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用原核表达的重组胎儿弯杆菌毒力因子表面蛋白(rSapA-N)免疫小鼠,采用细胞融合技术,共获得2株抗rSapA-N的单克隆抗体(MAb),经Ⅰg亚类鉴定,均为ⅠgG1,轻链为K链;Western blot证实这2株MAb均能与rSapA-N发生特异性反应,而与其它蛋白则不发生反应;以这2株MAb的杂交瘤细胞制备腹水,效价达到1:100 000和1:60 000.本研究制备的MAb,为研究和检测胎儿弯杆菌提供了一种重要的手段. 相似文献
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猪附红细胞体PCR检测方法的建立 总被引:12,自引:0,他引:12
根据已发表的部分猪附红细胞体序列设计了一对特异性引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出了一条约936 bp的基因片段,并成功地将该基因克隆于克隆载体PMD18-T,经酶切分析和PCR进一步鉴定后进行序列测定,结果表明,所克隆的目的基因与GenBank中发表的序列一致。并利用特异性引物初步建立了猪附红细胞体病PCR检测技术。 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌( Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)引起的猪的呼吸道疾病.为了有效地控制本病,长期以来人们一直致力于研究高效、能提供强大保护力的疫苗,其中研究较多的是亚单位疫苗.人们发现把去除细胞的培养物上清液接种猪也可提供一定的保护力,于是对其中可能的毒力因子及具免疫原性的成分分别进行了分析.包括荚膜多糖、脂多糖内毒素、外膜蛋白、溶血素、转铁结合蛋白、蛋白酶以及所谓的渗透因子等. 相似文献
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25_4株ApxIICA基因用特异性引物进行PCR扩增并克隆到T载体上,构建重组质粒pMD18_ApxIICA,将pMD18_ApxIICA转化到E.coliJM83中并测序。序列分析表明血清型7型25_4株ApxIICA与其它血清型(5型和9型)核苷酸序列同源性达98%以上,氨基酸序列同源性达90%以上。利用ApxIIC基因内部单一的SpeI位点,设计特异性的引物,利用PCR技术在ApxIIC基因内部缺失165bp的核苷酸片段,PCR产物再用SpeI进行酶切,并体外连接构建得到含有ApxIIC缺失基因的重组质粒pMD18_ApxII△CA。 相似文献
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以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25_4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18_T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX_6P_1中,构建成重组表达质粒pGEX_apxIVA,转入到大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,进行SDS_PAGE电泳。结果表明,25_4株apxIVAgene与基因库中标准7型apxIVAgene同源性达97%,所表达的融合蛋白相对分子量为44kD,与实际预测相符。apxIVA毒素特异片段的成功表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的诊断打下基础。 相似文献
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本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp~3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有10^6个克隆)。将该文库随机分为10个亚文库(10个Clone pool),分别提取每个亚文库的重组质粒免疫小鼠(n=130只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率、肺组织荷菌数、病理组织学3个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。试验结果表明,Clone pool3、Clone pool2、Clone pool6和Clone pool7的免疫效果明显优于其他免疫组,尤其是Clone pool3的免疫保护效果最佳。本研究成功构建了7型胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库,从而为筛选和获得新的保护性抗原基因奠定基础。 相似文献
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猪胸膜肺炎放线杆菌Apx Ⅳ A2.5kb基因片段的分子克隆及其表达 总被引:2,自引:1,他引:1
以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清1型国内分离株72—1株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增出ApxⅣA基因2.5kb特异片段,将其克隆于pMD 18-T中,经酶切鉴定筛选重组质粒后进行核苷酸序列测定,并与GenBank中登录的血清1型ApxⅣA(AⅪ302405)基因进行比较,结果显示核苷酸同源性为99.5%。将该片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1的EfoRⅠ/SalⅠ位点,成功地构建了重组表达载体pGEX—apxⅣA,并转化大肠埃希氏菌BL2l,获得了表达。SDS-PAGE检测结果显示,表达的融合蛋白分子质量约为117ku,与预期片段大小相符;Western-blotting分析证实,该融合蛋白具有免疫学活性。 相似文献
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一、农村剩余劳动力转移现状
确立社会主义市场经济体制的改革目标后,我省作为一个农业大省,也出现了从事单一农业的劳动力数量的绝对减少。与全国相比,我省农业剩余劳动力转移有许多相同之处,也有一定的特殊性。 相似文献
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为了制备抗牛γ-干扰素(IFN-γ)的单克隆抗体(McAb),并对其部分生物学特性进行初步研究,试验用重组牛IFN-γ蛋白免疫小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术和间接ELISA方法进行试验.结果表明:共获得5株抗IFN-γ的单克隆抗体,Ig亚类鉴定均为IgGI,轻链为k链;经Weatern-blot试验证实5株McAb均能与IFN-γ发生特异性反应,而与其他蛋白不发生反应,特异性好;以5株分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备腹水,效价均达到1:50 000以上. 相似文献