PRRSV XH-GD株Nsp2部分缺失感染性克隆的构建

为研究Nsp2编码区不同区域缺失对病毒体外复制的影响,本研究在猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)XH-GD株反向遗传操作平台的基础上构建了pOK-AaBCD、pOK-AbBCD、pOK-AcBCD等3种Nsp2编码区部分缺失的感染性重组质粒。将这3种感染性质粒分别转染Marc-145细胞进行不同Nsp2缺失株的病毒拯救,结果显示,只有在Nsp2编码区缺失105个氨基酸的缺失株XH-GD-Δ105能够在Marc-145细胞中增殖,表明这一缺失区域为病毒复制的非必需,而其他两种感染性质粒则未拯救出相应的缺失重组病毒。本研究为进一步研究Nsp2的基因序列的缺失与PRRSV毒力之间的关系奠定了基础。     

3种分支杆菌多重PCR快速检测方法的建立

本试验旨在构建一种以不同分支杆菌特异片段为目的基因的多重PCR检测方法。采用GenBank公布的结核分支杆菌RD10序列、牛分支杆菌moaB3序列、鸟分支杆菌16-23SrDNA序列设计并合成特异性引物,扩增产物条带分别为954bp、297bp、119bp。结果显示,三段目的基因都有很高的特异性,对比菌株均无扩增产物出现。对倍比稀释的模板质粒进行检测,该方法的最低检出量为103 copies/μL的DNA模板,该方法特异、敏感、重复性好。首次应用的moaB3基因所得扩增效果良好,成功区分出牛分支杆菌。此多重PCR方法可用于结核分支杆菌、牛分支杆菌、鸟分支杆菌的鉴别和牛结核病的快速临床检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白7特异性抗体体外抑制病毒复制

为进一步探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)非结构蛋白7(Nsp7)在病毒复制过程中发挥的生物学作用,本研究在获得Nsp7可溶性重组蛋白的基础上,首先制备了抗Nsp7蛋白兔源多克隆抗体。确定抗体的免疫活性后,将其与PRRSV共同接种Marc-145细胞。孵育1h后弃掉混合物,加细胞维持液继续培养48h,应用TaqMan探针Real Time PCR方法对培养物中病毒拷贝数进行检查。结果显示,本研究制备的多克隆抗体可以和大肠杆菌表达的Nsp7α、Nsp7β重组蛋白发生特异性结合,并有效用于病毒感染Marc-145细胞后其Nsp7蛋白分布情况的原位检测;更为重要的是,与正常家兔血清相比,不同稀释倍数的抗Nsp7多克隆抗体均可对病毒的复制产生抑制作用,其中10-3倍稀释血清的抑制率可达88.4%。结果表明,Nsp7特异性抗体可有效用于PRRSV抑制试验的研究;Nsp7作为PRRSV复制酶多聚蛋白成员之一,在病毒复制过程中发挥着重要作用。     

恒河猴结核病的病理组织学诊断

流行病学调查表明,野生动物结核病发病率逐年升高,其中非人灵长类野生动物对结核分支杆菌、牛分支杆菌和禽分支杆菌均具有易感性,猴子易感性尤高.为对一例疑似猴结核病群发性病例进行确诊,并进一步明确其感染分支杆菌类型,本文应用病理组织学技术和PCR方法对该病例进行诊断.病理组织学观察结果表明,发病恒河猴患有结核病；PCR试验显示,该结核病病原为牛分支杆菌.本试验结果表明,圈养幼龄恒河猴自然感染牛分支杆菌后,可以出现典型的临床症状和病理组织学变化,甚至死亡.该结果将进一步为猴结核病流行病学及病理学研究提供参考依据.     

基于非洲猪瘟病毒p30与p54蛋白表位串联多肽的间接ELISA抗体检测方法的建立

旨在建立检测非洲猪瘟病毒(ASFV)血清抗体的间接ELISA方法。本研究以两株纯化的ASFV p30与p54蛋白单克隆抗体(mAbs)为靶分子,利用噬菌体展示十二肽库进行四轮生物淘选,筛选多肽表位,以氨基酸GGG为接头设计合成表位串联多肽作为包被抗原,通过棋盘滴定法确定间接ELISA的最佳反应条件,利用不同类型血清样本对建立的方法进行特异性分析、敏感度分析、稳定性分析及符合性评价。噬菌体淘选试验结果表明¹⁴⁶PAEPYTT¹⁵²为本实验室保存的mAb所识别的p54蛋白抗原表位核心序列。ELISA条件优化试验结果显示,以鸡卵白蛋白(OVA)作为N端偶联物的表位串联多肽抗原具有较低的非特异性血清反应背景,当多肽以碳酸盐缓冲液包被(2 μg·mL^-1),血清以封闭液(1%明胶溶液)稀释100倍,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗体以0.05% PBST溶液稀释5 000倍时,反应效果最佳;以上述优化后的条件确定了血清抗体阳性临界值为0.339。方法评价试验结果显示,该方法与经典猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)及猪伪狂犬病病毒(PRV)的抗体阳性血清均无交叉反应,能检测低至1 600倍稀释的ASFV阳性血清,具有较好的重复性。用该方法与商品化的ASFV抗体检测试剂盒同时检测320份猪血清样本,两种方法的相对特异性和相对敏感性分别为97.6%与97.3%,总体符合率达97.5%(312/320)。综上表明,本研究建立的多肽间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性及重复性,具有发展为临床诊断试剂盒的潜在应用价值。     

江苏省兴化市畜禽养殖变革与突破

兴化市不仅是全国著名的农业大市，也是江苏的畜牧业强市。近几年来，在市委、市政府的正确领导下，畜牧业生产保持了一个持续、稳定、协调发展的好势头。2005年，全市实现畜牧业产值9．18亿元，占农业总产值的15．76％：生猪饲养量71万头，其中上市肉猪45万头；家禽饲养量1880万只（鸡1296万只，鸭199万只，鹅585万只），其中上市家禽1226万只，蛋品产量4．536万吨；山羊饲养量50．7万只，其中上市肉羊50．76万只；饲养奶牛404头，年产鲜奶1500吨。畜牧业已经成为兴化市农村经济建设的支柱性产业，成为农民增收新的增长点。随着畜牧业规模化、区域化、集约化、标准化生产步伐的加快，以猪、禽、兔、奶牛为主的畜禽养殖小区（场）建设也应运而生，并呈现出蓬勃发展的良好态势，其发展数量、规模和小区（场）建设水平走在全省的前头，已经得到了上级部门的充分肯定。[编者按]     

仔猪黄白痢的发病诱因及防治

仔猪黄白痢是一种由致病性大肠埃希氏菌引起的肠道传染病,长期困扰着养猪业的健康发展,对养猪业造成了极大的危害,本文就仔猪黄白痢的流行病学、发病原因、症状及综合防治措施进行了综述,供广大养殖户在防治仔猪黄白痢时借鉴.     

加快发展农民专业合作组织 破解“三农”问题的有益尝试——关于濮阳市寨里蔬菜农民专业合作社的专题调查

华龙区岳村乡寨里村位于濮阳市城区东北部，属典型的近郊农业村，现有农户310户，1340人，耕地约122．67hm^2。2007年。该村组建蔬菜农民专业合作社以来，蔬菜种植迅速走上规模化生产、组织化经营的道路。寨里村也成为远近闻名的现代农业发展龙头村。     

猪传染性胃肠炎病毒特异性受体APN 功能区的初步鉴定

试验为了构建猪氨肽酶N（pAPN）不同基因片段大小的重组质粒并进行原核表达及纯化,经Western—blot、ELISA方法初步鉴定猪氨肽酶N受体功能区。试验构建重组了质粒pET30a—pAPN1（106～669nt）、pET30a—pAPN2（670-1044 nt）、pET30a—pAPN3（1045-1773nt）、pET30a—pAPN4（1774～2328 nt）、pET30a—pAPN5（2329—2889 nt）、pET30a—pAPN6（106—1044nt）、pET30a—pAPN7（1774—2889 nt）;转化宿主菌BL21（DE3）细胞,IPTG诱导表达蛋白,包涵体经SDS聚丙烯酰氨凝胶电泳回收纯化;用Western—blot、ELISA方法经抗pAPN多克隆抗体初步筛选出pAPN受体功能区。结果表明：pET30a—pAPN2、pET30a—pAPN3、pET30a—pAPN6、pET30a—pAPN7蛋白均以包涵体形式表达并纯化。pET30a—pAPN3、pET30a-6、pET30a-7能与抗pAPN多抗产生特异性反应。经抗pAPN多抗筛选初步鉴定出其主要抗原功能区在36—153aa、349—591aa、592～963aa内。     

猫室间隔缺损双向分流的病例报告

本文介绍1只14月龄雌性未绝育的苏格兰折耳猫因鼻炎来院就诊,X线检查和超声心动图检查发现患猫存在孤立型室间隔缺损(VSD),缺口处呈双向分流,右心室流出道未发现狭窄,肺动脉扩张且伴有右心肥大,存在肺动脉高压。患猫自确诊后16个月内未进行持续性医学治疗,生活质量未受到明显影响。该报告表明,猫孤立型VSD对临床症状的影响不明显,与犬存在差异,可为小动物临床诊疗提供参考。