从江香猪源干扰素γ植物表达载体构建及在生菜中瞬时表达

为构建从江香猪源干扰素γ(IFNγ)植物表达载体,通过农杆菌真空渗透法在新鲜生菜中实现瞬时表达。参考GenBank登录的猪IFNγ基因序列设计1对特异性IFNγ引物,采用RT-PCR方法从贵州从江香猪源肝脏组织扩增IFNγ基因序列,将其克隆至植物表达载体PBI121,转化根癌农杆菌LBA4404,筛选阳性菌株提取质粒,对重组质粒进行PCR扩增、双酶切及测序鉴定;携带重组质粒根癌农杆菌真空渗透法感染生菜,GUS染色检测感染的生菜叶片,ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白,分析重组质粒在生菜中表达效果;采用细胞病变抑制实验检测生菜中从江香猪源IFNγ蛋白抗病毒活性。结果表明:本研究成功地从贵州从江香猪源肝脏组织扩增获得IFNγ基因序列并构建了从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ;GUS染色感染的生菜叶片可见蓝色物质;ELISA检测感染生菜叶片中从江香猪源IFNγ蛋白含量为169.397、170.657、170.37 pg/mL;生菜中表达从江香猪源IFNγ经4^-6稀释在Marc145细胞上仍能够抑制100 TCID50的PRRSV的致细胞病变作用。本实验成功构建从江香猪源IFNγ植物表达载体PBI121-IFNγ,生菜中瞬时表达蛋白具有免疫反应性和抗病毒活性,为从江香猪源IFNγ药用植物蛋白的研究开发提供参考依据。     

从江香猪源切除信号肽β干扰素原核载体的构建

β干扰素(IFN-β)具有重要的抗病毒生物学功能,为了研究从江香猪源IFN-β生物活性,试验设计1对扩增切除信号肽序列的香猪源IFN-β编码区引物,以pUCm-T-IFN-β为模板进行PCR扩增,经菌液PCR筛选、测序鉴定后,获得重组质粒pColdⅠ-CJ-poIFN-β,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳,Western blot方法对重组表达蛋白进行分析。结果:切除信号肽序列的从江香猪源IFN-β序列编码区长为498 bp,表明该片段已正确插入原核表达质粒pColdⅠ中;SDS-PAGE蛋白电泳在预期位置未见蛋白条带,但Western blot检测显示带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,显色后条带为18.26 ku,与预期大小相符。结果显示:试验成功构建了携带切除信号肽序列的香猪源IFN-β基因的原核表达质粒,但重组蛋白表达量极低,试验结果为进一步研究从江香猪源-β干扰素的生物活性奠定基础。     

清解合剂提取工艺优化

优化清解合剂的提取工艺,充分提取药物中的有效成分。采用单因素试验确定不同因素对提取工艺的影响以及正交试验的因素与水平;用高效液相色谱检测黄芩苷的含量,以黄芩苷含量和干膏得率为综合评价指标,采用加权评分法进行综合评分,筛选出清解合剂的最佳提取工艺。结果表明,最优提取工艺为料液比1∶15(g∶mL),提取时间1 h,提取次数2次,黄芩苷的线性回归方程为y=37 499x-112 622(R2=0.999 6),黄芩苷对照品质量浓度在7.81～500.00μg/mL范围内呈现良好的线性关系。表明优选的提取工艺稳定可行,为规模化生产提供一定的理论依据。     

禽传染性支气管炎病毒多表位嵌合基因的构建和原核表达

传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(IBV)引起的鸡的一种急性、高度接触性传染病,给养禽业造成严重经济损失.生产中常采用弱毒疫苗对IB进行预防控制,但它存在毒力返强的隐患[1];灭活疫苗对冠状病毒感染的免疫效果不确实,且其副作用可能造成较严重及较长时间的局部反应.常规基因工程疫苗具有安全性好和诱导全方位免疫应答等优点,但它通常只能携带一个目的基因,因而诱导的免疫保护力有限.     

复方中药发酵饲料对猪生长性能、血清指标及屠宰性能的影响

试验旨在探究复方中药发酵饲料对猪生长性能、血清免疫指标、血清抗氧化指标及屠宰性能的影响。选择体质健康、体重在7～8 kg、28日龄的杜长大三元母猪914头,随机均分两组,每组12个重复,每个重复38头猪。对照组猪饲喂基础日粮,试验组猪饲喂基础日粮+1%复方中药发酵料。试验期164 d。结果显示：与对照组相比,试验组猪末重提高了2.63%,平均日增重提高了3.09%,平均日采食量降低了2.68%,料重比降低了5.6%,腹泻率降低了30.95%,差异均不显著（P>0.05）。与对照组相比,试验组猪血清免疫球蛋白G (IgG)、γ干扰素（INF-γ）含量分别提高15.26%和7.28%,α干扰素（INF-α）含量降低0.08%,但差异均不显著（P>0.05）。与对照组相比,试验组猪血清超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性分别提高8.19%和0.95%,丙二醛（MDA）含量降低5.69%,但差异均不显著（P>0.05）。与对照组相比,试验组宰前活重提高了8.5 kg,体高、体长、胸围分别提高了11、2、11 cm,平均背膘厚降低了5.4 mm。与...     

复合天然植物添加剂对黄羽肉鸡生长性能、免疫功能及脏器组织形态结构的影响

为研究复合天然植物添加剂对黄羽肉鸡生长性能、免疫功能及脏器组织形态结构的影响,试验选用400羽黄羽肉鸡混合雏,随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验A、B、C组分别在基础日粮中添加低（3 g/kg）、中（5 g/kg）、高（8 g/kg）剂量的天然植物添加剂,每组10个重复,每个重复10羽,试验期50 d。结果表明,试验C组效果最佳,试验全期平均日增重较对照组提高5.53%（P<0.05）,料重比较对照组降低6.11%（P<0.05）,成活率比对照组提高2.16%（P<0.05）;与对照组相比,各添加剂组均在一定程度促进免疫器官发育,试验C组各免疫器官指数均显著提高（P<0.05）,同时各试验组均能提高NDV疫苗抗体水平及其整齐度;各试验组显著增加了十二指肠绒毛长度和V/N值（P<0.05）,并且促进肝脏、肾脏组织健康发育。本试验添加天然植物添加剂可显著提高黄羽肉鸡生长性能,增强机体免疫功能,促进肠道、肝脏和肾脏的发育,提高机体健康水平,其添加量以5 g/kg为宜。     

鸡传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗的构建和表达

通过文献报道和计算机软件分析筛选出鸡传染性支气管炎病毒(IBV)结构蛋白基因S1、S2、N基因的T、B细胞的优势抗原表位共7段,采用人工合成及PCR方法将各抗原表位以柔性氨基酸(GP/GA)作为接头串联成一条全新的多表位嵌合基因F,并定向克隆入真核表达质粒pVAX1,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒.阳性质粒pVAX-F通过脂质体转染COS-7细胞进行表达研究.提取转染细胞总RNA,RT-PCR方法检测到目的基因的转录;间接免疫荧光试验(IFA)检测到特异性荧光存在.表明表达产物能与相应抗体特异性结合,证明了具有一定的生物学活性和抗原性,有望成为抗IBV的核酸疫苗.