上海市肉鸽沙门氏菌的分离鉴定及流行血清型和耐药性分析

为了解上海市农贸市场肉鸽群体中沙门氏菌流行血清型和耐药情况,本试验于2011-2014年间从上海市各区农贸市场采集肉鸽新鲜粪便样本92份,用XLD平板和沙门氏菌属显色培养基分离疑似沙门氏菌,革兰氏染色镜检并进行生化试验,共获得沙门氏菌24株,分离率为26.1%。采用Kauffmann-White法和K-B纸片法对24株沙门氏菌进行血清型鉴定和16种抗生素的药敏试验。血清型鉴定显示,24株沙门氏菌可分为鼠伤寒（66.7%）、阿贡纳（25.0%）和科瓦利斯（8.3%）3种血清型。药敏试验结果显示,有75.0%（18株）的分离株表现出不同程度耐药,其中分离株对四环素和磺胺异唑耐药率最高,均达到62.5%,其次为链霉素（58.3%）、萘啶酸（50.0%）、氨苄西林（20.8%）。多重耐药菌株15株（62.5%）,耐4种抗菌药物的菌株最多,占16.7%（7株）。另外,分离菌株对头孢吡肟、头孢噻肟、头孢噻甲羧肟、亚胺培南、氧氟沙星等5种药物的敏感率为100.0%,对奥格门丁和环丙沙星有12.5%的中介敏感率。本研究结果表明,上海市肉鸽中沙门氏菌的携带率较高,且菌株多重耐药现象较严重,这为食品中沙门氏菌的防控工作带来较大的挑战和风险,肉鸽沙门氏菌的流行和耐药情况应值得密切关注。     

广东屠猪肉样品中大肠杆菌耐药性与毒力特征的分析

为分析广东地区屠猪肉中大肠杆菌(E.coli)药物敏感菌株的血清型、毒力基因和系统进化背景,本研究从屠猪肉样品中分离出112株E.coli,采用玻片凝集法鉴定血清型,琼脂稀释法测定10种抗菌药的敏感性,PCR方法检测7种毒力相关基因,多重PCR方法进行系统进化背景判定。结果显示,112株E.coli中,定型菌株95株,分别属于15种血清型,其中O65、O131、O8和O158为优势血清型。几乎所有菌株对氟苯尼考、多西环素和四环素高度耐药,而对头孢曲松高度敏感,其中多重耐药菌株多数耐5种以上药物,常见的多重耐药表型是氟苯尼考/氯霉素/多西环素/四环素/氨苄西林。PCR鉴定结果表明,含有毒力基因的菌株中38%至少具有两个毒力基因,其中EAST1+Stx2e和hlyF+Stx2e比较常见。比较常见的毒力基因为Stx2e和EAST1,STb基因仅在一株菌中检测到。多重PCR鉴定结果显示,屠猪肉样品中E.coli主要分布为共生型的A组和B1组。本研究为大肠杆菌病的控制和合理使用抗生素提供实验依据。     

Dot-ELISA检测H9亚型禽流感病毒的研究

本研究采用兔抗H9亚型禽流感病毒（AIV）IgG包被于硝酸纤维素膜,酶标羊抗兔IgG作二抗,建立检测H9亚型AIV的Dot-ELISA法。经方阵试验确定兔抗AIV IgG工作浓度为1∶400,酶标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶400。作者建立的Dot-ELISA对AIV的最小检测量为3.35×10-9g。Dot-ELISA与HA和HI、AGP及病毒分离法相比,检测63份临床疑似H9亚型AIV病料,Dot-ELISA检出32份(57.14%),HA和HI检出15份(23.81%),AGP检出11份(17.46%),病毒分离检出38份(60.30%)。用抗H9亚型AIV阳性血清可以阻断Dot-ELISA阳性反应,诊断膜片与鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性支气管炎病毒、产蛋下降综合征病毒不出现阳性反应,证明Dot-ELISA特异性好。分别置室温(25 ℃左右)、4 ℃和-20 ℃下保存1个月后,膜片诊断效果不变,对照反应均成立,该方法重复性好（重复符合率为93.9%）,操作简便（3 h内可完成）,不需要特殊检测仪器,结果客观,肉眼易于判断,是微生物和传染病及寄生虫病诊断标准化的新技术之一。     

散养湘黄鸡常见病的临床表现特点及其防制

湘黄鸡进行专业户(场)散养时，由于生产方式不同于舍饲群养，其生产环境、食物结构和易感病种类都必然发生变化。对此，笔者结合临床所遇病例进行了研究总结，对散养湘黄鸡的几种常发病的病因、病理、临床表现及防治特点等方面进行了介绍。     

如皋鸡EX-FABP基因遗传多态性及其与肌内脂肪含量的相关分析

以60周龄和自繁后的12周龄的如皋鸡作为试验材料,采用PCR-SSCP技术对细胞外脂肪酸结合蛋白（EX-FABP）基因进行单核苷酸多态性及遗传特异性分析。结果检测到2个SNP突变,分别为4271 G/A、4281 G/A突变,有3种基因型。最小二乘差异显著性检验结果表明,在60周龄时,AA型含量最高,显著高于AB型（P<0.05）;12周龄时,AB型含量最高,BB型最低;60周龄的肌内脂肪含量显著低于12周龄时的含量（P＜0.05）。     

猪伪狂犬病病毒gE抗体胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

以纯化的抗人红细胞单链抗体(ScFv)-猪伪狂犬病病毒(PRV)gE蛋白双功能融合蛋白为诊断抗原和胶体金标记物,以羊抗猪IgG包被硝酸纤维膜作为质控带,制作检测猪伪狂犬病毒gE抗体的双抗原胶体金试纸条。利用方阵滴定试验筛选出金标抗原最佳工作浓度为17.6μg,检测线诊断抗原最佳标记量为1.76μg,血清最佳稀释度为1∶10,作用时间15 min,与猪瘟病毒(CSFV)、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、猪布鲁菌(Brucella)阳性血清和PRVgE缺失疫苗接种的猪免疫血清检测线均不出现红色条带,与PRV标准阳性血清反应检测线出现红色条带。试纸条操作简单,肉眼于15 min内可判定结果;试纸条在室温保存6个月,其特异性和敏感性没有明显变化;与美国IDEXX和法国LSI gE-ELISA抗体检测诊断试剂盒检测结果比较,1 164份猪血清的符合率均为90.55%。制备的胶体金试纸条具有操作简便、敏感性和特异性较高的特点,可用于PRV野毒感染的快速筛查。     

犬病毒性肝炎的诊断与防制

详细闸达了犬病毒性肝炎的发病规律,临床症状,剖检变化以及实验室检查结果,提出了该病的具体防治措施,并介绍了犬病毒性肝炎疫苗,抗血清,康复犬的全血清,丙种球蛋白时预防本病有较好的效果。     

北京鸭FABP2基因多态性与体尺和屠体性状的相关性研究

本研究以12个全同胞家系共224只G2代北京鸭资源群体为试验材料,分别利用DNA序列测定和PCR-RFLP方法检测G1和G2代个体基因型。结果在北京鸭小肠脂肪酸结合蛋白(FABP2)基因中共发现4处单核苷酸多态性(SNPs),外显子3中1处SNP(92bp)可导致氨基酸的改变(Gly→Ser),G2代中该SNP产生3种基因型:AA、AB和BB,其频率分别为0.103、0.629和0.268,群体中A基因频率为0.417,B基因频率为0.583。最小二乘分析表明,BB基因型个体的体斜长、胫围和颈长显著高于AB基因型;BB基因型个体胫蹼重、肌胃重和翅重显著高于AA基因型和AB基因型;BB基因型个体头重显著高于AA基因型(P<0.05)。综上所述,FABP2基因外显子3中(92bp)的SNP与北京鸭的部分体尺和屠体性状显著相关,可作为北京鸭体尺和屠体性状标记辅助选择的分子标记。     

检测犬抗狂犬病毒抗体的胶体金免疫层析法的建立及应用

为建立一种简便快速的胶体金免疫层析方法(GICA)以用于检测犬抗狂犬病毒抗体,本研究运用间接反应一步法原理,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒用以标记抗犬IgG抗体形成金-抗犬IgG抗体复合物,制成金标结合垫,加上包被有狂犬病毒糖蛋白的硝酸纤维膜,即制成胶体金免疫层析试纸条.样品中狂犬病?　 毒抗体与金标记抗体结合后沿硝酸纤维素膜移动,与膜上的糖蛋白特异结合形成肉眼可见的红色线条.试验结果显示,GICA试纸条与抗狂犬病毒抗体有特异性反应,与犬瘟热病毒、犬细小病毒等的抗体无交叉反应;GICA与标准ELISA法比较的总符合率为99.4%.结果表明,GICA试纸条检测抗狂犬病毒抗体特异性强、成本低,操作简便,不需任何仪器,特别适用于野外以及现场使用.     

紫花苜蓿草渣及浆汁发酵研究

为有效利用紫花苜蓿Medicago sativa深加工工业所得的浆汁和草渣,对紫花苜蓿浆汁和草渣的发酵进行了初步研究。研究发现苜蓿浆汁发酵较草渣发酵更容易。适当添加葡萄糖和发酵汁可以促进发酵,但添加葡萄糖质量分数超过2%后,促进作用并不明显,添加浆汁和草渣发酵的葡萄糖的最适宜质量分数分别为1%和2%。适当提高发酵温度可以加速发酵,过高和过低的温度均不利于发酵的顺利进行,研究中最适宜的发酵温度为35℃。在试验所选取的3个不同发育时期(分枝期、开花期和结荚期)的发酵原料中,结荚期苜蓿的发酵效果最好。