罗非鱼无乳链球菌的DIG-cfb原位杂交检测方法的建立

为建立一种批量检测罗非鱼无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)的快速敏感的原位杂交方法,本研究依据罗非鱼无乳链球菌cfb基因序列,选取其132-599 bp之间的序列为靶序列,采用PCR法制备了特异性地高辛标记的DNA探针DIG-cfb(Digoxigenin-labelled cfb probe,430 bp),同时对所制备的探针进行了测序鉴定及特异性和敏感性检测。结果表明,探针测序序列与实际Gen Bank序列相符,所制备的DIG-cfb探针与无乳链球菌基因组杂交呈阳性,与患病罗非鱼的其他细菌病原(嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、类志贺邻单胞菌以及海豚链球菌)基因组,以及与无乳链球菌亲缘关系较近的链球菌其他种(牛源链球菌、变异链球菌),斑点反应则均为阴性,d NTP对照组也为阴性,表明该方法特异性强;该方法可实现对批量样品的快速检测,具有较高的灵敏度,可检测无乳链球菌基因组的下限为1.5 ng/μL DNA。对采集于广东、海南及广西等不同地点的无乳链球菌样品,均可获得较明显的斑点反应圈,对患链球菌病的罗非鱼肝、脑组织基因组也可特异的检测出无乳链球菌。表明本研究建立的DIG-cfb原位杂交法对无乳链球菌基因组的检测具有快速、特异、敏感等特点,适合罗非鱼无乳链球菌的批量检测。     

三十烷醇对硝酸钙胁迫下番茄幼苗生长的影响

本试验探讨了硝酸钙[Ca(NO_3)_2]胁迫下三十烷醇(TA)对番茄幼苗生长的缓解效应。结果表明:与对照相比,Ca(NO_3)_2胁迫可导致番茄幼苗叶片丙二醛(MDA)含量和膜透性显著升高,其净光合速率、气孔导度、蒸腾速率、胞间CO_2浓度分别显著下降34.72%、55.66%、56.13%和23.68%,幼苗干物质积累减少51.95%,幼苗生长显著受抑;叶面喷施1 mg/L TA可降低Ca(NO_3)_2胁迫下番茄幼苗叶片MDA含量以及细胞膜透性,维持番茄幼苗良好的光合性能,从而促进其生长,有效缓解Ca(NO_3)_2胁迫造成的伤害。     

4种罗非鱼不同组织中HSP70基因对盐胁迫的响应

为了从分子水平评估莫桑比克罗非鱼、荷那龙罗非鱼及其正交子代(莫桑比克罗非鱼♀×荷那龙罗非鱼)和反交♂子代(荷那龙罗非鱼♀×莫桑比克罗非鱼)的耐盐性能,利♂用RT-PCR方法研究了盐胁迫下这4种罗非鱼不同组织中(鳃、肾、垂体和肌肉)热休克蛋白70(HSP70)基因的表达规律。结果表明:在盐度为22条件胁迫下4种罗非鱼各组织中HSP70表达水平总体呈现先增加后降低的规律,24 h时达最大值,48 h时下降至初始水平;盐度提高至35后HSP70的表达无显著变化。但不同种罗非鱼及不同组织之间也存在差异,反交子代鳃中HSP70在整个盐胁迫过程中都未上调表达;在盐度为22条件胁迫下,正反交子代肾中HSP70基因表达量比父母本肾中HSP70更早达到峰值;反交子代垂体中HSP70表达量在0~48 h内持续缓慢增加,48 h时达最大值;莫桑比克罗非鱼肌肉中HSP70基因在盐度22条件胁迫下表达量迅速升高,且维持较高水平直至盐度35条件胁迫之后。结果表明:HSP70表达水平的高低与罗非鱼的耐盐能力和应激程度密切相关,其中盐胁迫下肾中HSP70的表达规律与以上4种罗非鱼的耐盐能力之间相关性较强,可以作为评价这4种罗非鱼耐盐能力的潜在分子指标。     

底质重金属污染植物修复技术研究

近年来,我国工业发展的日益迅猛,使大量的重金属污染物被排放于水体中,这也使人类赖以生存的水资源受到了严重污染,给人类的生命健康带来了巨大威胁。改善水体的重金属污染问题,已经成为我国现代社会发展中迫切需要解决的问题。植物修复技术对于处理重金属污染物有着良好的效果,目前该技术正受到越来越多人的关注。为此,本文对底质重金属污染植物修复技术进行深入的研究,供相关人员参考。     

罗非鱼无乳链球菌LrrG-Sip融合基因原核表达载体的构建及表达

LrrG和表面免疫原性蛋白（Sip）是无乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的2种表面蛋白,具有良好的免疫原性。为获得罗非鱼无乳链球菌表面蛋白LrrG和Sip蛋白的融合蛋白,该试验采用基因拼接技术中的双酶切法分2步逐个将Sip和LrrG基因插入pColdⅡ载体中,构建原核表达载体pColdⅡ-LrrG-Sip。将成功构建的融合基因原核表达载体转化感受态细胞BL21（DE3）,进行诱导表达条件的优化。结果显示,15℃、IPTG 0.5 mmol·L-1诱导9 h,目的蛋白呈可溶状态的表达量最高。Western Blot检测结果显示LrrG-Sip融合蛋白大小与预测一致（162kDa）,说明成功构建了融合基因,为罗非鱼源无乳链球菌亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

罗非鱼催乳素Ⅰ基因的组织分布及盐胁迫对其表达的影响

采用同源克隆方法从橙色莫桑比克罗非鱼（Oreochromis mossambicus）、荷那龙罗非鱼（O.hornorum）及其正反交子代垂体中克隆了催乳素Ⅰ基因（PRLⅠ）,并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行了比对分析。结果显示,4种罗非鱼的PRLⅠ基因序列长度均为798 bp,ORF长639 bp,共编码212个氨基酸;橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼仅在31号位点存在一个氨基酸残基差异。用q PCR方法分析橙色莫桑比克罗非鱼和荷那龙罗非鱼PRLⅠ基因在不同组织或器官中的表达,结果表明罗非鱼PRLⅠ基因在垂体中的表达量最高,在其他组织中的表达量较低;盐胁迫后4种罗非鱼垂体中的PRLⅠmRNA水平均显著降低,而在其他组织中的表达变化不大。由此可知PRLⅠ基因主要在垂体表达,参与罗非鱼的渗透压调节。     

烟草重组自交系LM2和HM1花芽分化对低温敏感的差异性分析

本研究旨在发掘和鉴定花芽分化阶段对低温敏感性存在差异的烟草种质。以普通烟草重组自交系LM2和HM1为材料,于苗期进行10天低温和常温处理,随后移栽,再用体视显微镜观察其茎尖花芽分化动态。结果表明,LM2在苗期低温处理下花芽分化进程与常温对照一致,苗期低温对LM2的花芽分化进程无影响,在移栽后30天形成花序原基,35天进入花序分化起始阶段,40天分化出小花原基。而HM1在苗期低温处理下较常温存在差异,低温处理下移栽后第25天进入花芽分化始期,第30天进入花序原基形成期,第35天开始花器官分化发育;常温处理下第30天进入花芽分化始期,第35天进入花序原基形成期,第40天进入花器官发育阶段。证明LM2和HM1是一对对苗期低温敏感性存在差异的特异种质,可用于研究花芽分化响应苗期低温的机制,选育抗低温早花烟草品种。