胡杨PeSOS1对拟南芥盐诱导H2O2信号途径的调控

【目的】研究胡杨质膜Na+/H+逆向转运蛋白(SOS1)通过H2O2信号途径对盐胁迫的感知和适应作用。【方法】克隆胡杨质膜SOS1基因(PeSOS1),并将其转化到拟南芥中,比较野生型和转PeSOS1基因拟南芥在100mmol/L NaCl胁迫下的萌发率,根长,干质量,K+、Na+和Ca2+含量,活体植株根尖离子流(K+、Na+和H+)的流动情况,H2O2的产生和抗氧化酶活性的变化以及抑制剂对根尖离子流的影响,分析100mmol/L NaCl胁迫下异源表达PeSOS1基因拟南芥与野生型拟南芥耐盐性的差异。【结果】在NaCl胁迫下,转PeSOS1基因拟南芥株系的萌发率、根长和干质量明显高于野生型拟南芥;转PeSOS1基因拟南芥K+和Ca2+含量也高于野生型拟南芥,而Na+含量较野生型拟南芥低。100mmol/L NaCl处理后,转PeSOS1基因拟南芥中K+和Na+的平衡(K+/Na+值)与NaCl胁迫前相比下降幅度较小。转PeSOS1基因植株在NaCl胁迫下能更快地产生H2O2,并使抗氧化酶保持较高的活性。SOS1抑制剂阿米洛利(Amiloride)对NaCl胁迫下野生型和转基因拟南芥根尖离子流的变化有明显影响,用质膜NADPH氧化酶抑制剂DPI(抑制H2O2的产生)处理后,转PeSOS1基因拟南芥根尖K+内流减弱,Na+外流和H+内流增强,植株维持K+和Na+平衡的能力减弱。【结论】在拟南芥中异源表达PeSOS1基因可促进H2O2快速产生,维持了SOS1mRNA的稳定性,调控了K+和Na+平衡,并激活了抗氧化防御系统,因而显著提高了其耐盐性。     

广州市城乡居民健身现状及科学健身需求调查分析*

运用问卷调查法、访谈法等对广州市城乡居民的健身现状和科学健身需求等进行了调查,旨在为构建适合城乡基层大众的科学健身示范区提供参考依据。结果显示：大部分城乡居民参加体育健身,健身的主要场所为附近公园,小区空地等,体现就近原则,其主要的运动项目是散步、羽毛球、广场舞等,普遍认为科健身很有必要,但存在着缺乏专人指导、体质监测、运动风险预防等科学指导服务,且结果显示在科学健身服务需求上存在显著个体差异性。为此,依据调研得出的结果提出构建科学健身示范区,完善科学健身服务体系的建议,为广大城乡居民提供适宜的科学健身指导服务平台。     

山羊卵巢卵母细胞的体外成熟

将234枚卵丘细胞层完整致密的卵母细胞分别培养于含有10％FCS的TCM_(199)+hCG(20μg/mL)、TCM_(199)+hCG+17β—E_2(1μg/mL)和Ham＇s F_(12)+hCG+17β—E_2三种培养基中,培养24—26h,其成熟率分别为55.6％(15/27)、79.4％(104/131)和76.3％(58/76)。结果表明:TCM_(199)和Ham＇s F_(12)都是山羊卵母细胞体外成熟的合适培养基;雌激素的存在对其成熟是有益的(P<0.05)。     

包被方法对小鼠半胚冷冻效果的影响

将小鼠囊胚一分为二后,采用血清-琼脂法(A),透明带-琼脂法 (B)和双层透明带法(C)包被半胚。在RPE冷冻仪的控制下,对包被半胚进行冷冻。解冻后将360枚半胚进行体外培养。A,B,C三组的半胚发育率分别为69.2％(83/120),67.5％(81/120)和60％(72/120)。将12对在冷冻前用A法包被的解冻半胚移植于6只假孕母鼠,结果有3只妊娠,共产半胚鼠8只,其中3对为同卵双生。实验证明,本研究建立的血清-琼脂包被法操作简便,效果良好,便于应用,是一种较理想的包被半胚新方法。     

山羊半胚冷冻试验

 试验研究了诱发结晶温度、缓慢降温速度、冷冻速度、解冻温度和冷冻前短暂体外培养对半胚冷冻效果的影响，证明在下述条件下对琼脂包被半胚进行冷冻和解冻可显著提高山羊半胚冷冻效果：①在-7℃诱发结晶；②以约0.05℃/分的速度缓慢降温15分钟；③以0.3℃/分的速度降温至-35℃投入液氮；④在30-50℃的水浴中解冻；⑤在冷冻前对半胚进行2小时短暂体外培养。将按上述条件冷冻一解冻的12枚半胚移植于6只受体，结果有4只妊娠（66.7%），共产半胚羔5只（41.7%），其中包括1对异龄同卵双生羔和1对同龄同卵双生羔（33.3%）。     

蒙古绵羊胎儿卵巢发育的组织学研究

对37-99 d胎龄的蒙古绵羊胎儿卵巢进行组织学观察。结果表明,绵羊胎儿在37 d,可以从外观上分辨雌雄,雌性胎儿的性腺初步出现卵巢的组织学特征;37-51 d为卵原细胞的共质体期,卵原细胞数量增长加快;55~76 d卵巢中逐渐充满大量的合胞体样卵母细胞群;从58 d开始卵巢皮质深层出现少量的形态不典型的原始卵泡。胎龄73 d时,皮质深层出现真正的原始卵泡;81 d时皮质中层出现大量原始卵泡;99 d时皮质深层中可看到一些初级卵泡。与成体卵母细胞相比,胎儿时期的生殖细胞有活跃的增殖分裂特征;生殖细胞发育按卵原细胞增殖→卵母细胞分化→形成原始卵泡的步骤发育,在位置分布上由卵巢皮质外层逐渐向皮质里层分步发育。     

牛β-乳球蛋白基因5′调控成分的分离、克隆及序列分析

利用PCR方法克隆了牛β-乳球蛋白基因5′调控成分(1 449 bp),其中包括5′侧翼序列(645 bp),第一外显子及第一内含子(804 bp).PCR产物回收纯化后,克隆在pMD 18-T Vector的T位点.序列分析表明,该序列与牛β-乳球蛋白A型基因、牛β-乳球蛋白B型基因、山羊和绵羊β-乳球蛋白基因的同源性分别为98.55%,99.79%,90.70%和90.09%.计算机分析表明,此调控成分含有诸多调节因子结合位点或反应元件,其中包括视黄酸反应元件(RARE)、佛波酯反应元件(TRE)、乳腺特异性因子(MSBF)和核因子1(NF1)结合位点等,提示此调控成分可调控外源基因在乳腺细胞中高效表达,可用于构建乳腺特异性表达载体.     

牛胎儿皮肤成纤维细胞的分离培养及转染Ipr1基因

为了为核移植提供供体细胞,本研究构建了真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1,并研究了牛胎儿皮肤成纤维细胞的体外分离培养,进行了Ipr1基因转染.克隆Ipr1基因和SR-A启动子,并构建了巨噬细胞特异性真核表达载体.用组织块贴壁法分离培养牛胎儿皮肤成纤维细胞,在体外经传代、纯化后,用电穿孔法将真核表达载体PEGFP-SRA-Ipr1转染至经体外纯化的第4～10代牛胎儿成纤维细胞,24 h后观察荧光表达,48 h后加入600μg·mL-1 G418,筛选1周,300 p.g·mL-1持续筛选,然后挑选单克隆,继续扩大培养.对稳定转染的牛胎儿成纤维细胞进行PCR检测和核型分析.结果,转染24 h后有绿色荧光蛋白表达,并经G418筛选获得稳定转染PEGFP-SRA-Ipr1的牛胎儿成纤维细胞株,经PCR检测在大约1500 bp处有目的片段,经流式细胞仪分析转染细胞染色体倍型未发生变化,仍是二倍体.说明目的基因已经成功整合,同时保持了遗传稳定性.可以作为核移植进行转基因克隆牛研究.     

医院知识管理背景下的医院图书馆建设

探讨了医院知识管理背景下的医院图书馆建设思路,提出了争取医院管理层支持和挖掘整理医疗知识、营造良好文化氛围、建立稳定激励机制等实现医院知识管理的措施。     

bcl-2/EGFP融合基因真核表达质粒的构建

为深入研究bcl 2对细胞凋亡的调控机制和肿瘤发生发展的影响,应用基因重组手段,根据表达载体pEGFP C1上的多克隆位点和bcl 2基因序列设计了1对引物,对含有bcl 2基因的质粒pWB bcl进行了PCR扩增,得到了708bp的目的片断。将其克隆到pMD18 Tvector,筛选阳性克隆并测序,序列分析表明,其与原初序列同源性达99%。将bcl 2插入到载体启动子下游,与报告基因绿色荧光蛋白(EnhancerGreenFluorescentProtein,EGFP)融合,经限制性内切酶酶切和PCR鉴定,证明Bcl 2/EGFP真核表达质粒构建成功。