全文获取类型
收费全文 | 1035篇 |
免费 | 41篇 |
国内免费 | 77篇 |
专业分类
林业 | 73篇 |
农学 | 66篇 |
基础科学 | 46篇 |
80篇 | |
综合类 | 525篇 |
农作物 | 57篇 |
水产渔业 | 25篇 |
畜牧兽医 | 139篇 |
园艺 | 97篇 |
植物保护 | 45篇 |
出版年
2024年 | 9篇 |
2023年 | 12篇 |
2022年 | 37篇 |
2021年 | 38篇 |
2020年 | 40篇 |
2019年 | 25篇 |
2018年 | 31篇 |
2017年 | 33篇 |
2016年 | 26篇 |
2015年 | 57篇 |
2014年 | 36篇 |
2013年 | 58篇 |
2012年 | 92篇 |
2011年 | 112篇 |
2010年 | 98篇 |
2009年 | 100篇 |
2008年 | 83篇 |
2007年 | 61篇 |
2006年 | 52篇 |
2005年 | 45篇 |
2004年 | 34篇 |
2003年 | 11篇 |
2002年 | 15篇 |
2001年 | 32篇 |
2000年 | 11篇 |
1999年 | 1篇 |
1994年 | 1篇 |
1992年 | 1篇 |
1982年 | 1篇 |
1979年 | 1篇 |
排序方式: 共有1153条查询结果,搜索用时 774 毫秒
991.
992.
为提高病毒的分离效率,本试验设计构建了能够表达犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)上皮细胞Nectin4受体的Vero细胞。为增加蛋白定位的准确性并易于鉴定,使用Igκ信号肽替换原有信号肽序列并添加了HA标签,在Nectin4 ORF后串联IRES-Puro序列并连入pCI-Neo真核表达载体,得到完整的转染载体pCI-N4。不同浓度嘌呤霉素孵育Vero细胞得到最小筛选浓度为6 μg/mL。pCI-N4重组质粒转染Vero细胞后使用6 μg/mL嘌呤霉素筛选,5~7 d后出现具有抗性的细胞簇,有限稀释法连续单克隆纯化3代后获得稳定表达的细胞系。构建细胞系传代至15代能检测到Nectin4 mRNA转录,Western blotting检测筛选细胞得到约60 ku目的蛋白表达,间接免疫荧光检测显示纯化细胞蛋白表达丰度高且表达均一,激光共聚焦观察Nectin4目的蛋白定位于细胞膜,说明筛选的Vero-Nectin4细胞系能够稳定表达,表达蛋白能够满足作为CDV受体的结构要求。临床CDV阳性病料经研磨滤菌处理后接种构建细胞系能够产生典型的合胞体细胞病变,Vero对照组盲传3次未有病变。分离毒株TICD50=10-5.9/0.1 mL。构建的Vero-Nectin4细胞系可用于CDV分离。 相似文献
993.
994.
【目的】制备高灵敏、高特异性的抗春雷霉素单克隆抗体,并对其免疫学特性进行鉴定。【方法】采用EDC法将KSM分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫原KSM-BSA和包被原KSM-OVA,经SDS-PAGE鉴定后,免疫Balb/c小鼠,免疫间隔4周,4次免疫后,利用间接ELISA和间接竞争ELISA测定其多抗血清效价和敏感性,选出效价高、敏感性好的小鼠进行细胞融合,经过多次亚克隆筛选出分泌高敏感的特异性抗KSM单克隆抗体的杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备抗KSM的单克隆抗体并对其免疫学特性进行鉴定。【结果】SDS-PAGE鉴定结果显示KSM-BSA成功偶联,间接ELISA检测显示免疫的6只小鼠血清效价均达1:104以上,其中3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50为73.9ng•mL-1,融合后筛选出两株杂交瘤细胞株1G7和2C8,亚型均为IgG1型,其细胞上清效价分别为1:5.12×103 和1:1.28×103,腹水效价分别为1:5.12×105和1:2.56×105,抗KSM的单克隆抗体对春雷霉素的IC50为8.902ng•mL-1,与其它竞争物的交叉率均小于0.03%。【结论】本试验成功合成了春雷霉素人工抗原,并制备了敏感性高、特异性好的单克隆抗体,为春雷霉素免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
995.
油菜筒喙象Licus Ochraceus(Boheman)属鞘翅目象虫科,俗称羊倌牛牛,主要危害油菜,其次是白菜、萝卜、芥菜、甘蓝等十字花科蔬菜。1986年在乌兰察布市油菜田调查时发现该虫,近两年,随着四子王、中旗、化德、后旗等地油菜种植面积的扩大,油菜筒喙象的危害也随之加重,一般被害率为 相似文献
996.
传染性喉气管炎病毒gB基因的主要免疫原片段在大肠杆菌中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
利用DNASIS等软件分析传染性喉气管炎病毒(ILTV)WG株的gB蛋白抗原性,筛选出一段抗原性较强的片段,该片段位于gB蛋白的403位至686位氨基酸残基之间。设计引物,引入双酶切位点EcoR Ⅰ,Sal Ⅰ,将目的片段t—gB插入原核表达载体pET30a(+),得到重组表达质粒pET-tgB并转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导后,表达分子量为37Ku的融合蛋白His—tgB,表达量占菌体蛋白的40.6%。Western blot分析表明,His—tgB具有免疫反应性。重组蛋白免疫兔之后可以产生针对ILTV gB的特异性抗体。 相似文献
997.
998.
999.
1000.
口蹄疫疫苗效检模型动物测毒及口蹄疫种毒冻干试验 总被引:4,自引:0,他引:4
应用豚鼠作为口蹄疫疫苗效检模型动物检测口蹄疫病毒对模型动物的病原性.用体重400 g左右的豚鼠,将猪O型口蹄疫灭活疫苗效检攻毒毒株ORMF8经后肢蹠部皮内注射途径进行测毒.测毒结果表明,口蹄疫病毒可引起豚鼠出现典型发病,并产生明显病变,ORMF8种毒对豚鼠的毒价可达105.5ID50/0.2 mL.将乳鼠中和试验用种毒OMⅡ按一定比例加入5%蔗糖脱脂牛奶稳定剂进行冷冻真空干燥试验,3次冻干试验结果表明,种毒冻干后病毒含量有一定程度的下降,但下降程度不显著. 相似文献