羊IL-1Ra基因全长cDNA克隆及生物信息学分析

试验旨在对羊白介素1受体颉颃因子（interleukin-1 receptor antagonist，IL-1Ra）基因进行全长cDNA克隆及生物学分析。根据布鲁氏菌感染羊白细胞层SSH cDNA文库中的IL-1Ra基因序列信息及已知核苷酸序列（GenBank登录号：KC425613.1）设计引物，利用RT-PCR结合RACE方法扩增并克隆IL-1Ra基因，对其进行序列及相关分子特性分析。结果表明，羊IL-1Ra基因全长为1 228 bp，可编码174个氨基酸，含有1个完整的IL-1保守结构域和1个IL-1Ra结构域（PHA02651结构域）。IL-1Ra分子质量为19 765.8 u，等电点（pI）为5.72，其分子式为C₈₈₅H₁₃₈₅N₂₃₅O₂₅₆S₁₁，且含有信号肽。二级结构分析显示，IL-1Ra分子存在较多的β折叠及受体结合位点，与三级结构预测结果一致，且与人/鼠IL-1Ra分子的空间结构相似度极高，达到90%以上。羊IL-1Ra有IL-1特有的三叶草结构，其酶结合结构域位于TYR⁴⁷至GLU⁶⁶之间。将羊IL-1Ra与牛、虎鲸、宽吻海豚、猪、家犬、人、鼠等14个物种进行蛋白质同源性比对，发现在各物种间存在5个高度同源的半胱氨酸位点。系统进化树分析发现，羊IL-1Ra基因全长cDNA所编码的氨基酸序列同山羊、牛单独形成一个分支。本研究结果为今后深入研究IL-1Ra基因的生物学功能奠定了基础。     

园林植物春季最佳观赏期调查研究

目前,由于缺乏准确的园林植物最佳观赏期的资料,导致优秀的规划设计方案难以落到实处,园林景点建成之后景观效果大打折扣。针对以上问题,作者采用实地调查观测的方法对园林植物春季最佳观赏期和最佳观赏顺序进行了研究。记录整理典型地点园林植物的最佳观赏期和最佳观赏顺序,为园林规划设计、植物配置和养护管理提供科学的参考依据。     

湖南粮食生产区域布局优化战略

在综合分析资源禀赋、技术条件、市场区位、生产规模、产业基础及布局指向等方面因素，兼顾相对集中连片原则，结合粮食生产现状、市场前景与产业发展趋势的基础上，提出了将湖南划分为“一区一圈两带”的粮食生产区域布局优化战略。对“一区一圈两带”4个片区的粮食生产特征进行了总结，并提出了各片区的功能定位和主攻方向。     

草果AtNCED基因克隆、表达和植物表达载体构建

9-顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, NCED)是ABA生物合成的限速酶。诸多研究表明NCED基因表达量的变化与ABA含量显著相关,在种子休眠过程中发挥重要作用。为探究草果AtNCED基因的序列特征和功能,本研究以草果(Amomum tsaoko Crevost et Lemarie)种子转录组为基础,采用RT-PCR技术克隆了一个AtNCED基因。该基因全长2 372 bp,包含一个1 830 bp的开放阅读框(open reading frame, ORF),编码610个氨基酸。生物信息学分析显示,AtNCED基因编码的蛋白在N-末端包含典型的叶绿体转运肽序列,在催化结构域含有4个高度保守的组氨酸残基。AtNCED蛋白与芭蕉科马来西亚蕉同源性较高,与其他单子叶植物处在同一进化分支。实时荧光定量PCR分析结果表明,AtNCED基因表达量随着层积时间的增加逐渐下降,该基因可能正向调控种子休眠,在草果种子休眠诱导与维持中发挥重要作用。进一步地,利用同源重组方法,成功构建了pBI121-AtNCED过表达载体,并转化至农杆菌EHA105。该研究结果为弄清ABA激素信号在种子休眠中的调控作用提供了帮助。     

Summer drought decreases Leymus chinensis productivity through constraining the bud,tiller and shoot production

Extreme drought events can directly decrease productivity in perennial grasslands. However, for rhizomatous perennial grasses it remains unknown how drought events influence the belowground bud bank which determines future productivity. Ninety‐day‐long drought events imposed on Leymus chinensis, a rhizomatous perennial grass, caused a 41% decrease in the aboveground biomass and a 28% decrease in belowground biomass. Aboveground biomass decreased due to decrease in both the parent and the daughter shoot biomass. The decreases in daughter shoot biomass were due to reductions in both the shoot number and each individual shoot weight. Most importantly, drought decreased the bud bank density by 56%. In addition, drought induced a bud allocation change that decreased by 41% the proportion of buds that developed into shoots and a 41% increase in the buds that developed into rhizomes. Above results were supported by our field experiment with watering treatments. Thus, a 90‐day‐long summer drought event decreases not only current productivity but also future productivity, because the drought reduces the absolute bud number. However, plasticity in plant development does partly compensate for this reduction in bud number by increasing bud development into rhizomes, which increases the relative allocation of buds into future shoots, at the cost of a decrease in current shoots.     

传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的原核表达及其初步应用

为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测均为阴性,表明所获得的纯化蛋白具有高度的特异性;对免疫了IBD灭活疫苗,IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡群进行抗体检测,结果均能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势。本研究表明利用该原核表达系统所表达的3个蛋白均具有良好的免疫反应活性,为IBDV特异性抗体的检测和新型亚单位疫苗的研发奠定基础。     

国内外奶牛疫病预警监测技术发展现状

为了解国内外奶牛疫病预警技术及其应用现状，归纳了奶牛疾病的预警要求，分析了国内外8种疫病预警技术的发展现状及其在奶牛养殖中存在的局限性。一是兽医巡检预警技术：该技术较为成熟，但不能满足大规模养殖牛场迅速、高效预警的需求。二是奶样体细胞数测定技术：可初步诊断隐性乳腺炎，但需要额外细菌培养和检测确诊。三是奶牛群体改良测定技术：以监测生产性能为主，仅可预警奶牛乳腺炎及酮病。四是计步器及发情、反刍项圈预警技术：同时具备发情与反刍监测功能，但仅适用于牛群的发情与反刍监测。五是大数据挖掘技术：在数据库基础上，利用各种模型或算法预测传染病的发生和发展，但预警效率受限。六是智能化体温连续远程监测及预警技术：可预警口蹄疫等重大传染病，但无法完全替代临床诊断，不能监测病原微生物。七是基于AI和群体热成像的奶牛行为分析技术：可以监视记录奶牛行为与温度特征，锁定病畜，但对发病初期无异常行为的牛只无效。八是生物气溶胶激光光谱测量技术：通过检测病原微生物种类和浓度，达到预警疫病的目的，目前主要用于军方监测人类重大疫病。未来的奶牛疫病预警技术需要进一步相互结合、取长补短，充分利用大数据、物联网等新兴技术进行奶牛重大疫病预警诊断。本文为预警监测技术的本地化发展提供了参考。     

化学发光免疫分析技术在动物疫病检测中的应用

化学发光免疫分析(chemiluminesecence immunoassay,CLIA)是用于疫病检测的一种免疫检测技术,是基于免疫反应原理,结合化学发光检测技术而建立的。与放射免疫分析、酶免疫分析等标记免疫技术相比,具有无放射性污染、灵敏度高和特异性强的特点,已被广泛应用于疫病流行病学调查、诊断、药物分析以及微生物检测等方面。本文简要介绍了CLIA技术的基本原理及发展,从细菌、病毒和寄生虫检测方面,综述了近年来该技术在动物疫病检测中的应用,提出该技术正向高特异性、高灵敏度、高通量、快速和自动化检测的方向发展,这为今后CLIA在动物疫病检测中的应用研究提供参考。