凡纳滨对虾氨氮急性胁迫应激敏感群体和耐受群体对WSSV敏感性的差异分析

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是世界范围内举足轻重的水产养殖品种,在普遍的高密度养殖活动及环境恶化的情况下,逆境胁迫是影响其养成率的主要因素之一,其中,高浓度氨氮胁迫是最普遍的毒理因子。由于对虾抗病性状的遗传力较低,且在受限于测试场地的低选择强度情况下,抗病选育的进展比较缓慢。而对虾的抗逆性具有较高的遗传力,且不具备传染性的特点使得其不受测试场地的限制。因此,本研究以氨氮急性胁迫应激敏感群体(SP)和耐受群体(TP)为实验材料,对其进行白斑综合征病毒(WSSV)敏感性差异分析,首次探索了通过提高对虾对逆境急性胁迫应激的耐受性,从而间接提高其抗病力的可能性。本研究每个群体设3个处理:高浓度氨氮胁迫下(10 mg/L)WSSV感染组,两群体分别命名为SPAV和TPAV;正常海水条件下(氨氮水平小于0.01 mg/L)WSSV感染组,分别命名为SPV和TPV;正常海水条件无WSSV感染组(空白对照组),分别命名为SPC和TPC。结果显示,SP群体(5 h)在WSSV感染后开始死亡的时间显著早于TP群体(16 h);从感染60 h后,SPAV组的死亡率呈直线上升趋势,到137 h时该组全部死亡,其累积死亡率显著高于SPV(70.42%)和TP群体的2个组TPAV(42.67%)和TPV(18.99%)(P0.05)。在144 h实验结束时,SPV的累积死亡率为73.67%,显著高于TP群体的2个组TPAV(46.15%)和TPV(18.99%)以及SP群体的对照组SPC(34.79%);此时,TPAV组的累积死亡率显著高于TPV和TPC组(P0.05),而TPV与TPC组间无显著差异。研究表明,逆境毒理因子(氨氮胁迫)会增加对虾对病原的敏感性,而且对氨氮急性胁迫应激耐受力高的群体对病毒的抵抗力也高。本研究为探索提高对虾抗病力而降低养殖过程中的死亡率提供了新的思路和途径。     

脱脂蚕蛹替代日粮中鱼粉对建鲤肠道菌群的影响

利用免培养的16S rDNA梯度凝胶电泳技术(DGGE)研究脱脂蚕蛹替代鱼粉对建鲤(Cyprinus carpio var. jian)肠道菌群的影响。6个饲养组分别饲喂6种等氮等能饲料, 分别为含10%鱼粉的基础饲料、3种替代饲料(脱脂蚕蛹替代鱼粉蛋白, 替代水平分别为25%、50%和75%)及2组分别在50%和75%替代基础上分别再添加0.6%和0.7%晶体赖氨酸的饲料 (分别记为DSP0、DSP25、DSP50、DSP50-Lys、DSP75、DSP75-Lys)。饲养结束后采集肠道样品, 分析建立指纹图谱, DSP0、DSP25、DSP50、DSP50-Lys、DSP75、DSP75-Lys组分别产生了19、15、11、12、8和12条可鉴别条带, 各组均存在优势种群条带。DSP0和其他各组(DSP25、DSP50、DSP50-Lys、DSP75、DSP75-Lys)的相似性指数为50.7%、50.6%、69.0%、42.4%、66.7%。对PCR-DGGE指纹图谱主要条带进一步回收、克隆和测序, 共得到19条序列, 将得到的序列在NCBI数据库中进行同源分析, 发现建鲤肠道菌群归为芽孢杆菌纲、螺旋体纲、β-变形菌纲、梭菌纲、放线菌纲、γ-变形菌纲、蓝藻纲、拟杆菌纲、梭杆菌纲等, 大部分为不可培养细菌。研究发现, 脱脂蚕蛹替代鱼粉对建鲤肠道菌群组成产生显著影响, 随着脱脂蚕蛹替代水平的提高, 肠道菌群多样性下降, 细菌种类从19种锐减至8种, 而饲料中补充赖氨酸可减弱这种影响, 本研究可为蚕蛹在鲤配合饲料中的开发应用提供参考资料。

     

鱼类组蛋白核苷酸的多态性及其在杀鱼爱德华氏菌感染中的作用

组蛋白是染色体核小体的重要组分,在调控染色质结构、基因转录、个体发育等不同生物学过程中起着重要作用。为了研究鱼类组蛋白基因是否存在核苷酸的多态性以及组蛋白核苷酸多态性是否会影响鱼类的抗病力,本实验以斑马鱼和草鱼为研究对象,通过PCR扩增克隆了组蛋白H2A的全长开放阅读框;利用过表达技术、菌落平板计数、感染存活分析以及荧光定量PCR技术,研究了斑马鱼和草鱼组蛋白H2A核苷酸多态性不同变异体在杀鱼爱德华氏菌感染中的作用。在本研究中,实验发现鱼类组蛋白H2A存在着丰富的核苷酸多态性。序列分析结果显示斑马鱼和草鱼组蛋白H2A核苷酸多态性的变异体核苷酸序列相似性为90%～100%;而两两H2A核苷酸多态性变异体氨基酸序列之间最多只有3个位点存在差异。通过体内和体外抗菌实验可知,斑马鱼和草鱼组蛋白H2A核苷酸的多态性显著影响H2A的抗菌活性。此外,筛选出的抗菌组蛋白H2A核苷酸多态性的变异体在斑马鱼体内的过表达,不仅具有免疫增强的作用,还能显著增强斑马鱼对杀鱼爱德华氏菌感染的抗病力。本研究为筛选具有抗病作用的组蛋白H2A免疫保护原奠定了重要基础。     

Should only females of giant freshwater prawn Macrobrachium rosenbergii be selected in genetic improvement programmes?

Sexual dimorphism is widely observed in almost all farmed aquatic animal species but giant freshwater pawn (GFP) is unique, with males characterized by three main morphotypes (blue claw, orange claw and small males) and females by different reproduction status (ovary, berried egg and already‐spawned females). There has been reported evidence that the effect of male morphotype may have masked genetic variation in growth‐related traits, as a result the heritability for male body weight was lower than that estimated in female. A pending question has arisen whether selection should be made in female only. To answer this question, we used an 8‐year data set from a long‐term selection programme (2008–2015) for high growth in this species comprising 106,756 individuals that were offspring of 515 sires and 810 dams. The body weight data of female and male GFP or of each morphotype was treated as a separate trait and a multi‐trait approach was used to estimate genetic correlations for homologous traits between sexes and between morphotypes. Our analysis showed that there were little differences in the heritability estimates between female and male. In female, mature ovary individual displayed higher heritability than berried egg and already‐spawned females. For male, the heritability for blue claw, orange claw and small males were 0.11, 0.06 and 0.00 respectively. Between‐sex genetic correlation was moderate (0.55 ± 0.11) for body weight, suggesting that the trait expressions in female and male may be genetically different. In female, the genetic correlations for body weight among three female types were close to one (0.91–0.94). In contrast, the genetic correlations for body weight between male morphotypes especially between blue claw or orange claw and small males were low (0.15–0.25). Furthermore, we estimated genetic gain as the difference in least square means (LSM) or estimated breeding values (EBV) between the selection line and control group. The genetic gain in body weight was smaller in females than in males. It is concluded that there is no need to run separate breeding programme for female and male GFP. A combined selection using both female and male data can achieve selection response for body weight as demonstrated in the present study.     

新疆叶尔羌河流域4种裂腹鱼多变量形态学对比分析

为明确叶尔羌河流域4种裂腹鱼的表型差异,实验整合传统形态学和框架分析法2个数据体系,利用多变量形态学统计分析法对叶尔羌河流域裂腹鱼类(4种,494尾,48组参数)开展分析。单因子方差分析结果显示,9个参数同时在4种裂腹鱼中存在显著差异,差异主要位于头部、前躯干部和后躯干部;主成分分析结果显示,重唇裂腹鱼与厚唇裂腹鱼形态数据在PC1轴上差异显著,主要反映头部特征;而框架数据结果显示,塔里木裂腹鱼和宽口裂腹鱼在第一主成分上差异较大,主要体现在后躯干部;2个数据体系逐步判别分析分别选取8个和6个主要参数建立判别公式,初始判别成功率分别为85.7%和75.7%,散点图组质心分离,样品重叠少;聚类分析结果显示,2个数据体系均分为2个分支,其中重唇裂腹鱼单独成一支,塔里木裂腹鱼与厚唇裂腹鱼在形态上距离较近,与宽口裂腹鱼次之。研究表明,2个数据体系中,形态数据表现较优于框架数据;叶尔羌河流域4种裂腹鱼外部形态存在显著差异,利用多元统计方法可以较好区分,但仍存在一定的重叠。     

谷氨酰胺对点带石斑鱼免疫细胞免疫力的影响

将从平均体质量400 g的点带石斑鱼中肾分离出的白细胞培养在添加0、0．5、1、2 mmol／L 谷氨酰胺的培养基中2、6、12、24 h后,测定白细胞的吞噬和呼吸爆发活力,结果发现,添加谷氨酰胺后白细胞的吞噬和呼吸爆发活力显著提高,随着培养时间的延长,吞噬和呼吸爆发活力进一步提高,最高值均在培养12 h后的1 mmol／L组。在培养12、24 h后测定了白细胞的增殖能力,发现培养12 h后,添加谷氨酰胺的各组增殖效果明显优于未添加谷氨酰胺组（对照组）（ P＜0．05）,但添加谷氨酰胺的各组之间差异不显著（P＞0．05）,最高值在1 mmol／L组;培养48 h后,除2 mmol／L组外,其他处理组的增殖效果均下降。白细胞对迟钝爱德华氏菌杀菌率变化趋势与吞噬活力相符,1、2 mmol／L 组杀菌率显著高于对照组（P＜0．05）,而0．5 mmol／L组与对照组之间差异不显著（P＞0．05）。试验结果表明,谷氨酰胺是石斑鱼有效的免疫增强剂,在培养基中添加1 mmol／L 谷氨酰胺培养12 h效果最佳。     

一体式膜生物反应器处理水产养殖废水膜污染特性研究

采用一体式膜生物反应器（ MBR）处理水产养殖废水,对处理过程中MBR膜污染的特征进行研究。首先,选取污泥浓度（ MLSS）、水力停留时间（ HRT）和曝气量这3个与膜污染有密切关系的变量,通过组合优化,研究操作条件对膜污染的影响,并确定最佳操作条件;其次,在最优化参数组合情况下,通过长期稳定运行,确定膜压增长特点;最后,通过膜阻力分布分析,得出造成膜污染的最主要原因。结果显示,对膜污染的贡献依次为：曝气量＞HRT＞MLSS;最佳的操作参数组合为曝气量437．5 L/h,HRT 4．25 h,MLSS 2．2 g/L;长期稳定运行过程中,发现膜压增长呈现出快速增长、平稳增长、急剧增长的3个阶段;通过膜阻力分布分析,得出由胞外聚合物（EPS）和微生物代谢产物（SMP）形成的吸附性膜孔阻塞是造成膜污染的最主要原因。因此,优化操作条件和减少混合液中EPS和SMP是减轻膜污染的重要手段。     

链球菌胁迫对罗非鱼生化指标及免疫功能的影响

利用腹腔注射链球菌Streptococcus sp.的方式制造链球菌胁迫模型,研究了链球菌胁迫对体质量(100±10)g吉富罗非鱼Oreochromis niloticus生化指标及免疫功能的影响。结果发现:罗非鱼感染链球菌后血清尿素氮、肌酐含量以及肝脏溶菌酶、谷丙转氨酶、黄嘌呤氧化酶活性均下降,与0h组差异显著,表明链球菌感染后罗非鱼体内的免疫水平降低,抗氧化水平降低,清除自由基的能力下降。     

小熊猫源大肠杆菌的药敏特性及致病性

为探明死亡圈养小熊猫(Ailurus fulgens)体内分离大肠杆菌(Escherichia coli,MT820501)的耐药情况及致病性,对分离菌株进行药敏特性分析,同时以小鼠感染实验检测其致病性。结果显示:该分离菌株对哌拉西林、头孢西丁、头孢曲松、头孢吡肟、美罗培南、哌拉西林-他唑巴坦、氨苄青霉素-舒巴坦、卡那霉素、丁胺卡那、新霉素、米诺环素、左氧氟沙星、呋喃唑酮、多黏菌素B敏感,对大部分β-内酰胺类药物及少部分氨基糖苷类药物耐药;小鼠感染实验结果显示,分离菌株半数致死量为8.42×10⁷cfu/m L,死亡小鼠体内分离出与小熊猫体内一致的菌株,病理表现为各实质脏器出现不同程度水肿、充血及炎性细胞浸润,与死亡小熊猫病理损伤特点高度相似,但不完全相同,这可能与感染方式、种属差异、耐受性等相关。     

中华鳖同工酶研究

采用垂直淀粉胶电泳对中华鳖脑、眼、心、肌、肝、肾和卵巢七种组织中的六种同工酶系统（ＬＤＨ、ＡＤＨ、ＩＤＨ、ＭＥ、Ｇ６ＰＤＨ、ＥＳＴ）进行研究，构建了中华鳖同工酶酶谱，并利用草鱼ＬＤＨ－Ｂ４抗体对中华鳖ＬＤＨ酶谱进行了免疫化学分析，确定了中华鳖ＬＤＨ同工酶酶谱和亚基组成，揭示了鱼类ＬＤＨ与爬行类ＬＤＨ在进化上的保守性