大鼠脑震荡模型建立法的改良和评价

目的建立简单实用的大鼠脑震荡伤模型，为损伤的认定和损伤机制的研究奠定基础。方法采用自制装置以200g砝码从不同的高度对大鼠造成闭合性脑损伤，动态观察伤后大鼠意识状态、行为活动及病理学变化。对于符合脑震荡伤临床及病理表现的大鼠，取其脑组织进行热休克蛋白70（HSP70）免疫组织化学染色，在光学显微镜下观察并进行图像分析及相应统计学处理。结果大鼠受到打击后可出现典型的脑震荡临床表现，病理学观察可不出现明显的挫伤出血，而伤后30min，在大脑皮质、海马区见少量HSP70免疫组化染色阳性细胞，12h达高峰。结论该方法较好的复制了脑震荡模型与临床上脑震荡伤表现相似，病理改变不明显，通过免疫组织化学染色观察可发现脑神经损害。该模型的建立有助于进行脑震荡伤后继发病理改变的机制和治疗方法的研究。     

鲤免疫应答相关基因的克隆与鉴定

为研究鲤(Cyprinus carpio L.)白细胞免疫应答相关的分子机理,以体外培养的鲤外周血白细胞为实验材料,用荧光标记的mRNA差异显示(FluoroDDRT-PCR)技术,研究丝裂原(50μg/mL LPS、50μg/mL PHA和50μg/mL ConA)在刺激白细胞4、12和24 h内诱导白细胞免疫应答相关基因的mRNA表达差异,共获得92个差异片段,其中87个片段有再扩增产物,再扩增率为94.6%;将差异片段克隆,经PCR鉴定,获得81个阳性克隆,鉴定率为93.1%;差异片段序列同源性功能分析结果表明,本研究共获得3个免疫应答相关的cDNA克隆,它们分别编码鲤的蛋白酶体激活因子PA28α亚基、翻译延伸因子(EF-1α)和基质金属蛋白酶13(Mmp13)部分序列,为进一步研究这些差异表达基因在鱼类免疫中的作用机制奠定了基础。     

淡水养殖鱼类主要细菌性传染病快速诊断的研究——直接荧光抗体法检测6株鱼类致病菌

用６种淡水鱼常见致病菌制备了荧光抗体诊断液，经交叉染色及对照菌染色，表明具有较高的特异性，可直接用病鱼的内脏涂片对致病菌做出鉴定，具有直观、快速的特点，适用于鱼类细菌病的快速诊断及流行病学调查。     

木尘易致病

如今,木材生产和木材加工广泛地使用了各种机械,木尘飞扬,对人体的威胁和危害甚大。 吸入或接触木尘,常易发生过敏性疾病,如过敏性皮炎、过敏性哮喘等。 在电锯锯木或者砂纸打光木器时,木尘中游离二氧化硅占2％。木工长期吸入这种木尘,即能导致肺组织纤维病变,发生木尘性肺病。     

淡水养殖鱼类主要细菌性传染病快速诊断的研究——用SPA-CoA检测16株鱼类致病菌

用富含Ａ蛋白的金黄色葡萄球菌国际标准株（ｃｏｗａｎｌ），分别标记１６株淡水鱼类致病菌高兔血清，制备ＳＰＡ诊断液，建立了检测这１６株致病菌的ＳＰＡ－ＣｏＡ。将待检病料经分离培养１６～１８ｈ进行检测，３ｍｉｎ内可判定结果，比玻片凝集试验的敏感性高２５～５０倍。经交叉和重复性试验表明，其特异性强、重复性好、操作简便，快速，无需特殊仪器。适用于基层鱼场对淡水鱼类主要病原菌的快速鉴定和流行病调查。并将１６株致病菌用１１种药物作药敏试验，为防治上述致病菌引起的鱼病提供依据     

鲤鱼白细胞介素10基因组DNA克隆及序列分析

为获得鲤鱼白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)全长基因组序列,本研究利用鲤鱼IL-10全长cDNA序列(GenBank登录号:JX524550),通过在两端非编码区设计引物,以提取的鲤鱼脾脏基因组为模板,使用PCR方法成功获得鲤鱼IL-10全长基因组序列。鲤鱼IL-10基因组全长2176 bp,GenBank登录号为JX524551。将所获得的序列与其他物种IL-10基因组序列相比,结果发现都含有5个外显子,4个内含子,外显子在进化上相对保守,剪切位点都符合"gt......ag"规则;序列包含540 bp的开放阅读框,编码179个氨基酸,有2段典型的IL-10氨基酸信号基序。     

维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA的克隆及原核表达

本试验旨在利用大肠杆菌BL21（DE3）表达维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,通过免疫印迹反应初步鉴定重组蛋白的抗原性。根据GenBank公布的序列设计1对引物,经PCR扩增获得flaA基因的完整开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-30a,转入大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导、表达和纯化。SDS-PAGE结果显示重组目的蛋白在大肠杆菌成功表达,约在38 ku处可见清晰的表达产物,诱导产物大小与理论值相符。经Western blotting检测,结果显示表达的重组蛋白可与特异性血清抗体和His-tag抗体发生免疫反应。因此,本试验成功表达了维氏气单胞菌鞭毛蛋白flaA,为进一步研究其生物学功能及免疫佐剂作用奠定了基础。     

猪链球菌2型新毒力相关基因lin缺失菌株的构建

利用温度敏感型穿梭自杀质粒pSET4s,定点敲除猪链球菌2型野生型强毒株ZY458的lin基因,构建基因缺失突变菌株458△lin,利用家兔感染模型对ZY458及其突变菌株的生物学特性进行比较研究.家兔感染试验表明,接种ZY458菌株的家兔体质量下降,出现明显的临床症状,5只家兔4 d内全部死亡;而458△lin感染组家兔生长正常,未出现任何明显临床症状.结果表明,lin基因是猪链球菌2型新发现的一种毒力相关基因,在猪链球菌2型的致病过程中具有重要作用.     

Stx1A-LHRH融合毒素基因的构建及高效表达

通过PCR方法,从肠出血性大肠杆菌O157:H7的基因组DNA中扩增出Stx1A基因序列,并将之与编码LHRH的基因序列连接起来,构建编码Stx1A-LHRH的重组融合基因片段,并定向克隆到表达质粒pET28a的NcoⅠ和EcoRⅠ位点之间,构建重组表达质粒pET28a::stx1A-LHRH,将重组质粒转化到宿主菌BL21(DE3)中。对重组菌株用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE电泳检测结果表明重组菌株表达出了23700的目的融合蛋白Stx1A-LHRH,目的蛋白为包涵体表达,经薄层扫描分析表明表达量约占菌体总蛋白的37.6%。为了将来更好的进行目的蛋白的功能研究,本研究再将融合基因片段克隆到表达质粒pMAL-p2x中实现了重组蛋白的可溶性表达,表达的重组蛋白经amylose亲和层析柱一步纯化后纯度可达93.4%,为下一步进行重组蛋白的活性分析及其生物学作用研究奠定了基础。     

基于新媒体背景的高校思想政治教育创新

新媒体的出现对高校思想政治教育工作的影响颇为显著.高校思想政治教育工作要顺应当今时代的发展,利用新媒体技术进行不断创新,通过改变教学理念、教学方法,使高校思想政治教育工作得以健康、稳步发展.文章通过讨论新媒体时代对高校思想政治教育工作的影响,旨在发掘新媒体背景下高校思想政治教育工作的创新思想,因此,如何利用好"新媒体"这颗棋子,对于高校思想政治教育工作有着至关重要的作用.