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脂质体法是一种传统的向哺乳动物细胞导入外源基因的方法,然而其转染效率受多种因素影响。本研究将从脂质体和质粒DNA量、转染暴露时间以及混合孵育时间等四方面进行探索,以寻找最佳的转染体系。试验结果表明最佳转染体系为:脂质体1.25μL、DNA 0.7μg、脂质体-DNA混合孵育0 min以及转染暴露6 h。随后我们用优化过的转染体系对新生广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞进行转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)操作,获得了(26.45±2.11)%的转染率,并以此为核供体经体细胞核移植技术成功构建表达GFP的广西巴马小型猪克隆胚胎,同时证实转基因克隆胚的体外发育能力比得上非转基因克隆胚。这为我们构建用于人类疾病研究的基因修饰广西巴马小型猪奠定了基础。 相似文献
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绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1的克隆、表达谱分析及结合特征 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】克隆、组织特异性表达以及荧光结合特征分析绿盲蝽 (Apolygus lucorum Meyer-Dür)化学感受蛋白(chemosensory protein,CSP)。【方法】设计特异性引物,用RT-PCR技术克隆绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1,使用半定量RT-PCR和Real-time PCR技术对AlucCSP1组织特异性表达进行研究,在BL2(DE3)工程菌株中用pGEX-4T-1载体进行原核表达,并在GSTrap FF柱中纯化和去标签蛋白。使用bis-ANS作为荧光配基,研究AlucCSP1蛋白与58种气味标样和5种棉花次生代谢物质的结合特征。【结果】得到了绿盲蝽化学感受蛋白基因,命名为AlucCSP1(GenBank登录号:JN573217)。该序列阅读框全长393 bp,编码130个氨基酸残基,N端有一段长17个aa的信号肽,具有4个保守的半胱氨酸残基。绿盲蝽AlucCSP1几乎全部在雌虫触角中表达。构建pGEX/AlucCSP1原核表达载体,在BL21(DE3)工程菌株中表达出分子量约为39 kD的融合蛋白,用亲和层析法纯化、经凝血酶作用去除标签蛋白获得纯化的AlucCSP1蛋白,该蛋白与棉酚、单宁、槲皮素、芦丁水合物亲和力较强,结合常数分别为13.4、32.7、19.7、38.5 μmol•L-1。【结论】克隆得到绿盲蝽化学感受蛋白基因AlucCSP1,在雌性触角内特异表达,并进一步得到约13 kD的AlucCSP1纯蛋白。为研究AlucCSP1在绿盲蝽化学感器中的作用奠定了基础。 相似文献
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丛枝菌根(Arbuscular Mycorrhizae,AM)真菌是一类广泛分布于土壤生态系统中的有益微生物,能与大约80%的陆生高等植物形成共生体。由土传病原物侵染引起的土传病害被植物病理学界认定为最难防治的病害之一。研究表明,AM真菌能够拮抗由真菌、线虫、细菌等病原体引起的土传性植物病害,诱导宿主植物增强对病虫害的耐/抗病性。当前,利用AM真菌开展病虫害的生物防治已经引起生态学家和植物病理学家的广泛关注。基于此,围绕AM真菌在植物病虫害生物防治中的最新研究进展,从AM真菌改变植物根系形态结构、调节次生代谢产物的合成、改善植物根际微环境、与病原微生物直接竞争入侵位点和营养分配、诱导植株体内抗病防御体系的形成等角度,探究AM真菌在植物病虫害防治中的作用机理,以期为利用AM真菌开展植物病虫害的生物防治提供理论依据,并对本领域未来的发展方向和应用前景进行展望。 相似文献
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农业科技示范园区评价指标体系的设置与实证分析 总被引:10,自引:0,他引:10
从农业科技示范园区建设目标出发 ,在分析园区作用机制和大量实地调研的基础上 ,运用层次分析法 (analytichierararchyprocess)设置出农业科技示范园区的 4个层次共 36个具体评价指标 ;结合专家咨询法 (Delphi)测算出各层次指标的权重值 ;用该指标体系对两个园区做了具体评价分析 相似文献
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为构建芭蕉芋施肥模型和配方施肥提供依据,进行了芭蕉芋"3414"田间肥效试验.结果表明:施肥有利于植株生长,可增加分蘖,提高产量和淀粉含量,对根重影响较小;高氮有利于植株生长,不利于淀粉含量的增加,磷钾有利于产量和淀粉含量的提高.施肥模型为y=37301.6-19.6x1+125.1x2+78.9x3-0.07x21-0.80x22-0.17x23+0.24x1x2+0.20x1x3+0.05x2x3.贵州芭蕉芋主产区施肥要适量增施氮肥,补磷补钾,建议芭蕉芋最佳施肥量为N 360 kg/hm2、P 120.7 kg/hm2、K 315 kg/hm2. 相似文献
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[目的]对紫薇幼胚培养进行尝试性研究,探讨其适宜的生长分化条件。[方法]以紫薇(Lagerstroemia indica)幼胚为外植体,诱导其萌发并建立无菌系。在此基础上探讨了不同激素水平和培养方式对紫薇幼胚培养的影响。[结果]紫薇幼胚去种皮后易于萌发,其萌发率可达100%;启动培养基为MS+BA0.5+NAA0.5+sucrose3.0%+agar0.7%;丛生芽诱导培养基为MS+BA0.5+NAA0.1+sucrose3.0%+agar0.7%+椰乳10%;生根培养基为MS+BA0.5+IBA0.1+sucrose3.0%+agar0.7%+椰乳10%。[结论]该研究可为紫薇的后续优化育种提供技术参考。 相似文献