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旨在分析猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)在悬浮培养的猪肾细胞LLC-PK1上的增殖特性,为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供细胞材料。采用逐步降血清法优化LLC-PK1细胞悬浮培养工艺;利用有限稀释法筛选PDCoV适应性细胞株;利用间接免疫荧光法鉴定PDCoV对LLC-PK1细胞的感染性;分别对PDCoV接种LLC-PK1悬浮细胞的初始密度、MOI、收毒时间、TPCK胰酶浓度等参数进行优化,确定最佳悬浮培养条件。成功筛选出可高效增殖PDCoV的单克隆悬浮细胞株LLC-PK1Sa,且利用其增殖的PDCoV可特异性的感染LLC-PK1细胞;PDCoV按MOI为10-3接种于密度为2×106 cells·mL-1的LLC-PK1Sa细胞,当TPCK胰酶终浓度达到7.5 μg·mL-1时,接毒后48 h收获的病毒液滴度最高。本研究首次实现了PDCoV在LLC-PK1Sa悬浮细胞中的高效增殖,并对悬浮培养条件进行了初步优化,可为PDCoV灭活疫苗的规模化生产提供理论参考。 相似文献
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为研究酵母多糖(YP)对环磷酰胺(CTX)所致免疫损伤大鼠的拮抗作用,本实验将80只雄性SD大鼠随机分为YP(50 mg/kg)+CTX组、YP(100 mg/kg)+CTX组、YP(200 mg/kg)+CTX组、CTX对照组和正常对照组。YP+CTX组按剂量灌胃并称重,CTX和正常对照组则灌胃给予等量生理盐水,连续给药10 d;在第8 d、9 d,除正常对照组外,其余4组腹腔注射CTX 100 mg/kg。第11 d采血及对相关的免疫器官组织进行检测。结果显示,YP(100 mg/kg)组平均日增重和饲料报酬比正常对照组显著增加(p<0.05);胸腺指数,血清中IgA、IgG、表皮生长因子(EGF)、碱性磷酸酶(AKP)含量及空肠SIgA水平显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)高于CTX对照组;结肠壁中前列腺素E2(PGE2)含量与CTX对照组相比显著降低(p<0.05)。以上结果表明,YP能提高大鼠的生长性能;YP对CTX所致免疫损伤具有一定的拮抗保护作用,其中100 mg/kg剂量的YP效果最为显著。 相似文献
94.
为研究冬虫夏草采挖区与非采挖区的土壤生态化学计量学特征,本研究以青海省7个地区冬虫夏草生长地土壤样本为试验材料,分别采用重铬酸钾-外加热法、凯氏定氮法、碱熔法、碳酸氢钠浸提-比色法、酸溶法、1 mol·L-1乙酸铵浸提-火焰光度计法、碱解-扩散法、邻菲啰啉比色法、火焰原子吸收分光光度法对土壤样本的养分与理化指标进行了测定,并对其化学计量特征进行了分析。结果表明,除XH(青海省海南藏族自治州兴海县)地区采挖区与非采挖区在全氮含量上存在显著性差异(P<0.05),其他各地区采挖区与非采挖区在土壤各指标含量上均无显著性差异,不同地区采挖区与非采挖区C∶N的范围是18.24~32.79,C∶P是155.53~562.78,N∶P是4.85~24.00,C∶K是4.51~11.52,K∶N是2.55~7.17,K∶P是31.44~81.86;采挖区与非采挖区的C∶P与N∶P之间均具有极显著相关性(P<0.01)。因此,本研究发现采挖冬虫夏草对其生长环境的土壤化学性质无显著性影响,为冬虫夏草采挖对生态环境的影响评估提供数据支撑。 相似文献
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1饲料企业构筑质量管理体系长效机制的必要性1.1进一步全面宣贯ISO9000族标准的需要ISO9000族标准是系列标准,其结构互为补充。企业通过了质量管理体系的认证,仅仅证实企业具有提供"满足顾客要求"和"适用法律法规要求"产品的基本能力。从管理角度来看,这种质量管理体系尚不够完整,从提升企业总体业绩与 相似文献
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根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲株的基因序列,设计U1和U6两套PCR引物和荧光探针,建立了扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR用于检测美洲型PRRSV。用10倍倍比稀释的质粒DNA、cDNA、RNA进行扩增以检测其灵敏度,同时对猪瘟(HCV)、猪伪狂犬(PRV)等7种病毒进行特异性检测。结果显示建立的扩增U1和U6基因的荧光RT-PCR可用于检测PRRSV,其灵敏度为10个拷贝的质粒DNA,而与HCV等非PRRSV无交叉反应。本研究所建立的荧光RT-PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于PRRSV样品的检测。 相似文献
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猪链球菌2型人源分离株EF单克隆抗体的制备与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
为了解猪链球菌2型(SS2)菌株毒力相关因子的致病机理,建立高效的免疫学检测方法,将SS2胞外因子(EF)抗原性强的区域通过基因克隆、原核表达,经亲和层析纯化的EF蛋白免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫细鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了4株分泌抗EF蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系2G1、5H7、3H4和1F2。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶128~1∶512,诱生腹水的抗体效价为1∶104~1∶105。4株McAb腹水的Western blot鉴定表明McAb能特异性的识别EF。以2G1单抗腹水与和EF多克隆抗血清建立的夹心ELISA可特异地检测EF。 相似文献
100.
以德系、法系安哥拉、沪2071 系和GSAB兔为育种素材,通过合成杂交方式建立选育基础群,实施半开放式核心群世代选育,经过5 个世代育成粗毛型兔新品系。新品系平均年产毛量1704g,兔毛品质优良,粗毛率20.11% ,料毛比40.33∶1,成年体重5.5kg,体长55cm ,胸围40cm ,平均窝产仔7.36只,育成成活率92% 。适应性和抗病力较强,体质健壮,外貌整齐,遗传性稳定 相似文献