猪伪狂犬病病毒双基因缺失突变株(HB-98株)安全性、稳定性和免疫原性测定

对以伪狂犬病病毒鄂A株为亲本毒株构建的TK和gG双基因缺失突变株（PrV HB-98株）的增殖能力、安全性、毒力稳定性和免疫原性进行了测定。结果表明，PrV HB-98株在BHK-21细胞上的增殖滴度为10^7.0 TCID50／0．1mL以上，与亲本毒株相当，但高于Bartha株；与PrV鄂A株相比，病毒量为10^7.0TCID50的PrV HB-98株不引起BALB／c小鼠的死亡，毒力也低于Bartha株；将PrV HB-98株在PK-15细胞连续培养25代和在猪体内上连续继代5次，各代次突变株TK基因和LacZ基因能被稳定扩增，未出现毒力回复现象．表明该毒株具有良好的遗传稳定性；以10^5.0、10^6.0、10^7.0TCID50等3个不同剂量的PrV HB-98株接种于妊娠50～60d母猪和1日龄仔猪，母猪均能正常产仔．仔猪也未出现任何临床症状，证明该毒株有较好的安全性。另外，以10^5.0TCID50的PrV HB-98株接种于妊娠50～60d母猪和1日龄仔猪，分别于接种后28d和20d，用10^7.0TCID50 PrV鄂A强毒进行攻击．结果免疫猪都能抵抗强毒的攻击．获得保护，表明该毒株具有很强的免疫原性。综合上述结果表明，PrV HB-98株可以作为候选毒株．用于伪狂犬病基因工程疫苗的研制。     

环峡南苜蓿种子生产技术研究

对影响环峡南苜蓿种子产量的磷肥、钾肥、浇水和地膜条件4个因素进行正交组合试验,结果表明: 磷肥、钾肥、磷钾肥互作对种子产量的影响较大,其次为地膜条件、磷肥浇水互作,浇水的影响最小。试验结果和生产成本综合考虑,最适宜的处理组合为:钙镁磷450 kg/hm2+硫酸钾150 kg/hm2+不铺地膜+不浇水。     

我国草地鼠害防治研究进展

严重的草原鼠害已成为引发草原退化、沙化、水土流失的重要因素,并威胁我国畜牧业的可持续发展、草原生物多样性保护、草原生态环境建设以及人们身体健康。防治鼠害常用的方法主要有化学防治、生物防治、不育剂应用及物理机械灭鼠。文章分析了各种防治方法的利弊,认为中草药植物源灭鼠剂在鼠害的综合治理上具有广阔的应用前景,应进一步研究并进行其产品的开发和研制。     

Study on Genetic Diversity and System Evolution of mtDNA D-Loop Region in Xianglushan Chicken

This study was aimed to analyze the genetic diversity and phylogenetic evolution in Xianglushan chicken.The full-length sequences of mitochondrial DNA D-Loop (mtDNA D-Loop) region of 121 Xianglushan chickens were analyzed by PCR amplification combined with bidirectional sequencing,and the composition,variation and maternal origin of mtDNA D-Loop region were discussed.The results showed that the total length of mtDNA D-Loop region in Xianglushan chicken was 1 231-1 233 bp.The contents of A,T,C and G were 26.62%,33.55%,26.49% and 13.34%,respectively.The content of T was the highest,the content of G was the lowest,and the content of A+T was significantly higher than that of G+C,it indicated that region might have certain base hobbies.Analysis of 121 full-length sequences were found to coexist in 11 haplotypes and 26 mutation sites,of which 2 were single polymorphic information sites,24 were simple information sites,4 bases were inserted and 2 bases were missing.The genetic diversity analysis results showed that the haplotype diversity was 0.814,the nucleotide diversity was 0.00447,the average nucleic acid difference was 5.494,which indicated that the genetic diversity of Xianglushan chicken was relatively rich,the effect of preservation was better,which had a certain breeding space.Tajima's D was 0.39378 and the test results were not significant (P>0.10),in line with neutral mutations.The cluster analysis results showed that Xianglushan chicken and Gallus gallus gathered as one,indicating that Xianglushan chicken originated from Gallus gallus, and there were 4 branches inside the branch,indicating that Xianglushan chicken had many matrilineal origins.The results could provide some reference data for the protection and exploitation of pheasant germplasm resources in Xianglushan chicken.     

不同叶面肥对紫花苜蓿生长、产草量和品质的影响及效益比较

喷施叶面肥是提高苜蓿产草量和品质的有效措施之一。为探明不同叶面肥成分对紫花苜蓿（Medicago sativa L.）生长、产草量和品质的影响,并筛选紫花苜蓿优质高产的叶面施肥方案,本试验以生长第2年的‘东农1号’紫花苜蓿（Medicago sativa L.‘Dongnong No.1’）为材料,在春季返青期一次性土壤施肥基础上,于刈割前20天分别喷施苜蓿专用叶面肥（自主研制,专利申请号：201810124670.2）、0.3%尿素、0.5%磷酸二氢钾、0.3%尿素+0.5%磷酸二氢钾、0.3%尿素+0.1%硫酸亚铁+0.05%钼酸铵、0.5%磷酸二氢钾+0.1%硫酸亚铁+0.05%钼酸铵,0.3%尿素+0.5%磷酸二氢钾+0.1%硫酸亚铁+0.05%钼酸铵这7种叶面肥（分别简称叶面肥A,B,C,D,E,F,G）,以喷施清水为对照,每年刈割3茬,观测不同叶面肥对‘东农1号’紫花苜蓿高度、茎叶比、产草量和营养品质的影响,并进行经济效益比较分析。结果表明：喷施叶面肥均可显著提高紫花苜蓿垂直高度、产草量和粗蛋白含量;其中叶面肥G处理下,全年总干草产量达14 595.81 kg·hm^-2,比对照提高17.70%;平均粗蛋白含量为25.43%,比对照提高3.12%。叶面肥A处理纯增经济效益和产投比分别达2 414.57元·hm^-2和2.63,是叶面肥G处理的2.65倍和8.77倍。经过综合比较分析,在寒地黑土农区喷施紫花苜蓿专用叶面肥（A处理）相对投入较少,产出较多,综合效益最高。     

基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体

基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。     

板蓝根多糖对缺乳仔鼠免疫器官发育及T淋巴细胞亚群的影响

试验应用流式细胞术检测缺乳仔鼠CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞含量来研究添加不同剂量的板蓝根多糖(RIP)对缺乳仔鼠免疫器官及T淋巴细胞亚群的影响。结果表明:①RIP可增加缺乳仔鼠胸腺指数和脾脏指数。对胸腺指数和脾脏指数效果最好的RIP剂量随日龄增大而减小。②RIP可以增加缺乳仔鼠外周血CD3⁺、 CD4⁺ 、CD8⁺ T淋巴细胞数量。7~28日龄时初乳组(A组)、缺乳+中RIP组(C组)和缺乳+高RIP组(D组)3组CD3⁺ T淋巴细胞含量与缺乳组(B组)相比差异显著(P<0.05)。7~21日龄时初乳组(A组)、缺乳+中RIP组(C组)和缺乳+高RIP组(D组)3组CD4⁺ T淋巴细胞含量与缺乳组(B组)相比差异显著(P<0.05)。各处理组CD3⁺、 CD4⁺、CD8⁺ T淋巴细胞含量及CD4⁺/CD8⁺比值随着日龄的增加有所下降。适宜剂量的RIP可促进缺乳仔鼠免疫器官发育,提高T淋巴细胞亚群的水平。     

桑叶茶“散茶发花”工艺研究

以桑叶毛茶和黑毛茶的混合茶坯为原料,人工接种冠突散囊菌经固体发酵成功试制了散茯茶,优化了散茶发花的工艺条件,通过单因素试验和L9(34)正交试验得到最优发酵条件:茶坯含水量为28%,汽蒸时间为8min,渥堆时间为1.5h,接种量为0.1%,在此条件下加工的桑叶茯茶金花颗粒饱满茂盛且分布均匀,茶汤橙黄明亮,滋味醇和无青涩味,水浸出物为27.89%。     

盐碱复合胁迫对白茎盐生草种子萌发的影响

为了解盐碱胁迫对种子萌发的影响,本研究以白茎盐生草(Halogeton arachnoideus)为研究对象,采用室内模拟试验,以盐分种类和盐浓度为控制因素,按照NaCl?Na2SO4?NaHCO3?Na2CO3的顺序,以A(1?1?0?0)、B(1?2?1?0)、C(1?9?9?1)、D(1?1?1?1)、E(9?1...     

马γ-干扰素成熟蛋白基因在大肠埃希氏茵中表达及其多克隆抗体制备

采用RT-PCR从ConA刺激的马外周血单核细胞（PBMC）中扩增获得含信号肽的马γ-干扰素（Equine interferon-γ，EIFN-γ）基因，将其克隆至载体pCR2．1-TOPO中。通过PCR方法从重组质粒（pCR-EIFN-γ）中扩增马干扰素成熟蛋白（MatureEIFN-γ，mEIFN-γ）基因，并将其亚克隆至原核表达载体pET-28a（＋）。重组子经测序鉴定正确后转化至大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导，对其产物进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定，将纯化后的表达产物免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。结果表明，mEIFN-γ基因全长为441b口，含一个开放阅读框，编码146个氨基酸的成熟蛋白；对其表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，重组蛋白相对分子量约为18Ku，且具有免疫反应活性。mEIFN-γ基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下，采用Ni^＋亲和层析纯化方法均可获得高纯度的重组马γ-干扰素制备的多克隆抗体，为建立马γ-干扰素检测方法、监测机体免疫状态和研究机体免疫机制奠定了基础。