棘孢木霉葡聚糖酶基因Glu1的克隆及原核表达

从棘孢木霉(Trichoderma asperellum)ACCC30536中克隆获得一个葡聚糖酶基因Glu1,其cDNA全长984bp,编码327个氨基酸。该葡聚糖酶属于Glyco-hydro-12家族,推测为β-1,4-葡聚糖酶,与深绿木霉IMI 206040的Glycohydro-12家族蛋白(XP_013940397.1)有91%相似性,且亲缘关系较近。运用qRT-PCR技术检测9种诱导条件下棘孢木霉Glu1基因的表达水平,结果表明,Glu1基因能参与棘孢木霉对山新杨(Populus davidiana×P.alba var.pyramidlis)或杨树病原菌的识别。构建原核表达载体并获得重组蛋白rGlu1。酶活特性分析结果表明,该酶最适pH为4.5,最适温度为45℃,且酶活性随诱导时间延长逐渐升高,在5h达到稳定。     

糖原合成酶激酶3β对奶牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期的影响

本试验通过向纯化的奶牛乳腺上皮细胞中添加不同浓度（0（对照组）、10、20、40 mmol/L）的糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase 3β,GSK3β）特异性蛋白抑制剂氯化锂（Licl）,作用细胞24 h,研究其对奶牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期的影响,并利用qRT-PCR和Western blotting分别检测不同浓度Licl对奶牛乳腺上皮细胞中GSK3β、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1） mRNA水平及GSK3β、磷酸化GSK3β （p-GSK3β）、Cyclin D1蛋白水平表达的影响。结果显示,Licl能促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖活性,Licl抑制GSK3β后促进奶牛乳腺上皮细胞增殖的最佳浓度为20 mmol/L。与对照组相比,添加Licl后GSK3β蛋白表达受到抑制,p-GSK3β蛋白表达上调,同时提高了Cyclin D1蛋白表达。表明GSK3β对于奶牛乳腺上皮细胞增殖的能力是负调控因子,失活的GSK3β通过Cyclin D1途径促进细胞周期的进行。     

中西医结合治疗牛青杠叶中毒

牛青杠叶中毒是由于牛采食大量壳斗科栎属植物青杠树叶（特别是细嫩叶芽）,其有毒成分栎单宁及其降解产物吸收入血而引起的以便秘或下痢、水肿、胃肠炎及肾损伤为特征的中毒性疾病。多发于春季（特别是4月中下旬,青杠树发芽开花盛期）,尤其是春季干旱,牧草生长发芽迟缓年份,发病率较高。     

Pyruvate kinase is necessary for Brucella abortus full virulence in BALB/c mouse

Brucellosis, caused by a facultative intracellular pathogen Brucella, is one of the most prevalent zoonosis worldwide. Host infection relies on several uncanonical virulence factors. A recent research hotpot is the links between carbon metabolism and bacterial virulence. In this study, we found that a carbon metabolism-related pyruvate kinase (Pyk) encoded by pyk gene (locus tag BAB_RS24320) was associated with Brucella virulence. Determination of bacterial growth curves and resistance to environmental stress factors showed that Pyk plays an important role in B. abortus growth, especially under the conditions of nutrition deprivation, and resistance to oxidative stress. Additionally, cell infection assay showed that Pyk is necessary for B. abortus survival and evading fusion with lysosomes within RAW264.7 cells. Moreover, animal experiments exhibited that the Pyk deletion significantly reduced B. abortus virulence in a mouse infection model. Our results elucidated the role of the Pyk in B. abortus virulence and provided information for further investigation of Brucella virulence associated carbon metabolism.     

应用致敏SPA菌体提高CAV/CPV PCR检出率的研究

为消除粪便等病料中的PCR干扰物质 ,提高犬腺病毒与细小病毒 (CAV CPV)联合PCR检出率。根据免疫吸附的原理 ,应用CAV CPV高免血清致敏含A蛋白的金黄色葡萄球菌 ,制成致敏SPA菌体免疫吸附剂 ;以此免疫吸附提取粪便等病料中的CAV/CPV ,然后直接或经 3 5mol/LMgCl2 将所吸附病毒洗脱后再做PCR。结果 8份经电镜负染或HA/HI试验验证为阳性的粪便样品 ,如此处理后进行PCR检测 ,结果均为阳性 ;而直接取粪便离心后用上清进行PCR检测 ,结果均为阴性。表明该法可有效去除待检样品中的PCR干扰物质 ,提高PCR的检出率。     

五种抗球虫药对柔嫩艾美耳球虫病的预防效果对比试验

为了解聚醚类离子载体抗球虫药对柔嫩艾美耳球虫病的预防效果。我们选择了海南霉素(Hainanmycin)、马杜霉素(Maduramicin)、盐霉素(Salinomycin)、莫能霉素(Monensin)和拉沙霉素(Lasalosidum)5种抗球虫药，鸡在人工感染条件下，进行了预防对比试验。以成活率、相对增重率、抗球虫指数(ACI)等指标，进行综合判定。结果显示：海南霉素、马杜霉素、盐霉素用药组的ACI在160～180之间，分别为160．35、171．34和161．22。而莫能霉素和拉沙霉素用药组的ACI在160以下，分别为139．95和142．20。感染不用药组的ACI为100．67。说明海南霉素、马杜霉素、盐霉素对本鸡场鸡球虫株(E．tenella)具有中等抗球虫效力。而莫能霉素和拉沙霉素的抗球虫效果属于低效。     

应用单引物PCR指纹技术分析Vc-獭兔的分子遗传结构

采用1条小卫星引物M13(5’GAGGGTGGCGGTTCT3’)和2条微卫星引物(GTG)5、(GACA)4，对Vc—Ⅰ系、Vc—Ⅱ系獭兔、日本大耳白兔(JWR)和青紫蓝(QZL)4个品系各8只，总计32个个体的遗传结构进行了DNA指纹分析。结果，3条引物的扩增产物都呈现良好的多态性和稳定性；对每个品系混合DNA池进行分析，计算出了4个品系间及32个个体间的共有带率及遗传距离指数，通过聚类分析，得出各品系间和个体间欧式遗传距离，并绘制出4个品系间及各品系32个个体问的亲缘关系树状聚类图，从而初步建立了4个品系兔的SPAR指纹图谱。     

鲁西牛的染色体研究

研究了40头鲁西牛(♂37,♀3,2n=60)染色体的 G 带,R 带,C 带及Ag-NOR,着重分析了 y 染色体的形态及带型。在常规 Giemsa 染色的分裂相上,y染色体和小的常染色体形态相近。经常规—C 带连续染色,准确识别出 y 染色体之后测量了18条 y 染色体,臂比为3.19,属亚端着丝点染色体。y 染色体的着丝点区和短臂与常染色体的着丝点区和短臂在 G 带、C 带的带型上差别很大,表明构成它们 DNA的硷基成份有差别。统计的152个细胞的 Ag-NOR 中,平均每细胞 Ag-NOR 数为5.81±1.38,变化范围2—9。按染色体长度排列,NOR 位于2、3、4、11、22(或21)和28号常染色体末端。第22(或21)号染色体上存在 NOR 在其它牛种上尚未有过报道。     

半干旱区玉米行距调整增密对群体冠层结构及产量的影响

为增加玉米种植密度,构建不同的群体冠层结构,以玉米不同行距配置为基础,研究乳熟期玉米群体的光能利用情况,分析不同行距配置对冠层结构及产量、产量构成因素的影响。结果表明,玉米产量与群体消光系数达到显著相关,且为负相关。在吉林省半干旱区玉米宽窄行行距70-30 cm和宽窄行行距80-30 cm配置下玉米群体对光能资源的利用达到最佳,且有效提高玉米群体产量,增产分别达到8.06%和22.82%。