应用MGB荧光探针技术确定猪KIT基因拷贝重复数

旨在建立一种简便、快速检测猪KIT基因拷贝重复数(CNVs)的方法并应用于未知样品的检测。在KIT外显子2中设计TaqMan-MGB探针和引物,建立荧光实时定量PCR检测KIT基因CNVs的方法。结果表明,TaqMan-MGB探针扩增KIT基因目的片段,不同DNA梯度浓度Ct值差异极显著(P<0.001),变异系数低(0.12%～0.26%);KIT与内标基因ESR的扩增效率相差只有2.4%;采用聚类分析推测了待测的50枚样品KIT的CNVs分别归属于2、3、4、5、6个拷贝。本研究建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测KIT基因CNVs的方法,具有简便、快速、特异性和稳定性好的特点,适合于普通实验室应用。     

牢牢守好安全生产“责任田”——国网河南沁阳市供电公司安全管理侧记

<正>国网河南沁阳市供电公树牢“两个至上”理念,把安全和人“两个不出事”作为做好安全生产工作的“金标准”“硬底线”,持续加强安全管理体系建设和设备管理,压实责任、补齐短板、管住风险、消除隐患,全面提升本质安全水平,确保公司安全生产、员工队伍持续稳定。2022年6月,公司组织9个供电所开展安全生产“五问五答”活动,通过学、问、思、辨、行,     

广西部分地区猪群中猪链球菌分离株的毒力基因检测及毒力测定

为了解广西部分地区(玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市)猪群中猪链球菌(Streptococcus suis,SS)毒力基因的流行情况和毒力水平,试验采用PCR方法检测分离到的201株(经鉴定猪链球菌2&1/2型24株,猪链球菌7型2株,猪链球菌9型15株,一共41株)猪链球菌的毒力基因orf2、sly、ef和mrp,并通过斑马鱼模型筛选毒力较强的菌株,测定菌株的半数致死剂量(LD₅₀)。结果表明：从广西部分地区分离的201株猪链球菌的4种毒力基因携带率从高到低依次为orf2(85.6%,172/201)>sly(55.2%,111/201)>ef(33.8%,68/201)>mrp(26.4%,53/201);6个市县主要流行的毒力基因不同,玉林市、大新县、那坡县、东兴市、靖西市和百色市分离的猪链球菌携带最多的毒力基因分别为orf2(100%)、orf2(89.2%)、orf2(91.5%)、ef(44.4%)、orf2(86.7%)、orf2(40.0%);经鉴定分型的41株猪链球菌中,有7株(17.1%,7/41)同时携...     

公共图书馆地方文献建设制度设计研究

地方文献是一个国家或地区宝贵的文化资源,也是公共图书馆馆藏资源最具特色的一个部分。以国家相关政策为依据,完善地方文献建设的制度设计,推动地方文献建设、管理和服务创新,对于保护、传承中华优秀文化,夯实国家文化安全基础,建设社会主义文化强国具有重要的现实意义。     

猪TNF-α高效表达及其多克隆抗体的制备

【目的】明确猪源肿瘤坏死因子α（TNF-α）多克隆抗体的特异性和反应性,并探索猪瘟病毒（CSFV）感染对PK-15细胞分泌TNF-α的影响,为揭示CSFV的致病机理打下基础。【方法】提取CSFV病料基因组RNA,通过RT-PCR扩增TNF-α基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-TNF-α并转化BL21感受态细胞诱导表达融合蛋白,经纯化和浓缩后免疫SPF级昆明小鼠制备TNF-α多克隆抗体;同时构建真核表达载体pcDNA3.0-TNF-α,分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞表达融合蛋白,通过Western blotting、ELISA和间接免疫荧光分析等方法检测TNF-α多克隆抗体效价、反应性及特异性。【结果】以原核表达载体pGEX-4T-1-TNF-α转化BL21感受态细胞,经IPTG诱导后能表达出约43 kD的融合蛋白,且主要以包涵体形式进行表达。以真核表达载体pcDNA3.0-TNF-α转染HEK-293T细胞可表达出25 kD的融合蛋白,主要在细胞质中表达,且均匀分布。制备获得的TNF-α多克隆抗体能与转染HEK-293T细胞表达的融合蛋白TNF-α及PK-15细胞的内源蛋白TNF-α发生良好反应,即具有较好的反应特异性,其抗体效价高达1∶8000。CSFV能刺激PK-15细胞分泌蛋白TNF-α上调表达,且TNF-α与其下游因子（TRAF1）的表达变化趋势基本一致,即二者间存在一定关联性。【结论】制备获得的TNF-α蛋白抗体具有效价高、反应性好及特异性强的特点,可用于检测CSFV感染后真核细胞中过表达的TNF-α水平。TNF-α可刺激TRAF1产生,参与TRAF1相关信号通路而发挥其生物学功能,CSFV感染PK-15细胞后TNF-α和TRAF1的表达变化趋势基本一致,说明CSFV能刺激TNF-α和TRAF1信号通路,使机体产生炎症反应。     

腐殖酸对Mycobacterium sp. NJS-1降解芘的影响

为研究腐殖酸(Humic acid,HA)对微生物降解环境中多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs)的影响,以四环芘为典型PAHs及HA为代表性溶解性有机质,选取芘高效降解菌Mycobacterium sp. NJS-1于有无HA条件下降解芘,应用傅里叶变换回旋离子共振质谱(FT-ICR-MS),激光共聚焦显微镜(CLSM),及光谱技术分析降解过程中芘的残留特征、中间产物信息及菌落的变化特征。结果显示：未添加HA,芘降解率为35.33%±3.27%;添加HA后,其降解率明显提高,达到88.33%±3.40%,表明HA对高效菌Mycobacterium sp. NJS-1降解芘有明显的促进作用。不添加HA,菌落Mycobacterium sp. NJS-1分泌的双加氧酶只进攻芘的C_4,5位点,而添加HA后增加了进攻芘的C_1,2位点,因此增加了芘的代谢途径。添加HA后,CLSM结果显示无死亡细胞出现而且团聚明显,表明HA能够提高细胞的存活率并促进微生物膜的形成。同时,在降解芘的过程中,产生了酪氨酸类蛋...     

重庆市植烟土壤有效态微量元素含量评价

对重庆市14个县(区)的334个植烟土壤样品的有效态微量元素Fe、Mn、Cu、Zn、B和Mo的含量状况和分布特征进行分析,结果表明,重庆市20%以上植烟土壤缺Mo、Zn,75%以上土壤缺B,有效铁、锰含量较丰富,有效铜极丰富。有效铁、锰、铜、锌含量均与土壤pH值呈负相关关系,有效钼含量与土壤pH值呈正相关关系,有效硼含量在pH<7.0时随pH的增加而增加,但在pH>7.0时含量下降。植烟土壤中有效铁和有效铜含量与有机质含量呈极显著正相关关系,而有效锰、硼和钼与有机质无明显相关性。     

艺术苹果的制作技术

根据不同品种苹果的成熟期，一般在采收前30-40天还未着色时进行，套袋的果实在去袋后制作，不宜太早也不能过迟。操作时间应选择在温暖晴朗的上午。     

飞行检查在兽医工作中的应用

正兽医工作涉及社会公共安全(重大动物疫病、人畜共患病等)、畜产品质量安全等与市民生活息息相关。力保兽医工作不出或少出问题,就要求我们依法行政,创新方法,依法监管。开展飞行检查,也是依法监管的一种有效形式。下面结合我们的实际工作,简要谈谈飞行检查在兽医工作中的应用。一、飞行检查在兽医工作中的应用意义飞行检查最早应用在体育比赛中对运动员兴奋剂的检查。也就是在非比赛期间进行的不事先通知的突击性兴奋剂抽检。在当前情况下,兽医工作特别是畜产品质量安全,如瘦肉精监管等成为高危环节。开展飞行检查,在被检查单位不知情的情况下,可以真实了解被监管单位安全监管情况,发现需要改进的问题,可以说是行动快、效果好的办法。