不同产地银耳抗氧化活性物质及抗氧化能力分析

本项研究对不同产地的银耳活性成分含量进行比较,并利用多种抗氧化测定方法,测定不同银耳抗氧化能力,分析不同抗氧化测定方法之间的相关性以及活性成分含量与抗氧化测定方法之间的相关性。结果表明,不同产地银耳活性成分含量存在显著差异(P0.05),其中TF5的多糖得率、总酚含量和黄酮含量最高,TF1蛋白质含量最高;对不同自由基的清除能力大小依次为DPPH羟基超氧阴离子自由基,其中TF1对(·OH)和DPPH自由基的清除作用最大,TF2的还原力最大,TF3对(O-2)自由基的清除作用最大;对不同抗氧化测定方法之间的相关性评价,羟基自由基和DPPH自由基的清除作用之间存在较大相关性(R=0.954),其余抗氧化测定方法之间没有明显的相关性,表明不能用一种抗氧化测定方法代替另一种测定方法;活性成分含量与自由基清除之间有一定相关性,但差异很大;抗氧化能力可能不是由单一活性成分决定,而是多种活性成分的共同作用的结果。     

一株瑞士乳杆菌的分离鉴定及其产VB_(12)的影响因素研究

对市售的乳酸饮品的乳酸菌进行了分离纯化,得到菌株HYWZ-6,结合16S r RNA基因序列分析,确定为瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus),并以温度、Na Cl、胆盐、p H及柠檬酸三钠作为影响因素,对其产VB_(12)进行研究,并利用酶联免疫分析法对该菌在不同因素条件下培养100 h后产VB_(12)的含量进行测定。结果表明,HYWZ-6菌株在不同条件下产VB_(12)的差异性较大,35℃VB_(12)的含量最高,25℃最低,35℃时含量比25℃时高出175.2%;Na Cl质量分数与VB_(12)的含量呈反比,Na Cl质量分数为1%时VB_(12)含量最高,7%时最低,相差224.4%;胆盐质量分数为0.1%时VB_(12)含量达到最高;p H为4时VB_(12)含量最高,在p H为7时VB_(12)含量最低,前者是后者的5.8倍;柠檬酸三钠质量分数为2.5%时VB_(12)的产量最高,比最低产量高出143.2%。     

广谱持久抗病基因Pi40在云南高原粳稻的应用

对持有主效广谱抗瘟基因Pi40的单基因系4163与其它11份单基因鉴别品系进行自然条件下稻瘟病抗性鉴定.结果表明,4163在云南省粳稻区的稻瘟病重病区均表现抗病,即在保山、宜良、玉溪叶瘟田间抗性分别为0级、0级、4级,穗瘟田间抗性为3级.同时,利用49份有代表性的云南稻瘟病单胞菌株,通过室内接种抗性鉴定方法建立了Pi40对云南稻瘟病的抗谱,并与另外25份抗稻瘟病单基因系进行室内接种同步鉴定比较.结果表明,Pi40对49份云南地方稻瘟病菌株的抗病频率为87.8％,表现出较广的抗谱,可以作为云南高原粳稻抗病育种的新抗源利用.     

黄河鲇幼鱼对饲料中钙、磷的需要量

为探明黄河鲇Silurus lanzhouensis幼鱼对饲料钙、磷的适宜需要量,选取总能、钙、粗蛋白质、非植酸磷、赖氨酸5个因素作为试验因素,每个因素各设6个水平,钙为0.50%~1.34%,非植酸磷为0.50%~1.00%,采用均匀设计法U*6(64)设计6种配合饲料,饲喂体质量为(170±5)g的黄河鲇幼鱼,分别记为A、B、C、D、E、F组,饲养时间为60 d。试验结束后,以增重率、特定生长率、肌肉和肝脏RNA/DNA值、粗蛋白质离体消化率为试验指标,采用偏最小二乘法建立回归方程,通过降维分析和优化求解,分析研究黄河鲇幼鱼对饲料中钙和非植酸磷的适宜需要量。结果表明:C组(钙0.56%、非植酸磷0.60%)试验鱼的增重率、特定生长率和肌肉RNA/DNA最高,分别为84.83%、1.02%和2.98,肠、肝、胃中粗蛋白质离体消化率也达到最大值,分别为67.53%、66.76%、51.52%;随着饲料中钙、非植酸磷含量的增加,鱼体增重率、特定生长率、肌肉RNA/DNA值和粗蛋白质离体消化率均呈现先上升后下降的趋势。研究表明,饲料中钙和非植酸磷含量对黄河鲇幼鱼生长、蛋白质合成能力、饲料粗蛋白质离体消化率影响明显,黄河鲇幼鱼对饲料中钙的适宜需要量为0.54%,对非植酸磷的适宜需要量为0.50%~0.53%。     

斑点叉尾(鱼回)LEAP2成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性

LEAP-2 (Liver expressed antimicrobial peptide-2) 抗菌肽是一类主要在动物肝脏中表达的小分子肽,其生物学活性来自成熟肽区域,它们在动物的免疫系统中发挥了重要作用。本文以斑点叉尾鮰 (Ictalurus punctatus) LEAP-2成熟肽(mLEAP2)为研究对象,拟通过建立毕赤酵母表达系统,实现mLEAP2在毕赤酵母中的重组DNA表达,以期获得具生物学活性的重组体mLEAP2 (rmLEAP2),为进一步研究其功能和扩大制备奠定基础。首先以既有的斑点叉尾鮰mLEAP2的原核表达载体“pET-32a-mLEAP2”为模板,通过PCR扩增,获得5’端含EcoRⅠ酶切位点、3’端含NotⅠ酶切位点及6×his标签的LEAP-2成熟肽基因mLEAP2,然后将其与真核表达载体pPIC9K连接,构建重组表达载体“pPIC9K-mLEAP2”;电转化至毕赤酵母GS115细胞中,经不同浓度G418和选择性培养基筛选,获得高拷贝酵母转化子;在29 ℃、250 r/m条件下,以0.5%的甲醇对其诱导表达120 h;采用固化金属离子亲和层析(IMAC)对表达产物进行纯化,通过MALDI-TOF/TOF质谱对纯化产物的结构进行分析和鉴定。结果表明：表达的重组体蛋白为预期的目的蛋白rmLEAP2,其表达量约2.2 mg/L;另一方面,抑菌实验结果显示rmLEAP2具有明显的抑制枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活性。     

Insertion site of FLAG on foot-and-mouth disease virus VP1 G-H loop affects immunogenicity of FLAG

The G-H loop of the foot-and-mouth disease virus(FMDV) virion contains certain dominant immunogenic epitopes, as well as an arginine-glycine-aspartic acid(RGD) motif that is recognized by cell surface integrin receptors. Previous experiments indicate that it is critical to maintain virus structural integrity when inserting an exogenous epitope into the surface of an FMDV structural protein. However, it remains to be determined how factors such as different insertion positions affect interactions among the virus, cells and host immune system. In this study, one infectious c DNA clone of the swine FMDV Cathay topotype strain O/CHA/90 was constructed. Then, a FLAG marker(DYKDDDDK) was inserted upstream(–4) or downstream(+10) of the RGD motif to generate tagged viruses vFLAG-O/CHA/90 or vO/CHA/90-FLAG, investigating the possibility of expressing foreign antigen and effect on its immunogenicity. Compared to the parental virus, both tagged viruses exhibited similar plaque phenotypes, suckling mouse pathogenicity and antigenicity. Additionally, the FLAGtag insertion position did not change the use of integrin-mediated cell entry by the tagged viruses. Interestingly, both tagged vaccines protected pigs against challenge with the parental virus O/CHA/90 and induced immune responses against FMDV in BALB/c mice and pigs, but only vaccination with vFLAG-O/CHA/90 generated anti-FLAG antibodies. Our findings demonstrated that two sites(RGD–4 and RGD+10) tolerated the insertion of an exogenous gene in the swine FMDV O/CHA/90 strain. However, only RGD–4 was a novel and appropriate inserting site which could tolerate exogenous FLAG. The resultant tagged virus is a promising candidate for FMD vaccine which can be differentiating infected from vaccinated animals(DIVA).     

不同繁殖状态下绵羊繁殖相关组织中CHGA基因的表达分析

为探究绵羊繁殖相关组织中CHGA基因在不同繁殖状态下的表达差异,选取不同光照条件下的成年苏尼特母羊（季节性发情品种）及不同繁殖时期的小尾寒羊母羊（常年发情品种）的下丘脑等10种组织,利用qPCR技术分析不同繁殖状态下各组织中CHGA基因的相对表达量。结果表明,CHGA基因在2个绵羊品种的不同组织中广泛表达且脑部组织中该基因的表达量高于其他组织;不同光照条件下苏尼特羊各组织中CHGA表达差异均不显著（P＞0.05）;黄体期小尾寒羊垂体中CHGA表达量显著高于卵泡期（P＜0.05）,子宫体中该基因的表达量极显著高于卵泡期（P＜0.01）。以上结果暗示CHGA基因可能参与小尾寒羊不同繁殖时期垂体和子宫生理变化的调控。     

盐生植物盐角草同化枝不定芽的诱导与增殖

【目的】建立并确定盐生植物盐角草(Salicornia europaea L)同化枝不定芽诱导与增殖的试验体系和培养基。【方法】以MS为基本培养基,通过附加不同浓度激素(TDZ、NAA、6-BA)及盐(NaCl)进行盐角草不定芽的诱导,筛选诱导盐角草不定芽的最适激素配比及盐浓度;后期通过对细胞分裂素TDZ浓度(0、1.6、1.8、2.0和2.5 mg/L)的摸索,确定盐穗木不定芽增殖的最适浓度。【结果】盐角草同化枝在含有200 mM NaCl的MS₃(2.0 mg/L TDZ、0.1 mg/L NAA)培养基中不定芽诱导率达32.4%,显著高于(P<0.05)其余组,为最适诱芽培养基。再生的不定芽在含有2.0 mg/LTDZ的培养基中经过30~40 d的培养,不定芽增殖率可达619.5%。盐角草不定芽诱导及增殖最适培养基均为:MS+2.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA+200 mM NaCl。【结论】一定浓度的TDZ、NAA及NaCl组合,可通过直接器官发生途径有效诱导盐角草同化枝不定芽的产生和增殖。     

两种方法从林麝粪便提取DNA效率及分析

采集林麝DNA样本获得快捷、有效的DNA提取方法是其分子标记,良种遗传选育的分子基础。以林麝粪便为研究对象,用常规和改良的方法比较提取林麝粪便DNA的效率,两种方法分别设为对照组和试验组。采集林麝粪便后分别在空气暴露0、2、4、6d。用对照组和试验组两种方法提取粪便DNA,以林麝GAPDH为目的基因,用PCR方法扩增样本。琼脂糖凝胶电泳分离DNA目的条带,以空气暴露0d的粪便DNA条带光密度值为参考,2、4、6d粪便DNA条带光密度值与0d进行比较获得相对光密度值。结果发现,随着时间延长,林麝粪便逐渐失去光泽,表面粗糙;对照组和试验组两种方法均能有效提取林麝DNA。试验组2d和4d与0d相比较DNA水平显著上升,6d与0d没有显著差异;对照组仅在2d提取的DNA水平上升,而4d和6d显著下降到0d的水平。以对照组为参照,两组各时间点相比,试验组获得的DNA水平显著高于对照组。研究结果表明,试验组提取DNA的方法可显著提高林麝粪便DNA的获得率。     

改进Canny算法在再制造视觉检测中的应用

为了提高再制造生产过程中对废旧零件检测分类的效率,本文将视觉检测应用于再制造生产过程,提出把图像的边缘信息作为零件分类的重要依据。通过分析传统Canny算子存在的缺陷,本文引进了开关型中值滤波,弥补了高斯滤波抑制噪声能力差的缺点;并用OTSU自适应求取阈值,避免了传统Canny算法中对阈值的人工调整。实验结果表明,该方法能够获得清晰完整的边缘轮廓,可以用于再制造生产过程中对零件的检测分类,并有较高的效率。