兰花褐斑病菌实时荧光PCR检测

兰花褐斑病菌(Acidovorax avenaesubsp.cattleyae)是兰花上一种重要进境检疫性有害生物,可通过植株和种子远距离传播,其传染性强,对兰花危害性大。根据核糖体ITS序列设计了TaqMan-MGB探针并建立了实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测兰花褐斑病菌,所有供试的目标菌株检测结果均为阳性,而其它28个对照菌株(含同属内其它种及avenae种下其它亚种)均为阴性。利用该方法从发病兰花植株总DNA中检测到该病菌。本方法灵敏度高,检测极限达9×10-9μg DNA,操作方便快速,结果可靠,适合于口岸兰花的进出境检疫及兰花种苗健康质量控制。     

大麦条纹花叶病毒中国株三基因盒(TGB)序列对比分析

 The tripe gene block (TGB)genes of Barley stripe mosaic virus China strain (BSMV-CH)were amplified from cDNA of BSMV-CH RNAβ (GenBank accession No:AY789694)by PCR with special primer pairs, and cloned into pMD18-T vector for sequencing. Analysis of the sequences showed that the full length of BSMV-CH TGB1, TGB2 and TGB3 were 1 539, 396 and 468 bp, with deduced 512, 131 and 155 amino acids, respectively. BSMV-CH TGB1 shared 94.1%-95.4% nucleotide identities and 91.0%-94.5% amino acid identities with that of other BSMV strains, BSMV-CH TGB2 shared 96.5%-97.2% nucleotide identities and 98.5%-99.2% amino acid identities with that of other BSMV strains, and BSMV-CH TGB3 shared 95.7%-96.6% nucleotide identities and 94.2%-96.8% amino acid identities with that of other BSMV strains. Phylogenetic tree based on the amino acid of Hordeiviruses TGB genes showed that BSMV-CH was relatively closed to CV17 in genetic relationship. Therefore, BSMV-CH was deduced to be a recombined strain of CV17 and CV42.     

利用双重PCR技术快速检测水稻细菌性谷枯病菌

根据水稻细菌性谷枯病ITS和gyrB基因,设计两对特异性PCR检测引物,建立了水稻细菌性谷枯病菌的双重PCR检测方法。用该方法对水稻细菌性谷枯病菌和其它植物源性细菌进行双重PCR扩增及灵敏度测试,并对采自不同地区的水稻样本进行水稻细菌性谷枯病菌的检测。结果显示,双重PCR方法能特异性地检测出8株水稻细菌性谷枯病菌,可从含水稻细菌性谷枯病菌浓度为102cfu/mL的菌液中检测出该病菌;采用该方法对我国不同地区的水稻材料进行检测,并未发现水稻细菌性谷枯病菌。     

雏鸭病毒性肝炎的诊断及防治

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒引起的雏鸭急性败血性、高度致死性传染病．其特征是患鸭呈现沉郁、转圈、抽搐、角弓反张等神经症状,并具有肝脏肿胀、出血,胆囊充盈,胆汁颜色变淡等病理变化。鸭病毒性肝炎有三种类型,Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。Ⅰ型呈世界性分布．可引起雏鸭的严重死亡,死亡率高达90％,其广泛分布,成为危害养鸭业的主要传染病之一。     

进境兰花褐斑病菌的分离及PCR鉴定

兰花褐斑病（Acidovorax avenae subsp. cattleyae）是兰花上一种很重要的细菌性病害.在检疫监管中,对进境文心兰（Oncidiums spp.）疑似兰花褐斑病症状的植株分离所得细菌进行过敏性坏死反应、生理生化反应的基础上,利用特异性引物和ITS通用引物进行了PCR扩增及序列分析,确认该病害为A. avenae subsp. cattleyae.此为我国首次从进境兰花中截获兰花褐斑病菌.     

抚仙湖径流区烟叶化学成分特征及工业需求符合性评价*

运用数理统计方法对澄江抚仙湖径流区2009~2019年的烟叶化学成分数据进行分析,明确该区域烟叶化学成分特征及工业需求符合性。结果表明,上部烟叶烟碱、总糖、还原糖、总氮、氧化钾、氯、钾氯比、两糖差、糖碱比、氮碱比和非烟碱氮/总氮的平均值分别为：3.33%、26.62%、20.76%、2.57%、1.93%、0.29%、9.43、5.86、8.45、0.79和0.77。中部烟叶烟碱、总糖、还原糖、总氮、氧化钾、氯、钾氯比、两糖差、糖碱比、氮碱比和非烟碱氮/总氮的平均值分别为：2.55%、29.21%、22.27%、2.14%、2.04%、0.29%、10.26、6.94、12.02、0.85和0.79。下部烟叶烟碱、总糖、还原糖、总氮、氧化钾、氯、钾氯比、两糖差、糖碱比、氮碱比和非烟碱氮/总氮的平均值分别为：1.59%、25.71%、20.31%、1.46%、2.44%、0.37%、10.33、5.40、16.82、0.92和0.81。烟叶化学成分和协调性指标均在清香Ⅰ型优质烟叶要求的范围内,但不同年份间存在差异。澄江抚仙湖径流区烟叶化学成分含量适宜,指标间协调性较好,具有较高的工业可用性。     

苜蓿萎蔫病菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

苜蓿萎蔫病菌是我国对外检疫性二类有害生物，目前国内尚无发生6在出入境捡验检疫中主要是采用生物学和血清学方法进行检测，劳动强度大，耗费时间长。根据苜蓿萎蔫病菌与其它细菌菌株16SrDNA序列差异，设计出对苜蓿萎蔫病菌具有稳定点突交特异性探针，利用该探针对棒形杆菌属4个种及其它属细菌进行了实时荧光PCR检测实验。结果表明，只有苜蓿萎蔫病菌能检测到荧光信号，其它细菌没有荧光产生。该方法特异性强，灵敏度高，能检测到21．4fg质粒DNA，比常规PCR灵敏100倍，而且整个过程只需要2～3h。该方法可有效地应用于进出境病原菌检测之中。     

抚仙湖径流区植烟土壤养分特征分析

为全面分析抚仙湖径流区植烟土壤性状特征，采集径流区154个土壤样品，从不同乡镇、不同地块类型和不同海拔等进行了分析，并对不同乡镇进行了聚类分析。抚仙湖径流区植烟土壤酸碱度整体适宜，水解氮含量适中，磷钾丰富，有机质含量中等偏低，微量元素硼含量适宜，氯离子含量较低。不同乡镇土壤特征差异显著，青龙镇的磷钾含量均较高，分别为50、400 mg/kg,与其他乡镇均达显著差异，右所镇水解氮含量和pH较高；从不同田块类型来看，坝区和山区植烟土壤有效磷和水解氮含量差异达显著水平，坝区植烟土壤的有效磷、水解氮、pH和氯离子含量高于山区，速效钾、pH、有机质、有效硼和氯离子含量差异不显著；从不同海拔来看，海拔1 400～1 600 m的区域有效磷、速效钾和水解氮含量较高，与其他海拔区域差异均达显著水平，且呈随着海拔升高而降低的趋势。pH、有机质和有效硼在各海拔区域之间差异不显著，有机质有随着海拔升高而增加的趋势，有效硼呈随着海拔升高而降低的趋势。抚仙湖径流区植烟土壤各性状指标整体较适宜烟叶种植，但不同乡镇、田块差异较大，个别指标变异系数较大，烟叶生产上要注重做细施肥方案，做到“一片一方案”以达到获得优质烟...     

不同药剂对露地西瓜果斑病的防效及产量影响

西甜瓜产业是宁夏地区的特色优势产业,然而瓜类细菌性果斑病严重威胁着该产业的健康发展。本研究评价了噻霉酮、碧生、加瑞农和纳米银等药剂对大田栽培西瓜的瓜类果斑病的防治效果及产量的影响,试验结果表明,相对于清水对照,4种药剂都显著抑制瓜类细菌性果斑病,并实现增产,但防治和增产效果与药剂的种类以及施用时间等有关。本研究为宁夏瓜类果斑病的有效防治提供了一定的借鉴意义。     

非洲猪瘟病毒MGF-505R基因缺失株双重荧光RPA检测方法的建立及应用

旨在建立一种快速现场筛查非洲猪瘟病毒(ASFV)基因缺失株的方法，以便鉴别我国复杂的ASFV感染情况。通过分析国内ASFV流行态势，选择MGF-505R基因及B646L基因，设计特异性引物及exo探针，对其进行敏感性、特异性分析，并进行临床应用。利用双重-重组酶聚合酶扩增(RPA)方法检测ASFV MGF-505R及B646L基因，结果显示：检测时间在15 min内，最低检测限均为10 copies/反应，且与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型等均无交叉反应；利用所建立方法对266份临床样品进行检测，结果与世界动物卫生组织(WOAH)推荐荧光PCR检测方法的符合率为100%。建立的ASFV MGF-505R基因缺失株的荧光RPA检测方法适配可移动式荧光RPA检测仪，具有快速、灵敏度高、特异性强的优点，适用于ASFV现场快速临床检测，为非洲猪瘟疫情防控提供一种新的筛查手段。