一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药基因的研究

提取一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药菌株E.coliBJ96147的质粒DNA进行转化,转化子能稳定表达其全部抗生素抗性,表明E.coliBJ96147对卡那霉素（K）、庆大霉（GM）、链霉素（S）、氯霉素（C）、四环素（Tc)、复方新诺明等六种抗生素的抗性由耐药性R质粒介导;根据已发表的编码卡那霉素抗性的磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因的核苷酸序列,设计合成了一对引物P1和P2,用PVR技术检测其钝化酶基因,结果该引物扩增出了预期的578bp大小的PCR产物,淫限制性内切酶HindⅢ进行酶切分析,发现产物被切成二条带,与预出现的389bp及189bp二条带相符,说明PCR可用于检测猪源大肠埃希氏菌卡霉那素磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因。     

草业科学专业本科生“科研助理”培养模式探索——以甘肃农业大学为例

人才培养是高校的根本使命,新时期不断创新办学理念,探索新型培养模式,对全面实施素质教育,提高教育质量至关重要。根据甘肃农业大学本科生"科研助理"培养模式,结合草业科学专业的特点,分析了"科研助理"培养模式及其宗旨,介绍了几种"科研助理"培养模式的常用方法,阐述了各种方法的优缺点和应用情况,还就其运行机制和实施情况等进行了说明,最后探讨了存在的一些问题及其保障措施。旨在加强本科生"科研助理"培养模式的培养效果,为高校草业科学专业与其他专业人才培养提供参考。     

LncRNA-NONMMUT131476.1对PHEV复制的影响及其靶基因Nlrc5的验证

长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是长达200个以上核苷酸的转录本,在不同组织和发育阶段的表达具有特异性。为筛选与猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus,PHEV)致小鼠神经系统损失相关的LncRNA,本试验对正常小鼠和PHEV感染小鼠大脑皮质进行高通量测序,获得PHEV感染过程中LncRNA差异表达数据。经过生物学分析,发现与PHEV感染相关的LncRNA-NONMMUT131476.1位于小鼠第8号染色体Herpud1(homocysteine-inducible,endoplasmic reticulum stress-inducible,ubiquitin-like domain member 1)和Nlrc5(NLR family,CARD domain containing 5)两基因间,由5个外显子构成。利用qPCR方法对感染PHEV的小鼠脑组织和N2a细胞中LncRNA-NONMMUT131476.1及Nlrc5基因的表达量进行检测,发现LncRNA-NONMMUT131476.1和Nlrc5基因的表达量均呈上调。研究发现干扰LncRNA-NONMMUT131476.1后Nlrc5表达被抑制,表明Nlrc5可能为其潜在靶基因。同时,沉默LncRNA-NONMMUT131476.1表达能促进病毒复制增殖,表明该LncRNA可能作为调节因子,参与调控PHEV感染过程,但其具体机制有待于进一步研究。本试验为PHEV感染发病机制和PHEV防制研究提供新思路。     

传染性法氏囊病病毒（IBDV）人工感染SPF鸡的病理学观察

取３２０只３０～４０Ｈ龄ＳＰＦ鸡，经滴鼻和点眼接种传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），接种后２４～７２ｈ出现死亡，病死率５１．２５％，死亡鸡剖检变化主要为法氏囊肿胀、出血，甚至呈紫葡萄样，脾脏肿大、出血，骨骼肌出血，腺胃肌胃交界处出血。病理组织学变化，呈现以法氏囊淋巴滤泡内髓质淋巴细胞坏死为主的特征性病变，并可在巨噬细胞浆内发现病毒包涵体。电镜观察，在法氏囊内淋巴细胞、异染性细胞、巨噬细胞浆内，见大量晶格状排列的病毒粒子和包涵体，表明ＩＢＤＶ首先损害法氏囊淋巴滤泡髓质内未成熟的Ｂ淋巴细胞，病毒在淋巴细胞内以包涵体方式增殖。     

羊布鲁菌16MOmp25真核表达载体的构建

利用聚合酶链式反应（PCR）,以羊布鲁菌16M基因组为模板克隆Omp25基因,设计含有EcoRI和xhoI酶切位点的引物序列,定向克隆到真核表达载体pCMV-HA上,构建真核表达重组质粒pCMV-HA～Omp25。经测序及双酶切验证正确,证明成功构建了pCMV-HA—Omp25真核表达质粒,为表达纯化外膜蛋白Omp25,研究其功能奠定基础。     

高职兽医专业实践教学体系的构建

对高职兽医专业实践性教学体系中存在的问题及模型构建的目的进行了介绍.以期使学生的动手能力和解决生产实践中存在问题的能力以及组织生产能力得到提高,同时把加强实践教学环节作为提高教学质量的重要手段进行研究和探索,从而在强化实践教学环节中逐步建立起适合高职兽医专业的实践教学体系.     

The 16MΔvjbR as an ideal live attenuated vaccine candidate for differentiation between Brucella vaccination and infection

Brucellosis brings great economic burdens for developing countries. Live attenuated vaccines are the most efficient means for prevention and control of animal Brucellosis. However, the difficulties of differentiating of infection from vaccine immunization, which is essential for eradication programs, limit their applications. Therefore, the development of a vaccine that could differentiate infection from immunization will overcome the limitations and get extensive application. VjbR is a quorum sensing regulator involving in Brucella's intracellular survival. The vjbR∷Tn5 mutants have been proven effective against wild type strain challenge, implying its possibility of use in vaccine candidate development. To further evaluate this candidate gene, in the present study, the antigenicity of purified recombinant VjbR protein was analyzed. Antibodies to Brucella melitensis VjbR could be detected in sera from patients and animals with brucellosis but not in control ones, implying the potential use of this protein as a diagnostic antigen. Then a vjbR mutant of B. melitensis 16M was constructed by replacing the vjbR with kanamycin gene. The mutant showed reduced survival in macrophage and mice. Vaccination of BALB/c mice with 16MΔvjbR conferred significant protective immunity against B. melitensis strain 16M challenges, being equivalent to which induced by the license vaccine Rev.1. The vjbR deletion mutant elicited an anti-Brucella-specific immunoglobulin G response and induced the secretion of gamma interferon and interleukin-10. The most importance is that, the use of vjbR mutants as vaccines in association with diagnostic tests based on the VjbR antigen would allow the serological differentiation between infected and vaccinated animals. These results suggest that 16MΔvjbR is an ideal live attenuated vaccine candidate against B. melitensis and deserves further evaluation for vaccine development.     

牛结核γ-干扰素ELISA检测方法在检疫工作中的应用

为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。     

酸奶及乳饮料中大肠杆菌变化趋势研究

[目的]为了探讨实际生产过程中酸奶和乳饮料感染大肠杆菌（E.coli）后的变化情况及影响因素。[方法]将大肠杆菌标准菌株接种至酸奶、乳饮料及培养基中,设置不同的储藏温度、pH,定期测定储藏过程中大肠杆菌含量变化情况。[结果]随着储藏时间延长,不同储藏温度（4℃和25℃）,不同pH(4.2和3.6)的酸奶和乳饮料中大肠杆菌含量均减少,相对于储藏于4℃的产品,储藏于25℃的产品中菌含量降低更快;当产品pH为3.6时,菌含量减少速率高于pH为4.2的产品。将大肠杆菌置于不同pH的培养基中培养,结果表明,当pH<3.8时,大肠杆菌的活性将会受到抑制,证明了pH对大肠杆菌的影响。[结论]本研究为实际生产加工过程中产品冷藏及脱冷条件下大肠杆菌的检验检测和产品质量控制提供理论依据和理论指导。     

青藏高原东部高寒沼泽湿地动态变化及其驱动因素研究

20世纪中后期以来,在全球气候变化和人类活动的影响下,青藏高原湿地生态系统变的极其敏感和脆弱。运用遥感与地理信息系统技术,以Landsat TM/ETM+/OLI遥感影像为主要数据源,解译了青藏高原东部甘南和川西北地区1991、2000、2010和2016年4个时期的沼泽湿地;利用转移矩阵和湿地动态度,分析了沼泽湿地的空间变化、转移方向和变化速率;采用景观指数,分析了沼泽湿地景观格局变化;结合气象数据和相关统计资料并利用灰色关联度法,分析了沼泽湿地变化的驱动因素。结果表明: 1)研究区沼泽湿地主要分布在东北部,1991-2016年4个时期的面积分别为6739.89、6231.39、5849.59和5649.35 km²,处于持续减少的状态,26年间面积共减少了1090.54 km²。2)26年来,研究区沼泽湿地的动态度从-7.54%减小至-3.42%,面积变化速率持续减慢,高寒草地是沼泽湿地转出和转入的主要类型。3)沼泽湿地的斑块数量先增加后减少,斑块密度持续增大,反映了沼泽湿地的破碎程度增高;最大斑块指数先降低后小幅升高,斑块形状指数先升高后小幅下降,反映了沼泽湿地的优势度降低,景观形状趋于复杂化;分离度指数先增大后小幅减小,聚集度持续降低,反映了沼泽湿地从单独紧凑的状态趋向离散化发展。4)人为因素是影响青藏高原东部沼泽湿地面积变化的首要原因,其次受到气候因素的影响,各因子影响力大小依次是牧业生产总值>国民生产总值(GDP)>人口数量>温度>蒸发量。沼泽湿地面积与各因子呈明显的负相关关系,面积随牧业生产总值、GDP、人口数量、温度和蒸发量的增加而减小。