超声辅助双水相体系提取水飞蓟中水飞蓟宾的工艺优选

为优化水飞蓟中水飞蓟宾的提取工艺,以乙醇体积分数、硫酸铵用量、料液比和超声时间为自变量,水飞蓟宾含量为因变量,采用星点设计-响应面法优选超声辅助双水相体系提取工艺参数。研究结果表明,最佳工艺条件为:乙醇体积分数为57%,硫酸铵的用量为0.26 g·m L~(-1),料液比为25 m L·g-1,超声时间为19 min,水飞蓟宾含量为10.18 mg·g-1。该工艺适用于水飞蓟中水飞蓟宾的提取,方法简单,预测性较好。     

PEDV nsp15基因真核表达载体的构建及蛋白的表达

猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）含有一种名为Nsp15的非结构蛋白，为了研究Nsp15蛋白在侵染宿主细胞时产生的作用，成功构建了PEDV Nsp15基因的真核表达载体。通过PCR技术扩增Nsp15基因片段，经双酶切连接到pCMV-Myc载体上，酶切鉴定及测序结果证实PEDV Nsp15基因成功克隆到pCMV-Myc载体中，并将重组质粒命名为p CMV-Myc-Nsp15。将重组质粒pCMV-Myc-Nsp15转染至IPEC-J2细胞中，利用Western Blot和间接免疫荧光技术检测pCMV-Myc-Nsp15的表达以及定位情况。结果显示，pCMV-Myc-Nsp15在IPEC-J2细胞中成功表达，并且在胞质胞核均匀分布。为进一步研究PEDV Nsp15蛋白的功能奠定基础。