资源植物金荞麦高类黄酮含量愈伤系的获得及其cDNA文库的构建

用野生金荞麦无菌苗的茎和叶片作外植体,茎在MS添加2.0mg.L-16-BA和0.1mg.L-1NAA的固体培养基上,通过12d的诱导,可获得100%的诱导率;叶在MS添加1.0mg.L-16-BA和0.5mg.L-1NAA的固体培养基上诱导13d,可获得100%的诱导率。茎和叶分别在各自激素组合培养基上连续继代3次后,用目视法直接从大量的稳定愈伤组织中筛选获得4种不同次生代谢能力的细胞系:红色系(Stem1愈伤系)、褐色系(Stem2愈伤系)、浅黄色系(Leaf1愈伤系)和白色系(Leaf2愈伤系)。用分光光度法直接筛选出高类黄酮含量的红色系,其类黄酮含量为6.3804mg.g-1,是含量最低的白色系的3.5倍。用改良的CTAB法提取金荞麦高黄酮含量的红色系1～13d愈伤组织总RNA,用SMARTcDNALibraryConstructionKit构建cDNA文库。经测定原始文库滴度为1.5×106pfu.mL-1,扩增总文库滴度为7.0×109pfu.mL-1,重组率达到98%,插入片段在0.5kb到2kb之间,1kb以上的占66%。通过简并扩增的方式,从总文库中检测到了低峰度表达的R2R3Myb转录调控因子P基因的特异片段。各项指标都表明,已获得较高质量的cDNA文库。金荞麦高类黄酮含量愈伤系的获得及其cDNA文库的构建,不但为野生金荞麦的优异基因资源的保存和其类黄酮次生代谢相关基因的克隆和调控研究打下了的基础,也为最终实现药用次生代谢产物的规模化生产奠定了基础。     

蜡梅凝集素基因克隆及其对蚜虫、蛞蝓抗性分析

 【目的】克隆蜡梅凝集素基因并研究其抗蚜虫和抗蛞蝓活性,为植物抗虫基因工程提供理论依据和试验材料。【方法】通过随机挑选克隆测序的方法,从蜡梅花cDNA文库中克隆蜡梅凝集素基因,并构建植物表达载体,用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,并对转基因植株进行抗蚜和抗蛞蝓试验。【结果】从蜡梅花cDNA文库中克隆到了一个凝集素基因CpLEC(GenBank登录号：DQ352145),该基因全长871 bp, ORF框长558 bp, 编码185个氨基酸。该基因DNA分析表明其不含内含子。具有单子叶植物甘露糖凝集素基因家族的特征,有2个典型的甘露糖结合位点(QXDXNXVXY),和1个变异的可能结合位点(HXGXNXVXY)。Southern杂交表明,该基因在蜡梅基因组中为多拷贝。构建了35S启动子控制下的CpLEC基因的植物表达载体pBI121-CpLEC,利用根癌农杆菌介导法转化烟草获得抗卡那霉素的植株。PCR和半定量RT-PCR分析表明,CpLEC基因已经整合到植物基因组中并在转录水平上得到了有效表达。抗蚜虫鉴定表明,转基因植株及其离体叶片有效地抑制了蚜虫的群体增长率,平均抑制率分别为60%和68%。抗蛞蝓试验结果表明转基因植株有明显的抗蛞蝓活性,转基因烟草虫害指数为0.17,远低于非转基因烟草的虫害指数0.96。【结论】克隆获得了蜡梅凝集素基因CpLEC,通过转基因手段分析其抗蚜和抗蛞蝓活性,结果表明该基因对抗虫基因工程有重要的应用价值。     

基因枪法转化棉花胚性愈伤组织获得转基因植株

以川棉（Gossypium hirsumm，)239胚性愈伤组织为受体，用基因枪轰击法导入外源基因，获得了经Gus组织染色和PCR扩增鉴定的转基因植株。以gus基因瞬时表达蓝点数为评价指标，考察了影响基因枪转化棉花胚性愈伤组织的几个因素，结果表明：使用碱裂解法提取和PEG法纯化的质粒DNA，优于试剂盒大量提取的DNA；当轰击压力为10．7MPa时，轰击距离6或9cm较好；轰前经1-2周培养的愈伤组织较佳。实验还表明，玉米的Ubi启动子在棉花胚性愈伤组织中有启动活性。轰击后直接用100mg/L的卡那霉素进行筛选优于梯度筛选。     

基于FSC森林认证的大桂山林场森林经营方案编制

针对广西国有大桂山林场开展FSC森林认证的需要,探讨森林经营方案编制的原则、方法与主要内容,对编制过程中的主要技术难点提出了解决方案。     

水稻“旱育水促”育秧示范初报

铜仁地区望天田面积比重很大,干旱农业区等水打秧田,田等秧栽尤为普遍,以致延误农时,遭受伏早威胁,造成水稻产量不高,不稳。为了解决旱区水稻早播、壮秧问题,1987年我们在铜仁县茶店区大坪乡.鱼塘乡,黑岩乡、新场乡试行了“早育水促”育秧方法,试验示范面积39亩,86家农户旱育水促秧田的秧苗素质普遍比水育秧好,分蘖多,长势比水秧快,成秧率高,不烂秧,栽插的380多亩大田返青快(或无返青期).经省、地、县科技部门多次现场考察,认为早育水促育秧方法实验是成功的,有效地解     

金荞麦二氢黄酮醇4-还原酶基因（FdDFR1）的克隆及序列分析

 【目的】克隆金荞麦二氢黄酮醇4-还原酶基因（FdDFR1）,分析其序列特征。【方法】利用同源克隆的原理,采用RACE结合cDNA文库筛选的方法,从金荞麦cDNA文库中克隆DFR基因（FdDFR1）;对其序列进行生物信息学分析和Southern杂交检测。【结果】克隆到一个DFR蛋白基因（FdDFR1）,通过Southern杂交分析,推测在金荞麦基因组中DFR基因是1～2个基因的小家族,FdDFR1是单拷贝基因;FdDFR1基因编码一个长341个氨基酸的蛋白质,在N端存在一个NADP结合位点“VTGASGFVGSWLVMRLLEHGY”,还存在一个底物结合特异性决定的氨基酸基序“TVNVEEKQKPVYDETCWSDVDFCRRV”。【结论】首次从金荞麦中克隆到类黄酮代谢的中期关键酶基因（FdDFR1）,它具有DFR同源基因的典型特征。     

水培与土培栀子显微结构及生理指标的比较

当年生栀子枝条插入水中诱导出不定根,分别进行溶液静止培养和土壤培养.60d后测定生物量和相关生理指标,并对根、茎、叶横切面进行显微观察.结果表明,水培栀子生物量低于土培栀子的,含水量增加.与土培叶片较厚、较长相比,水培叶片变薄、变短、变宽;水培叶片表皮细胞大于土培叶片;与土培叶片柱状细胞整齐排列的栅栏组织相比,水培叶片缺乏柱状细胞,代之以球状小细胞无规则排列,且有较大的细胞间隙;水培叶片叶绿素b质量分数显著低于土培叶片的,表明水环境下植物对光能吸收有所下降.叶绿素a质量分数、过氧化物酶活性以及硝酸还原酶活性在2种条件培养叶片中差异不显著.水培栀子茎维管较土培栀子稍粗.2种培养条件下植物根系形态结构和生理指标差异显著:水培栀子白色或淡绿色根系比土培栀子褐色多毛的根系长1/3以上,有二级根和少量三级根,缺乏根毛;水培栀子根皮层细胞排列较疏松,部分细胞解体形成通气组织,而土培栀子根皮层细胞排列较致密,没有通气组织;水培栀子根系硝酸还原酶活性高于土培,呼吸强度则低于土培,表明栀子适应水生低氧环境所表现的分解代谢下降和氮代谢增强.     

关于定安县绿化宝岛大行动的浅论

绿化宝岛大行动对提高定安县森林覆盖率,加强生态环境保护,大力推进生态县及国际旅游岛建设,促进农民增收及提高土地利用率具有重大作用。绿化宝岛行动在取得明显成果的同时,也存在一些问题,针对相关问题提出解决措施。     

野生中药祁术人工栽培基质的筛选

在无菌条件下培养祁术种子和根状茎的芽,出苗后移植在松针土、有机土和混合土(有机土 蛭石 珍珠岩按照5:1:1)中生长。结果表明,混合土中种子苗叶片数和叶面积最大．分别比有机土中增加34．8％和50．3％,比松针土中增加47．8％和58．5:混合土中种子苗根系长比有机土中提高42．2％,比松针土中提高11．1％,根系直径分别提高29．2％和54．2％:混合土中种子苗鲜重为松针土的2倍、有机土的2．9倍。同样的趋势也表现在芽殖苗生长中:混合土中的芽殖苗叶片数和叶面积比松针土中分别增加了26．9％和40．1％,根系长和根系直径分别提高38．1％和64．3％．鲜重则达到松针土的3．6倍。因此,在有机土中加入少量蛭石和珍珠岩而制成的混合土是祁术人工栽培较为理想的基质。