赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞内乳蛋白合成相关基因表达和蛋白磷酸化的影响

本试验旨在研究赖氨酸(Lys)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳蛋白合成相关基因表达和蛋白磷酸化的影响,深入探讨Lys对乳蛋白合成影响的机理。将第3代BMECs随机分为6组,各组培养基中Lys的浓度分别为0.5(对照)、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0 mmol/L,每组6个重复。37℃、5%CO_2培养48 h,之后采用化学发光法测定BMECs内三磷酸腺苷(ATP)的含量,采用实时荧光定量PCR法测定乳蛋白合成相关基因表达量以及采用蛋白质免疫印迹法测定乳蛋白合成相关蛋白的磷酸化水平。结果表明:随着Lys浓度的增加,ATP含量呈趋于显著的二次曲线升高(P=0.050);κ-酪蛋白(CSN3)(P=0.093)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)(P=0.005)、真核起始因子4E(e IF4E)(P=0.076)和磷酸腺苷活化的蛋白激酶α1(AMPKα1)基因表达量(P=0.045)呈显著或趋于显著的二次曲线变化,均为先升高后降低;α-酪蛋白(CSN1S1)基因表达量(P=0.081)及mTOR(P=0.038)和p70核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)磷酸化水平(P=0.022)呈显著或趋于显著的一次线性降低;磷酸腺苷活化的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平呈显著的一次线性升高(P=0.014)。方差分析结果显示,添加Lys显著影响ATP含量、乳蛋白合成相关基因表达量及e IF4E磷酸化水平(P0.05),其中,ATP含量以2.0~16.0 mmol/L组,CSN1S1、β-酪蛋白(CSN2)、信号转导和转录激活因子5(STAT5)基因表达量以1.0~2.0 mmol/L组,mTOR基因表达量以1.0~8.0 mmol/L组,CSN3基因表达量以1.0~4.0 mmol/L组,酪氨酸激酶2(JAK2)基因表达量以1.0~16.0 mmol/L组,S6K1基因表达量以2.0 mmol/L组,e IF4E基因表达量以2.0~8.0 mmol/L组,e IF4E磷酸化水平以2.0~4.0 mmol/L组时促进效果较好,但16.0 mmol/L组CSN1S1、CSN3、STAT5及mTOR基因表达量受到抑制,1.0~16.0 mmol/L组真核起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)基因表达量受到抑制。总之,Lys浓度为1.0~2.0 mmol/L时,对BMECs内乳蛋白合成相关基因表达的促进效果较好。     

利用体外三步法研究驴主要精饲料原料的体外营养物质降解率

试验旨在通过体外三步法即胃蛋白酶-胰酶-盲肠液法，模拟体外胃肠道环境，对驴常用精饲料原料在胃肠道中的体外降解率进行研究，评定驴常用精饲料原料的营养价值。选取驴养殖生产中广泛应用的精饲料原料，其中能量饲料9种，蛋白质饲料8种。模拟胃内环境消化1 h、小肠内环境消化24 h，进入体外盲肠环境进行连续培养24 h，采集盲肠液，测量精饲料原料的体外降解率。结果表明，驴对能量饲料的胃-小肠-盲肠体外降解率中，玉米、压片玉米和小麦营养价值较高，玉米皮和大豆皮较低，小麦麸、玉米胚芽粕、次粉和喷浆玉米皮居中。蛋白质饲料在驴的胃-小肠-盲肠体外降解率中，玉米蛋白粉、豆粕、DDGS、膨化大豆和双低菜粕的营养价值较高，尤以玉米蛋白粉最高，菜粕与棉粕的营养价值较低，全棉籽最低。能量饲料和蛋白质饲料的干物质（DM）、有机物（OM）与粗蛋白（CP）在胃-小肠（盲肠前）营养物质贡献率大多数在70%以上。但玉米蛋白粉、玉米皮和大豆皮的DM、OM较低，而玉米蛋白粉的CP也较低，为39.4%。研究表明，能量饲料中以玉米、压片玉米和小麦的营养物质体外降解率与消化能（DE）较高，玉米皮与大豆皮较低，其他能量饲料居中。蛋白质饲...     

维生素A过量对肉鸡早期骨骼钙磷代谢的影响

试验通过研究维生素A过量对肉鸡早期骨形成生化指标及组织中碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)基因表达的影响,旨在为深入研究日粮维生素A过量对肉鸡骨骼钙磷代谢产生负面影响的机理提供理论基础。采用完全随机试验设计,将450只1日龄健康爱拔益加(AA)肉鸡(公母各半)称重后随机等分为5个处理组,每个处理6个重复,每个重复15只鸡。各处理组日粮分别在基础日粮中添加3 000、6 000、15 000、30 000和60 000 IU/kg维生素A。试验期28 d,分别于试验第14、28天从每个重复中随机抽取1只鸡,翅静脉采血制备血清后随即宰杀,在冰浴上迅速分离右侧肝脏、十二指肠、空肠、回肠、胫骨组织,-80℃保存备用。试验结果表明,随日粮维生素A添加剂量的升高,肉鸡血清BGP浓度、ALP活性和骨特异性碱性磷酸酶(BAP)活性及胫骨、肝脏及小肠组织中ALP、BGP mRNA相对表达量均呈显著(P0.05)或趋于显著的一次线性或一元二次(P0.10)降低,通过回归分析得出:维生素A水平在42 766～47 185 IU/kg时,肉鸡14 d胫骨和肝脏ALP mRNA相对表达量、肝脏BGP mRNA相对表达量,28 d的血清ALP活性及肝脏ALP mRNA相对表达量、胫骨和回肠的BGP mRNA相对表达量最低。综合试验结果,维生素A线性降低了肉鸡早期血清BAP活性;日粮维生素A以剂量依赖模式影响肉鸡早期血清BGP浓度、ALP活性及其在组织中的基因表达,42 766～47 185 IU/kg维生素A对上述指标的降低作用较大,提示日粮维生素A过量可抑制肉鸡早期骨形成相关生化指标的活性,并下调胫骨、肝脏及小肠组织中ALP、BGP mRNA的相对表达量。     

弯形渠道水流偏斜问题探讨

以弯形渠道为研究对象,结合实际工程,对带陡坡弯形渠道的水流偏斜特征进行研究,给出了3种不同形状和尺寸的渠道对同样流量工况下的水流偏斜特性的分析比较,可为合理有效地设计河流取水工程、航道与河道整治等类似的工程设计和研究提供参考。     

不同类型CpG基序对细粒棘球蚴Eg95抗原的免疫增强作用研究

为探究不同类型CpG基序对细粒棘球蚴（Echinococus granulosus）Eg95抗原的免疫增强作用,将pET-32a-3Eg95重组大肠杆菌,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白pET-32a-3Eg95。将重组蛋白分别与常规佐剂Quli-A、pUC18-CpG和CpG ODN混合制备基因工程亚单位疫苗样品,免疫小鼠。通过间接ELISA方法检测抗体水平,通过实时荧光定量PCR方法测定体外刺激试验后细胞因子的相对表达量,检测不同佐剂在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原免疫效果的增强作用。结果显示,诱导表达重组蛋白的大小约为56 ku,与理论值相符,用羊细粒棘球蚴阳性血清检测有特异性条带;pUC18-CpG组和CpG ODN组小鼠免疫后14、28、42 d的抗体平均水平（D_{450 nm}）分别为3.10、3.03、3.22和2.98、3.12、3.27,与Quli-A组抗体平均水平相比均差异显著（P<0.05）;CpG ODN组血清中抗体平均水平略高于pUC18-CpG组,但差异不显著（P>0.05）。重组蛋白刺激后pUC18-CpG组与CpG ODN组IFN-β、IFN-γ和TNF-α的相对表达量分别为6.88、2.35、6.28和5.03、2.85、7.07,与Quli-A组相比差异均显著（P<0.05）。因此相对于常规佐剂Quli-A,pUC18-CpG和CpG ODN在体液免疫和细胞免疫方面对Eg95抗原都有显著的免疫增强作用,CpG ODN的免疫增强作用略优于pUC18-CpG,二者均可作为免疫佐剂,增强现有包虫病基因工程疫苗抗原的免疫效果。     

蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞内乳脂合成相关基因和蛋白表达的影响

本试验旨在研究蛋氨酸(Met)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)内乳脂合成相关基因和蛋白表达的影响,以探讨Met对乳脂合成的影响机理。将第3代BMECs随机分为6个处理(每个处理6个重复),培养液中Met浓度分别为0.13、0.26、0.39、0.52、0.65和0.78 mmol/L。在37℃、5%CO2条件下培养48 h后测定BMECs内甘油三酯(TG)的含量及乳脂合成相关基因和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)与固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)蛋白的相对表达量。结果显示:Met浓度对BMECs内TG含量无显著影响(P0.05)。0.52~0.78 mmol/L Met处理BMECs内脂肪酸结合蛋白3(FABP3)、乙酰辅酶A羧化酶A(ACACA)和PPARγ基因的相对表达量均显著高于其他处理(P0.05)。BMECs内脂蛋白脂酶(LPL)基因的相对表达量以0.26~0.39 mmol/L Met处理较高,显著高于0.65~0.78 mmol/L Met处理(P0.05)。脂肪酸合成酶(FASN)基因的相对表达量以0.39~0.52 mmol/L Met处理较高,且0.52 mmol/L Met处理显著高于0.13~0.26 mmol/L和0.65~0.78 mmol/L Met处理(P0.05)。Met浓度可显著影响SREBP1和乙酰甘油磷酸脂酰转移酶6(AGPAT6)基因及SREBP1和PPARγ蛋白的表达(P0.05),均以0.26 mmol/L Met处理的相对表达量最高。结果表明,Met浓度影响BMECs内脂肪酸摄取、从头合成的基因的表达及乳脂合成调控因子PPARγ和SREBP1的基因和蛋白的表达,Met浓度为0.26~0.52 mmol/L时对BMECs内脂肪酸从头合成及长链脂肪酸摄取的促进效果较好。     

山阴县和应县地区土地盐碱化成因及治理措施

本文分析了山阴县、应县地区土地盐碱化现状、危害及成因,提出了井灌井排、平整土地、化学改良控盐碱、生物防护弱盐碱和土壤深松耕作等5种治理措施,以期提升耕地质量。