因的克隆与序列分析

设计1对克隆引物,从兔十二指肠黏膜组织提取总RNA,进行RT-PCR,将PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆、测序并进行序列分析。结果表明：克隆的兔CCR9基因长为624 bp,编码由208个氨基酸残基组成的CCR9前体蛋白,预测CCR9具有多个跨膜区。克隆的兔CCR9基因与绵羊、人的同源性分别为82.9%、82.7%;推导的兔CCR9氨基酸序列与绵羊、人的同源性分别为80.1%、82.2%,其结构特征与绵羊、人的相一致。     

计算机图像处理技术在异色羽绒分选中的应用

为了解决异色羽绒的自动分选问题,实现异色羽绒的自动识别和自动提取的目的,提出了一种基于数字图像处理技术的机器视觉分选方法。该文对视觉识别中的窗口处理、图像分割以及面积和重心的计算做了介绍;分析了图像分割最佳阈值的计算方法,讨论了异色羽绒提取的信号控制方式;介绍了异色羽绒自动分选机的实验运行结果及其应用前景。     

猪甲状腺激素应答基因SPOT14(THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化

甲状腺激素应答基因（thyroidhormone responsive SPOT14,THRSP）是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用。为进一步研究猪SPOT14基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOT14（GenBank登录号:JF₉51726）的ORF片段与表达载体pET-28α（+）进行重组,获得的重组子pET-28α（+）-S14,转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL2l（DE3）感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS-PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1mmol/LIPTG诱导5h。将获得的包涵体用6xHisNi-NTA纯化柱纯化后,采用Western blot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达。重组质粒pET-28α（+）-S14在大肠杆菌BL21（DE3）中成功地得到了表达,不仅为SPOT14基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料。     

绵羊Gastorkine-1基因的克隆与序列分析

基于电子延伸序列,克隆并分析了绵羊Gastorkine-1基因。提取皱胃黏膜组织总RNA,利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD19-T载体连接后转化E.coliJM109感受态细胞,检测阳性克隆并测序。克隆的绵羊Gas-torkine-1基因长619 bp,编码185个氨基酸,与人、小鼠、猪、牛的同源性分别为82.0%,48.8%,85.4%,96.9%,推测的氨基酸序列信号肽为1~20 aa,BRICHOS结构域为54~150 aa,结构特征与人、小鼠、猪、牛的Gastorkine-1相一致。     

α-硫辛酸对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

试验目的在于探讨α-硫辛酸对肝损伤保护作用及可能的机理。小鼠染毒后(0.01%CCl45mL·kg-1)分别于0h、12h、24h给予α-硫辛酸(100mg·kg-1),末次给药12h后,测定相关生化指标。试验结果表明,α-硫辛酸可降低小鼠血清ACT、AST和胆红素水平,降低肝脏MDA水平,而使肝脏GSH、SOD水平升高。结果提示,α-硫辛酸对CCl4所致的小鼠急性肝损伤有明显保护作用,其机理可能与其抗氧化功能有关。     

预乳化在牛乳中添加DHA的工艺研究

DHA作为多元不饱和脂肪酸系列中重要的一种.现已发现其对人类的许多疾病的治疗和预防有着重要的意义.但是由于DHA常温下易于氧化.目前在牛乳中添加DHA所采用的方法和工艺,不仅设备和原料价格昂贵,而且生产工艺要求高,给生产带来了极大的风险,同时也加大了生产成本.试验就是否可以通过预乳化这一简单的工艺将普通的DHA添加到牛乳中进行了研究.