空肠弯曲菌肠毒素间接ELISA检测法的建立

通过对ＣＥ３３种检测方法的比较研究,证实间接ＥＬＩＳＡ是检测ＣＥ最为敏感,简便,快速的方法,在２４ｈ内即可得到结果。ＣＨＯ法也较敏感,但要求较高。大鼠肠袢试验虽然操作繁杂,却是传统的肠毒素检测法,结果更具说服力。     

猪旋毛虫检验方法探析

随着人民生活水平的提高,人们对肉品卫生安全和身体健康甚为关注。猪的旋毛虫病是一种人畜共患寄生虫病,严重危害人畜健康。旋毛虫病的宿主是猪和犬,旋毛虫猪肉是人旋毛虫的重要传染来源。旋毛虫猪肉快速检验是防止旋毛虫病既经济又可靠的办法,现介绍几种检验方法,供参考。1旋毛虫镜检法旋毛虫镜检法,是一种检验肉品中有无旋毛虫的传统方法,具体操作方法是:从膈肌或其它规定部位取4～5g肉样,从每一肉样剪取12块如麦粒大小的肉,压在两玻片之间,目镜用旋毛虫镜检器或显微镜将视野投放到屏幕上观察。2旋毛虫的“目检法”“目检法”即用眼睛观察…     

海南黑山羊MBL2基因的转录调控元件的筛选与分析

甘露聚糖结合凝集素C(mannose binding lectin C,MBL-C)是C型(Ca²⁺依赖型)凝集素超家族的成员,其作为一种急性期蛋白,具有抗细菌感染的功能,参与机体的天然免疫反应。为鉴定出结合在MBL2基因启动子区(1 009 bp)的重要转录因子,探寻该基因的转录调控机制,本研究选取海南黑山羊MBL2基因的启动子序列1 009 bp,采用DNA重组技术克隆6个转录起始位点上游1 009 bp的启动子5'端侧翼缺失序列,克隆片段经双酶切后连接至pGL3-Basic载体。重组质粒转染至293T细胞中,结合双荧光素酶活性检测系统筛选MBL2基因的核心启动子区域。通过在线生物信息学软件预测山羊MBL2基因的核心启动子区域的转录因子结合位点,利用点突变技术构建转录因子结合位点缺失的载体,转染293T细胞后结合双荧光素酶活性检测系统分析其转录活性。结果表明,海南黑山羊MBL2基因的核心启动子区域位于转录起始位点上游-304~-45 bp范围内,在线软件分析该区域存在RELA、NF-κB2、MZF1等3种转录因子结合位点。双荧光素酶报告分析结果表明,RELA和NF-κB2的结合位点缺失后均使山羊MBL2基因的转录活性极显著下降(P < 0.01)。结果提示,RELA和NF-κB2对山羊MBL2基因的转录活性可能具有重要的正调控作用。该研究为进一步探寻海南黑山羊MBL2基因的功能提供理论依据。     

安格斯肉牛与牦牛杂交及其效果研究

［目的］为了进一步优化牦牛肉品质,有效缩短牦牛养殖周期,提高其受胎率和犊牛成活率。［方法］本研究进行了安格斯肉牛与牦牛杂交试验,,利用安格斯肉牛冷冻精液,对251头经产母牦牛进行了人工授精。［结果］人工授精后,分别于2013年产犊42头,成活率66.67%;2014年产犊51头,成活率95.7%;2015年产犊67头,成活率91.04%。［结论］牦牛膘情较好时期,受胎率可达83.33%,接近于奶牛人工授精的受胎率,达到了青海省牦牛人工授精的较高水平。     

犬布鲁氏菌菌壳疫苗的制备简

菌壳技术是一种新型的灭活疫苗制备方法,通过非变性的灭活方式保存细菌表面多个抗原表位,所制备的菌壳可作为预防细菌病的理想疫苗。本试验从噬菌体PhiX174 DNA钓取裂解E基因,连接至温控原核表达载体pBV220,通过PCR在所构建的pBV220+E上扩增出蛋白裂解部件（protein lysis component,PLC）,该部件包含阻遏蛋白cI857、溶菌E基因及终止序列rrnbT1T2,然后将其克隆至广宿主表达载体pBBR1MCS-2中,最终将构建的广宿主裂解质粒pBBR+PLC电转入犬布鲁氏菌RM6/66中。试验结果表明,经42 ℃诱导后,广宿主裂解质粒对犬布鲁氏菌RM6/66的裂解率达100%,成功制备了犬布鲁氏菌RM6/66菌壳疫苗。本试验通过菌壳技术制备的犬布鲁氏菌疫苗对预防宠物犬布鲁氏菌病起到重要作用,同时也对人兽布鲁氏菌疫苗的研制提供新策略。     

Passive protection against Salmonella enterica serovar Enteritidis infection from maternally derived antibodies of hens vaccinated with a ghost vaccine

This study evaluated maternal immunity against Salmonella enterica serovar Enteritidis acquired through the egg yolk. Two-hundred 19-week-old specific pathogen free (SPF) broiler breeders which were randomly divided into two groups of equal size were injected with S. Enteritidis ghosts (5 × 10⁹ colony forming units in 0.1 ml per hen) and phosphate-buffered saline (PBS, 0.01 mol⋅l⁻¹, pH 7.4) twice, respectively, with an interval of 2 weeks. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was applied to detect specific antibodies against S. Enteritidis. S. Enteritidis-specific antibody levels in the vaccinated group increased over time and were significantly higher than those of the control group on days 28 (P < 0.001) and 35 (P < 0.001) post-vaccination. Ten 7-day-old chicks from hens that were vaccinated with a S. Enteritidis ghost vaccine were challenged at 14 days of age with 5 × 10⁹ CFU of S. Enteritidis DH091 (homologous to the vaccine strain), 8/10 (80%) chicks from vaccinated hens survived, whereas 3/10 (30%) chicks from unvaccinated hens survived. The chicks acquired high levels of serum antibodies against S. Enteritidis. These results reveal that maternal antibodies in chicks acquired from vaccinated hens through eggs can confer a significant protection against S. Enteritidis infection.     

外源褪黑素对鹿茸软骨细胞生长发育的影响

试验旨在探讨褪黑素对体外培养的鹿茸软骨细胞增殖、周期及凋亡的影响。利用甲苯胺蓝、茜素红S、阿利新蓝染色鉴定软骨细胞,采用外源添加褪黑素的方法,用不同浓度（0、400、800、1 200、1 600和2 000 pg/mL）、不同时间（24、48和72 h）处理鹿茸软骨细胞,CCK-8法检测细胞增殖。选取800 pg/mL褪黑素处理软骨细胞24 h,利用流式细胞仪检测细胞周期的分布及细胞凋亡情况,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中睾酮含量。结果显示,经不同浓度的褪黑素处理鹿茸软骨细胞不同时间后,800 pg/mL褪黑素处理鹿茸软骨细胞24 h细胞活力极显著增加（P<0.01）。软骨细胞经褪黑素处理后,与对照组相比,褪黑素处理组细胞G1期比例显著降低（P<0.05）;G2期比例极显著增加（P<0.01）,细胞被阻滞在G2期;褪黑素处理组细胞早期凋亡率无显著变化（P>0.05）,晚期凋亡率显著下降（P<0.05）;ELISA检测睾酮分泌水平均显著上升（P<0.05）。综上,外源添加800 pg/mL褪黑素可以促进鹿茸软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的晚期凋亡,促进睾酮的分泌;以上结果可为阐明褪黑素参与鹿茸生长发育机制提供参考。     

兔卵母细胞体外成熟培养影响因素的研究

试验旨在探讨卵丘细胞包裹层数、表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)对兔卵母细胞体外成熟培养的影响。分别采用切割法和针刺挤压法取母兔卵巢表面的卵丘卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes,COCS),将获取的COCS在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、30ng/mL)及不同浓度的谷胱甘肽(0μmol/mL、0.5μmol/mL、1.0μmol/mL、1.5μmol/mL、2.0μmol/mL)进行体外成熟培养并观察第一极体排出率。结果表明:①手术刀切割法和针刺挤压法平均回收卵母细胞率分别为(22.83、39.29)枚,针刺挤压法显著高于手术刀切割法(P<0.05)。②3层以上卵丘细胞包裹的卵母细胞体外成熟率为81.27%,显著高于1~3层卵丘细胞包裹的体外成熟率63.75%和裸卵细胞体外成熟率23.45%(P<0.05)。③添加20ng/mL的EGF对兔卵母细胞体外成熟培养后成熟率为82.14%,效果最好,且显著高于对照组10ng/mL和30ng/mL EGF组(P<0.05)。④添加不同浓度的谷胱甘肽可以促进和提高兔卵母细胞体外成熟率,其中添加1.0μmol/mL的谷胱甘肽时,卵母细胞成熟率为71.44%,与添加1.5μmol/mL组的相比差异不显著(P>0.05),但显著高于其他组(P<0.05)。结论为添加20ng/mL的EGF和1.0μmol/mL谷胱甘肽,对用针刺挤压法获得3层以上卵丘细胞包裹的兔卵母细胞体外培养效果最佳。     

三种微肥在串叶松香草优质高产中应用的研究

对B、Zn和Mn三种微肥在串叶松香草优质高产中的应用进行了为期三年的研究。研究结果表明:B、Zn和Mn三种微肥在一定浓度下能够促进串叶松香草的光合作用,提高其饲草产量,其中600×10-6的B肥能够使叶面积指数(LAI)和叶绿素含量分别增加7.03%和增加7.23%,牧草产量增加8.42%;400×10-6的Mn肥能够使LAI和牧草产量分别增加6.25%和6.07%;Zn肥的有效浓度为400×10-6,可使茎粗增加8.96%,茎叶比增加5.03%。三种微肥对株高没有明显影响。